荧光素是什么?
荧光素本品为诊断用药，是一种染料，对正常角膜等上皮不能染色，但能对损伤的角膜上皮染成绿色，从而可显示出角膜损伤、溃疡等病变。本品流经小血管时，能在紫外线或蓝色光激发下透过较薄的血管壁和黏膜呈现绿色荧光，从而显示小血管行经和形态等，据此可供眼底血管造影和循环时间测定。本品几乎不能透过血脑屏障，但在结核性脑膜炎时脑脊液内含量有所增加，肌内注射后测定脑脊液内本品含量有助于对结核性脑膜炎的诊断和鉴别诊断。供诊断眼角膜损伤、溃疡和异物，眼底血管造影和循环时间测定。也用于术中显示胆囊和胆管，以及结核性脑膜炎的辅助诊断等。 "一滴8块钱！还要交检查费！"这是医院的价格规定的。不过说来也是比较贵，只要身体健康，钱财乃身外物。
二乙酸荧光素染料毒性不大。根据查询相关公开信息显示荧光染料与细胞的结合很稳定，它对细胞几乎没有毒性作用，并且不影响被标记细胞的细胞活力，CFDA-SE是细胞实验中用于细胞标记的合适标记物，标记后，能在细胞中维持24小时，适合对标记细胞较长时间的观测。
荧光强度与细胞内活性氧水平成正比，可快速、灵敏地检测卷烟烟气有害成分诱导的细胞氧化损伤程度。
原理意思是具有普遍意义的最基本的规律。
中文名称
2,7-二氯二氢代荧光黄二醋酸
中文别名
2',7'-二氯荧光素二乙酸酯2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯2,7-萤光素二醋酸酯
英文名称
2-(3,6-diacetyloxy-2,7-dichloro-9H-xanthen-9-yl)benzoic
acid
英文别名
2',7'-dichlorofluorescin
diacetateLeucodiacetyldichlorofluoresceinH2DCFDADCFH2,7-Dichlorodihydrofluorescein
diacetate2-(3,6-Diacetoxy-2,7-dichloro-9H-xanthen-9-yl)benzoic
acidH2DCFDA
[2',7'-Dichlorodihydrofluorescein
diacetate]
CAS号
4091-99-0
下游产品
CAS号
名称
4091-99-0
2,7-二氯二氢代荧光黄二醋酸
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B．由转化可知，-OH上的被CH3CO-取代，则发生取代反应，故B正确；
C.5-FAM中含酚-OH，而5-CFDA不含，则实验室可以利用FeCl3溶液半鉴别5-FAM与5-CFDA，故C正确；
D.1mol5-CFDA与足量NaOH溶液反应，消耗NaOH的物质的量为6mol，故D错误；
故选D．
一、如何搭配流式抗体荧光标记
流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多
A、 如何根据流式细胞仪搭配流式抗体
1） BD流式细胞仪（06版目录第614页）
流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点：
流式细胞仪有哪些激光。比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色，而选配的Calibur (FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光，可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。
不同型号的流式细胞仪的同样的一个通道检测荧光素的能力是不一样的，比如Calibur的FL3（第3通道）能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能检测PE-TexasRed, PE-Cy5, PerCP。Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。Calibur和LSR都能检测4个颜色，但是第4个通道检测荧光素是不一样的
搭配荧光素原则
搭配流式荧光素有2个原则：每个通道只能选择1种荧光素；各个通道之间的荧光素可以随意搭配，但需注意
1、每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488，或者选择了Alexa Fluro488就不能选FITC Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五个荧光素，但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。
2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。
比如常用的搭配是F I T C( F L 1 )＋P E（F L 2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4), 这个搭配组合可以更改成Alex Fluro(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4), 或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+Alex Fluro(FL4)，或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC(FL4)等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用。
纯化的原生质体需经活力测定后方可用于培养。活力测定的方法有：
1、根据形态待征判断其活力：原生质体呈绿色（若来源于叶片）及圆而鼓者为活原生质体。
2、荧光染料活体染色法：荧光素染料可自由透过细胞膜，在细胞内被酯酶水解为荧光素，后者不能自由透过细胞膜而滞留于细胞内，在荧光显微镜下根据荧光强度即可判断原生质体死活。
3、酚藏花红染色法：活原生质体能吸收呈红色，无活性的则不能吸收而无色。
