苯酚：氯仿：异戊醇为什么要25:24:1？
通常，氯仿与异戊基发酵的比例为24：1。 苯酚，氯仿和异戊醇的比例也可以按25：24：1的比例使用。
提取DNA时，为了均匀混合，必须将容器摇动几次，并且在混合溶液中容易产生气泡，并且气泡会阻止相互作用。 异戊醇的添加降低了分子的表面张力，因此减少了萃取过程中泡沫的产生。
扩展资料酚:氯仿:异戊醇试剂是由水饱和酚、氯仿和异戊醇按125:24:1 的体积比混合而成的，主要用于RNA的提取等试验。苯酚使蛋白质变性，同时抑制了 RNase 的降解作用。
氯仿抽提加速有机相与液相分层，去除核酸溶液中的迹量酚。异戊醇减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。使用酚：氯仿：异戊醇抽提离心后的上层为含 RNA 的水相、中间为变性蛋白与 DNA，下层为有机溶剂相。静置后产品有分层现象，使用时将产品摇匀后用移液器吸取即可。
注意事项：酚:氯仿:异戊醇试剂有较强的腐蚀性，应尽量避免皮肤接触或吸入体内。如发现变为红色或棕色，表明已发生氧化，不能继续使用。
参考资料来源：百度百科-苯酚
参考资料来源：百度百科-氯仿
参考资料来源：百度百科-异戊醇
苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质，再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
使用苯酚抽提细胞
DNA
时，苯酚的作用是使蛋白质变性，同时抑制了
DNase
的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与
DNA
联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而
DNA
溶于水相。
氯仿的作用是克服酚的缺点加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。
(酚易溶于氯仿中)
用酚-氯仿抽提细胞基因组
DNA
时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么?因为异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡
产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含
DNA
的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
上层是水.
氯仿：使有机相和水相易分层,增加核酸得率,同时可除去脂类.
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1).氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡.
2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存.
1、氯仿的体积比水（也就是Trizol）略少，出现了乳化现象，补加一点氯仿再多静置一会儿即可；
2、使用的氯仿已经变质（如吸水等因素），造成乳化现象，所以不分层。
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