什么是一步法

其实一步法并非是两步法的改进，根据实验目的不同，有时两步法会更好。举个例子，如果想对同一样本同时扩增2个以上的基因，那么一步法是从RNA开始的， 即分别取相同量的RNA，然后逆转录，然后加入不同的primer PCR，方法固然简单，但逆转录酶很贵。如果两步法，可将RNA逆转录为cDNA，然后每次加入相同量的cDNA，再加不同的引物PCR，这样可比性强， 而且不需逆转录，直接PCR即可。当然，如果想快速获得某一种基因，当然一步法好。所以一步法和两步法各有优点，不能一概而论。

一般的定量PCR，是需要先抽提RNA，然后逆转录成cDNA，再开始定量PCR反应。

所谓的一步法，就是把逆转录这个过程，和定量PCR过程，放在一起完成了。抽提完RNA后，一步完成。

所谓一步法求戴维南等效电路，我们用标准的戴维南等效电路来说明：

要求戴维南等效电路，需要求出两个参数：Uoc、Req，这两个参数可以分开单独来求，也可以一步求出两个参数，一步求出两个参数称为“一步法”。

所谓一步法，实质上是求出一个表达式，表达式中直接含有Uoc和Req两个参数。针对上面的标准电路，显然存在：

U=Uoc-I×Req。

也就是端口（去掉R之后的端口）的VCR方程。只要求出这个方程，也就一步求出了Uoc和Req。

基于这个思路，我们可以在任何电路的端口外加电压U，设流出电流为I，然后求出VCR表达式即可。

根据KCL得到3Ω电阻电流为：i1+3i1-I=4i1-I，方向向下。

KVL：6×i1+3×（4i1-I）=6，i1=（I+2）/6。

所以：U=3×（4i1-I）=12i1-3I=12×（I+2）/6-3I=2I+4-3I=4-I。

比较上面的VCR标准式子，得到：Uoc=4V，Req=1Ω。

现在用分步法来求Uoc和Req，从而用以验证结果。

a、b端开路，则3Ω电阻电流根据KCL可得到为：i1+3i1=4i1。

所以：6×i1+3×4i1=6，i1=1/3（A）。

所以：Uoc=Uab=3×4i1=3×4×1/3=4（V）。

电压源短路。从a、b外加电压U，设流入电流为I（注意这里电流I的方向和一步法时的电流方向相反）。

3Ω电阻电流为4i1+I，方向向下。根据KVL：

6i1+3×（4i1+I）=0，i1=-I/6。

所以：U=-6i1=-6×（I/6）=I，因此：Req=Rab=U/I=1（Ω）。

或者：U=3×（4i1+I）=3×[4×（-I/6）+I]=3×（I-2I/3）=I。Req=1（Ω）。

结果一致。因此对于电路只要存在戴维南等效电路，都可以用一步法来求，没有什么条件限制。