聚乙二醇的主要用途

HLA： 人类白细胞抗原

PEG： 聚乙二醇，用于原生质体融合

还有其他的

1． DNA、RNA：脱氧核糖核酸、核糖核酸。遗传物质

2． AIDS：艾滋病

3． HIV： 人类免疫缺陷病毒

4． HLA： 人类白细胞抗原

5． ATP：三磷酸腺苷，生物体生命活动的直接能源物质。 ATP ADP＋Pi＋能量

6． NADP+：辅酶Ⅱ。 NADPH：还原型辅酶Ⅱ 在光合作用过程中可把电能转化为活跃的化能，NADPH具有强的还原性和活跃的化学能两个特性。反应式如下：

NADP+＋2e＋H+ NADPH

7． PEP： 磷酸烯醇式丙酮酸 CO2＋PEP C4

8． C3植物：小麦、水稻、大麦、大豆、马铃薯、菜豆和菠菜

C4植物：玉米、甘蔗、高粱、苋菜

9． PEG： 聚乙二醇，用于原生质体融合

DNA制品中的污染（蛋白质、酚、氯仿、乙醇、EDTA、SDS)

解决办法：

增加酶反应体积以稀释可能的抑制剂

增加酶作用单位(过多的甘油抑制酶活性)

延长反应时间 （1-16小时）

酶的星号活性*:改变酶切条件时酶的识别位点专一性下降的现象.

限制性内切酶识别特异性放宽.

EcoRⅠ在正常情况下识别GAATTC序列发生切割,但如果缓冲液中甘油浓度超过5%,其识别位点发生松动,可在AATT处发生切割,EcoRⅠ这种特殊的识别能力叫做星活性,用EcoRⅠ*表示.星活性可造成位点切割机率不等,降解不完全.

影响因素：甘油浓度12-20%,酶与DNA比例,离子强度,45%聚乙二醇(PEG),有机溶剂,8%二甲基亚枫,二价阳离子,12%乙醇.

沉淀法

沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质，进而导致有效成分的溶解度发生变化。

1、盐析法

盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

2、有机溶剂沉淀法

有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。

3、蛋白质沉淀剂

蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。

4、聚乙二醇沉淀作用

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。

5、选择性沉淀法

根据各种蛋白质在不同物理化学因子作用下稳定性不同的特点，用适当的选择性沉淀法，即可使杂蛋白变性沉淀，而欲分离的有效成分则存在于溶液中，从而达到纯化有效成分的目的。

吸附层析

1、吸附柱层析

吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。

2、薄层层析

薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸层析操作进行展层。

3、聚酰胺薄膜层析

聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能导致分离物质达到分离目的。

离子交换层析

离子交换层析是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。

凝胶过滤

凝胶过滤又叫分子筛层析，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。

亲和层析

亲和层析的原理与众所周知的抗原-抗体、激素-受体和酶-底物等特异性反应的机理相类似，每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中，特异的底物（S）才能和一定的酶（E）结合，产生复合物（E-S）一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力，并产生复合物。而亲和层析与酶-底物反应不同的是，前者进行反应时，配体（类似底物）是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质上亲和层析是把具有识别能力的配体L（对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等）以共价键的方式固化到含有活化基团的基质M（如活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂M-L，或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此，当把固相载体装人小层析柱（几毫升到几十毫升床体积）后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体有亲和力的物质S就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效应等作用吸附到固相载体上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来，并形成了第一个层析峰。然后，恰当地改变起始缓冲液的pH值、或增加离子强度、或加入抑制剂等因子，即可把物质S从固相载体上解离下来，并形成了第M个层析峰。显然，通过这一操作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体具有亲和力（其大小有差异）时，采用选择性缓冲液进行洗脱，也可以将它们分离开。用过的固相载体经再生处理后，可以重复使用。

上面介绍的亲和层析法亦称特异性配体亲和层析法。除此之外，还有一种亲和层析法叫通用性配体亲和层析法。这两种亲和层析法相比，前者的配体一般为复杂的生命大分子物质（如抗体、受体和酶的类似底物等），它具有较强的吸附选择性和较大的结合力。而后者的配体则一般为简单的小分子物质（如金属、染料，以及氨基酸等），它成本低廉、具有较高的吸附容量，通过改善吸附和脱附条件可提高层析的分辨率。

聚焦层析

聚焦层析也是一种柱层析。因此，它和另外的层析一样，照例具有流动相，其流动相为多缓冲剂，固定相为多缓冲交换剂。

聚焦层析原理可以从pH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三方面来阐述。

1、PH梯度溶液的形成

在离子交换层析中，pH梯度溶液的形成是靠梯度混合仪实现的。例如，当使用阴离子交换剂进行层析时，制备pH由高到低呈线性变化的梯度溶液的方法是，在梯度仪的混合室中装高pH溶液，而在另一室装低pH极限溶液，然后打开层析柱的下端出口，让洗脱液连续不断地流过柱体。这时从柱的上部到下部溶液的pH值是由高到低变化的。而在聚焦层析中，当洗脱液流进多缓冲交换剂时，由于交换剂带具有缓冲能力的电荷基团，故pH梯度溶液可以自动形成。例如，当柱中装阴离子交换剂PBE94（作固定相）时，先用起始缓冲液平衡到pH9，再用含pH6的多缓冲剂物质（作流动相）的淋洗液通过柱体，这时多缓冲剂中酸性最强的组分与碱性阴离子交换对结合发生中和作用。随着淋洗液的不断加入，柱内每点的pH值从高到低逐渐下降。照此处理J段时间，从层析柱顶部到底部就形成了pH6～9的梯度。聚焦层析柱中的pH梯度溶液是在淋洗过程中自动形成的，但是随着淋洗的进行，pH梯度会逐渐向下迁移，从底部流出液的pH却由9逐渐降至6，并最后恒定于此值，这时层析柱的pH梯度也就消失了。

2、蛋白质的行为

蛋白质所带电荷取决于它的等电点（PI）和层析柱中的pH值。当柱中的pH低于蛋白质的PI时，蛋白质带正电荷，且不与阴离于交换剂结合。而随着洗脱剂向前移动，固定相中的pH值是随着淋洗时间延长而变化的。当蛋白质移动至环境pH高于其PI时，蛋白质由带正电行变为带负电荷，并与阴离子交换剂结合。由于洗脱剂的通过，蛋白质周围的环境pH 再次低于PI时，它又带正电荷，并从交换剂解吸下来。随着洗脱液向柱底的迁移，上述过程将反复进行，于是各种蛋白质就在各自的等电点被洗下来，从而达到了分离的目的。

不同蛋白质具有不同的等电点，它们在被离子交换剂结合以前，移动之距离是不同的，洗脱出来的先后次序是按等电点排列的。

3、聚焦效应

蛋白质按其等电点在pH梯度环境中进行排列的过程叫做聚焦效应。pH梯度的形成是聚焦效应的先决条件。如果一种蛋白质是加到已形成pH梯度的层析柱上时，由于洗脱液的连续流动，它将迅速地迁移到与它等电点相同的pH处。从此位置开始，其蛋白质将以缓慢的速度进行吸附、解吸附，直到在等电点pH时被洗出。若在此蛋白质样品被洗出前，再加入第二份同种蛋白质样品时，后者将在洗脱液的作用下以同样的速度向前移动，而不被固定相吸附，直到其迁移至近似本身等电点的环境处（即第一个作品的缓慢迁移处）。然后两份样品以同样的速度迁移，最后同时从柱底洗出。事实上，在聚焦层析过程中，一种样品分次加入时，只要先加入者尚未洗出，并且有一定的时间进行聚焦，剩余样品还可再加到柱上，其聚焦过程都能顺利完成，得到的结果也是满意的。

气相色谱

多种组分的混合样品进入色谱仪的气化室气化后呈气态。当载气流入时，气化的物质被带人色谱柱内，在固定相和流动相中不断地进行分配．在理想状态下，溶质于气-液两相间的分配可用分配系数Kg描述。当分配系数小时，溶质在柱中就停留时间短，也即滞留因子（Rf）大，所以它将首先从色谱柱流出而进入鉴定器，经放大系统放大后，输出讯号便在记录仪中自动记录下来，这时呈现的图形为色谱图，亦称色谱峰；当分配系数大时，溶质在柱中停留时间就长，其色谱图在记录仪上后出现。由于不同物质有不同的分配系数，所以将一混合样品通过气-液色谱柱时，其所含组分就可得到分离。

气相色谱柱效率高、分辨率强的重要原因是，理论塔板数（N）大。毛细管气相色谱的N可达105~6。增加理论塔板数和降低样品组分的不同分子在展层中扩展程度（速率理论），就可明显地提高柱效。以下将讨论塔板理论和速率理论对柱效的影响：

1、塔板理论

塔板理论是将色谱假设为一个蒸馏塔，塔内存在许多块塔板，样品各组分在每块塔板的液相和气相间进行分配，在柱内塔板间高度H（即理论塔板高度）一定时，在有效范围内，柱子越长，N也就越大，样品各组分分配次数也就越多，分辨率自然提高；若柱长一定时，塔板理论高度H越小，就越能增加样品各组分的分配次数，进而提高其分辨率。因此 N=L/H 在线性分配和忽略塔板间纵向扩散的条件下，根据样品组分的保留时间tr、峰宽W或半峰高宽度2ΔXi，Martin导出了计算N的公式，样品组分峰宽度值越小，理论塔板数越高。实际上，进行色谱分析时，峰宽度值的大小是衡量分辨率高低的一个尺度。

2、速率理论

根据塔板理论，在H（塔板理论高度）一定时，增加柱长可以提高柱效。但是，柱子过长，将会延长分析时间，降低检测的灵敏度。所以实践中应设法降低H，提高柱效。

速率理论主要是分析同一样品的不同分子，在色谱柱中迁移速度差异所引起色谱峰的扩张程度。而涡流扩散、纵向分子扩散和质量传递（包括流动相传质和固定相传质）等因子与速率理论值（H）的密切关系可用下面的公式表示：

H=A+B/U+C

涡流扩散（A）是由于样品组分随着流动相的移动通过固定相颗粒不均匀的色谱柱时，引起同一组分的不同分子在流动相中形成不规则的"涡流"，致使色谱峰变宽、柱效降低。如固定相颗粒均匀、直径小时，则可降低"涡流"现象发生。

纵向扩散（B/U）亦称分子扩散项。纵向扩散与样品分子在色谱柱中的流畅程度（有无阻碍）、流动相的速度（U）等因子有关。因此，降低溶质在流动相中扩散系数和缩短溶质在流动相中停留时间，均可降低纵向扩散。

传质阻力（C）：溶质分子在气相与气液界面进行交换所受的阻力，以及在进入固定相液膜传递的差异性统称传质阻力。传质阻力分别与固定相颗粒直径的平方和固定相液膜厚度成正比关系。

高效液相色谱

高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。

高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。

1、进样系统

一般采用隔膜注射进样器或高压进样器完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。

2、输液系统

该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47~4.4×107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、pH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离。

3、分离系统

该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管），内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）。固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基团基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样），或者用化学法偶联各种基团（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。

另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。

再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。

4、检测系统

高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。

（1）紫外检测器

该检测器适用于对紫外光（或可见光）有吸收性能样品的检测。其特点：使用面广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为10-10?g/ml）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。

（2）示差折光检测器

凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测。目前，糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低（检测下限为10-7?g/ml），流动相的变化会引起折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。

（3）荧光检测器

凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏度很高（检测下限为10-12～10-14?g/ml），痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。

（5）数据处理系统

该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。

（2） 氨基乙酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。避免吸入尘埃。

（3） X-半乳糖 (X-gal)：对眼睛和皮肤有毒性。使用粉剂时遵循常规注意事项。应注意的是，X-gal 溶液是在一种有机溶剂（DMF）中制备的。

（4）β-半乳糖苷酶：有刺激性，可产生过敏反应。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。

（5）苯二胺 ：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（6）苯酚：有剧毒性和高度腐蚀性，可致严重烧伤。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好合适的手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内操作。若有皮肤接触药物，可用大量清水冲洗，并用肥皂和水清洗，不要用乙醇洗。

（7）苯甲基磺酰氟化物(PMSF)：为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂。对上呼吸道的黏膜、眼睛和皮肤有极大损害。戴好合适的手套和护目镜，在通风橱内操作。万一眼睛或皮肤接触到此药品，立即用大量的水冲洗，丢弃被污染的衣物。

（8）苯甲酸：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，不要吸入。

（9）苯甲酸苄酯：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。避免接触眼睛。戴好合适的手套和护目镜。

（10）苯乙醇：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，远离火源、火花和明火。

（11）丙烯酰胺（未聚合的）：为一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收（有累积效应）。避免吸入尘埃。称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时，戴好手套和面罩，在化学通风橱内操作。聚合的丙烯酰胺是无毒的，但是使用时也应小心，因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺。

（12）蛋白酶K：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。

（13）碘化丙锭：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。可诱导突变并可能致癌。戴好手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内小心操作。

（14）碘乙酰胺：能碱基化蛋白质上的氨基，从而影响抗原的氨基酸序列分析。有毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作，勿吸入尘埃。

（15）叠氮化钠：有剧毒性，可阻断细胞色素电子转运系统。含此药物的溶液要明确标记。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，并小心使用。此药品为氧化剂，故保存时要远离可燃物品。

（16）多聚甲醛：有剧毒。易通过皮肤吸收，并对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有严重破坏性。避免吸入尘埃。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。多聚甲醛是甲醛的未解离形式。

（17）3，3’-二氨基联苯胺四氢氯化物：为一种致癌剂，操作时要非常小心。避免吸入气体。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（18）二甲苯：可燃，高浓度有麻醉作用。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。始终远离热源、火花和明火。

（19）二甲苯蓝：见二甲苯。

（20）二甲次胂酸钠：可能为致癌剂，并含有砷，有剧毒性。戴好手套和护目镜，只在通风橱内操作。

（21）N，N-二甲基酰胺(DMF)：刺激眼睛、皮肤和黏膜。可通过吸入，摄入，和皮肤吸收发挥其毒性。慢性吸入可导致肝、肾损害。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。

（22）二甲亚砜(DMSO)：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。DMSO为可燃物保存于密封容器中。远离热源、火花和明火。

（23）二硫苏糖醇(DTT)：为一强还原剂，有恶臭味。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。当使用固体形式或高浓度溶液时，戴好手套和护目镜并在通风橱内操作。

（24）4ˊ，6-二脒基-2ˊ-苯基吲哚盐酸(DAPI)：可能为一种致癌剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。可引起刺激。避免吸入。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。

（25）放射性物质：当计划的一个实验涉及放射性物质的使用时，应包括以下内容：同位素的理化性质（如半衰期，放射型，辐射能量），辐射物质的化学形式，其辐射度（具体的活性）总量，化学浓度，需要使用多少就预定多少，使用放射性物质时，要始终戴好手套和护目镜，穿实验室工作服。X和γ射线为由仪器产生放射性物质辐射出的短波电磁波，它们会丛放射源辐射出来或聚成光束。它们的潜在危险决定于暴露于其中的时间、强度和它的波长。。

（26）放线菌素D：是一种畸胎剂和致癌剂，有剧毒。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害，甚至是致命的。应避免吸入。戴好手套和护目镜，并始终在化学通风橱内操作，放线菌D见光分解。

（27）高压玻璃器皿时要格外小心。高压锅和金属容器中的玻璃器皿，宜放入金属网中或蒲氏隔板中。在真空状态下使用玻璃器皿，如真空收集器、干燥设备或氩气条件下的反应器等，要谨慎操作。戴好护目镜。

（28）过二硫酸铵：对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的破坏性。吸入可致命。戴好手套和护目镜，穿好防护服。必须在化学通风橱内操作。操作后要彻底清洗。

（29）过氧化氢：有腐蚀性、毒性，对皮肤有强损害性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，只在化学通风橱内操作。

（30）环乙酰亚胺：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，只在化学通风橱内操作。

（31）磺基蓖麻酸（二水合物）；对黏膜和呼吸系统有极大破坏性。不要吸入粉尘，戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。

（32）甲氨蝶呤(MTX)：为一种致癌剂和致畸胎剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。暴露于其中可导致胃肠反应，骨髓抑制，肝或肾损害。戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。

（33）甲醇：有毒，可致失明。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。要有足够的通风以减少挥发气。不要吸入这些气体。戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。

（34）甲基磺酸乙酯(EMS)：为一种可诱导机体突变和突变和致癌的挥发性有机溶剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

（35）甲醛：有剧毒性和挥发性。也是一种致癌剂。可通过皮肤吸收，对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激或损伤。避免吸入气体。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。

（36）甲酸：有剧毒，对黏膜组织、上呼吸道、眼睛、皮肤有极大的损伤。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（37）甲酰胺：可导致畸胎。其挥发的气体刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。操作高浓度甲酰胺时要在通风橱内操作。尽可能将反应的溶液盖住。

（38）焦磷酸钠：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。

（39）焦碳酸二乙酯(DEPC)：是一种潜在的蛋白质变质剂，且为可疑的致癌剂。开启时瓶口不要指向操作者或其他人。瓶内压可导致喷溅。戴好手套并穿实验室工作服，在通风橱内操作。

（40）聚丙烯酰胺：无毒性，但仍应谨慎使用，因为其中可能含有少量未聚合的物质。

（41）聚乙二醇(PEG)：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。避免吸入粉末。戴好手套和护目镜。

（42）菌种（运输）：健康教育福利部门根据运输器具将各种细菌划分为不同的类别。大肠杆菌的非病原种（K12）和枯草芽孢杆菌为第一类，正常运输条件下是无危害或危害性很微小的。但是沙门菌、嗜血杆菌、链霉菌和假单孢菌的一些菌种为第二类。第二类细菌为“一般潜在危害剂：能造成不同严重程度的疾病，但在普通实验室技术下可操作。”

（43）抗淬灭剂：见苯二胺。

（44）考马斯亮蓝：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（45）联结剂(DMP)：刺激眼睛、皮肤和黏膜。可通过吸入，摄入，皮肤吸收发挥其毒性。不要吸入气体，戴好手套、面罩和护目镜。

（46）链霉素：有毒性，怀疑为致癌剂和突变诱导剂。可导致过敏反应。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（47）亮肽素；吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（48）邻苯二甲酸二丁酯：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入气体。

（49）磷酸二氢钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（50）磷酸：高腐蚀性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（51）磷酸钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘，在通风橱内操作。

（52）磷酸钠：刺激眼睛和皮肤。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。

（53）磷酸氢钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（54）硫氰酸胍：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（55）硫氰酸胍盐；见硫氰酸胍。

（56）硫酸：剧毒性，对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的损伤。可造成烧伤，与其他物质（如纸）接触可能引发火灾。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。

（57）硫酸镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（58）氯仿：刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。为一种致癌剂。有肝、肾毒性。有挥发性。避免吸入蒸汽。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（59）氯化铵：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（60）氯化钙：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（61）氯化钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（62）氯化锂：刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（63）氯化镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（64）氯化锰：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（65）氯化铁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（66）氯化锌：有腐蚀性，对胎儿有潜在危险。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（67）3-（N-吗啉）-丙磺酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（68）没食子酸丙酯(NPG0：见苯甲酸。

（69）柠檬酸钠：见柠檬酸。

（70）柠檬酸：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（71）硼酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（72）羟胺：有腐蚀性和毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（73）氢氧化铵：为氨的水溶液。具有腐蚀性。操作时要小心。氨气可从氨水中挥发出来，具有腐蚀性、毒性和爆炸性。戴好手套。必须在通风橱内操作。

（74）氢氧化钾：剧毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。溶液为强碱性，当心使用。戴好手套。

（75）氢氧化钠：溶液有剧毒，强碱性，当心使用。戴好手套。其他所有高浓度碱溶液都应以类似方式操作。

（76）秋水仙碱：有剧毒，可致命，可导致癌症和可遗传的基因损害。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。不要吸入粉尘。

（77）β-巯基乙醇：吸入或皮肤吸收可致命，摄入有害。。高浓度溶液对黏膜、上呼吸道、皮肤和眼睛有极大损害。β-巯基乙醇有难闻气味。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（78）去氧胆酸钠：刺激黏膜和呼吸道。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。使用粉末时，戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。

（79）溶剂；谨慎操作。

（80）溶菌酶：对黏膜有腐蚀性。戴好手套和护目镜。

（81）三氯乙酸：有很强的腐蚀性。戴好手套和护目镜。

（82）三乙胺：有剧毒，易燃。对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有强腐蚀性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。

（83）三乙醇胺：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。

（84）十二烷基磺酸钠(SDS)：有毒性和刺激性，有严重损伤眼睛的危险。。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。

（85）双丙烯酰胺：是一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收，避免吸入，在称量时，戴好手套和护目镜。

（86）四环素：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（87）N，N，N’，N’-四甲基乙二胺：对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有极大损伤。吸入可致命，长时间接触可产生严重刺激或烧伤。戴好手套和护目镜。穿防护服，必须在通风橱内操作。使用完毕要彻底清洗。易燃性，其挥发气体可到达一定距离，形成引燃源，瞬间发生火灾。远离热源、火花和明火。

（88）四水合乙酸镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（89）四唑氮蓝；有危险性，小心操作。

（90）碳酸钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（91）同位素125I；在甲状腺，为一潜在的健康杀手。无论何种形式的同位素都用铅板遮挡。操作同位素时，要戴一到两副手套，着取决于同位素的用量和所进行的操作难度。

（92）胃酶抑素：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（94）硝酸：具有挥发性，操作时要小心。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。

（95）硝酸银：强氧化剂，小心操作。皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。与其他物质接触会发生爆炸。

（96）溴酚蓝：皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（97）5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷：对眼睛和皮肤有毒性。皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（98）5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸酯：有毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（99）5-溴-2’-脱氧脲苷；为致畸胎剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（100）溴乙啡啶：为一种强致突变剂，有毒性。避免吸入粉尘。操作含此染料的溶液时，戴上手套。

（101）血（人类）和血产品和爱普斯坦病毒：其中可能含有隐藏的传染性物质，如乙型肝炎病毒、HIV，可能造成实验上室传染。戴一次性手套，使用吸枪式吸管，在生物安全橱中、操作，防止形成悬浮和污染。污染的塑料器皿在丢弃前要高压处理；污染的液体高压处理或丢弃前用漂白粉处理至少30min。

（102）N，N’-亚甲基丙烯酰胺：为毒药，作用于中枢神经系统。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。

（103）亚精胺：有腐蚀性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（104）亚铁氰化钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。在通风橱内相当谨慎地操作。远离强酸。

（105）盐酸：有挥发性。吸入，摄入，皮肤吸收可致命。对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有极大损害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（106）盐酸胍：刺激黏膜、上呼吸道、皮肤和眼睛。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（107）盐酸胍盐：见盐酸胍。

（108）乙醇：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（109）乙基亚硝基脲：见N-乙基-N-亚硝基脲

（110）N-乙基-N-亚硝基脲（ENU）：有致癌性，为潜在的突变诱导剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。用1ml/LNaOH溶液清洗所有接触过ENU的物品。

（111）乙酸铵：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（112）乙醇胺：有毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。具有高腐蚀性，并可与酸发生强烈反应。

（113）乙酸：使用时要非常小心。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（114）乙酸钠：见乙酸。

（115）乙酸铀酰：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。

（116）异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（117）异丁烯酸酯：有毒。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入其气体。

（118）异硫氰酸胍盐：见硫氰酸胍盐。

（119）抑肽酶：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤还可导致过敏反应。暴露其中可引起胃肠反应，肌肉疼痛，血压改变或支气管痉挛。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘，必须在通风橱内操作。

（120）月桂酰基氨酸钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。

CTAB

(hexadecyltrimethylammonium

bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L

NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

注:CTAB溶液在低于15℃

时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。

一、CTAB提取缓冲液的经典配方:

Tris-HCl

(pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏

EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性

NaCl

提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中

CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离

β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。

二、CTAB提取缓冲液的改进配方:

(1)

PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染同时它也能和多糖结合，有效去除多糖

(2)

蛋白质的去除:酚/氯仿抽提使用变性剂变性(SDS、异硫氰酸胍等)高盐洗涤蛋白酶处理核酸分离，纯化

(3)多糖的去除:高盐法:用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M

NaCl，高盐可溶解多糖。用多糖水解酶将多糖降解。在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用，从而去除多糖。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA:在500

μL

DNA液中加入200μl

20%

PEG8000

(含1.2

M

NaCl)，冰浴20min.核酸分离，纯化

(4)

多酚的去除:在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂:β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂:如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合

(5)

盐离子的去除:70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸，其它的杂质均被洗掉，达到纯化DNA的目的另一种方式加入1/10体积的NaAc(pH5.2,3M)，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀RNA吸附或沉淀后应用70%的乙醇洗涤，以除去盐离子等若长期储存建议使用TE缓冲液溶解TE中的EDTA能螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNasepH值为8.0，可防止DNA发生酸解。

三、基因组DNA提取常见问题

DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质。DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应，DNA中残留有金属离子，有RNA的存留。对策:重新纯化DNA，去除蛋白、多糖、多酚等杂质，重新沉淀DNA，让酒精充分挥发，增加70%乙醇洗涤的次数(2-3次)，加入RNase降解RNA。

(1)DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。DNA提取常见问题:材料不新鲜或反复冻融、未很好抑制内源核酸酶的活性、提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断，外源核酸酶污染反复冻融。尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融，液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液。在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量，细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌。将DNA分装保存于缓冲液中,避免反复冻融。

(2)DNA降解，DNA提取常见问题。实验材料不佳或量少，破壁或裂解不充分，吸附或沉淀不完全，洗涤时DNA丢失。尽量选用新鲜(幼嫩)的材料，动植物要匀浆研磨充分G+菌，酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁。高温裂解时，时间适当延长(对于动物细胞,细菌可增加PK的用量)。增加吸附的时间、或低温沉淀小心操作。

介绍

1。生物体都有一个共同的物质基础和结构基础。

2。从结构看，除清除病毒，生物体都是由细胞构成。细胞是生物体的结构和功能的基本单元。

3。新陈代谢是在活细胞的化学变化序列的总称，是所有生命有机体的基础。

4。生物体的压力，从而可以适应周围环境。

5。这些微生物的生长，发育和繁殖的现象。

6。生物的遗传和变异特性的不同品种基本稳定，但也继续发展。

7。机体能适应一定的环境，也影响环境。

章生命的物质基础

8。生物体的化学元素组成，可以发现在无机性质，而不是化学元素是独特的生物圈，事实证明，生物和非生物世界的团结。

9。组成的有机体的化学元素，在体内和无机性质的含量变化很大，这一事实表明，与非生物圈生物圈也有差异。

10。所有的各种生物的生命活动，绝对不能离开水。

11。碳水化合物构成机体的重要组成部分，细胞，生物的生命活动的主要能源物质是能量的主要来源。

12。脂类，包括脂肪，脂质，和甾醇等，这些物质通常在生物体中发现的。

13。蛋白质是在细胞中的有机物，所有的生命活动不能从蛋白质中分离出来。

14。核姚明和磺胺类猿权杖囊糯镥左杂谏罚款囊糯湟中京偷了鞍字真正的满意的羌族铣随身携带的面包屑匾第一餐的日子谩？

15。组成生物体的化合物是不能够单独完成某一种生活，只有在按照一定的有机组织起来，以表现出的细胞和生物体的生命现象。该单元格是这些物质的形式的基本结构。

生命的基本单位 - 细胞

16。各种代谢活动，在活细胞的细胞膜的结构和功能是密切相关的。在此结构中膜有一定的流动性，特性，并与选择性渗透的功能。

17。的支持和保护的植物细胞的细胞壁。

18。细胞质基质是什么？活细胞的代谢，代谢的主要场所，提供必要的物质和一定的环境条件下。

19。线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。

20。叶绿体进行光合作用的绿色植物叶肉细胞器。

21。内质网的蛋白质，脂类和碳水化合物的合成，但也作为传输信道等的蛋白质。

22。核糖体是细胞内蛋白质合成的场所。

23。高尔基体细胞和细胞分泌物的形成，主要是蛋白质加工和转运植物细胞的分裂，高尔基体和细胞壁的形成。

24。染色质与染色体的细胞在不同的时间与物质的两种形式。

25。细胞核是遗传物质储存和复制的场所，是细胞??遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。

26。细胞结构的一部分，彼此不是孤立的，而是相互密切的联系，协调，一个细胞就是一个有机统一的整体，细胞只有保持完整性的各种生命活动的，能够正常完成。

27。细胞分裂方式增殖，细胞增殖机体的生长，发育，繁殖和遗传基础。

28。细胞有丝分裂的重要意义（特征），母细胞的染色体在复制后后完全平均分配到两个子细胞中去，从而之间的亲生父母和的后代保持稳定的遗传生物遗传性状的重要意义。

29。细胞分化是一个持久的变化，在这个过程中发生的整个生命周期的有机体，而是要最大限度的胚胎。

30。高度分化的植物细胞仍然有能力发展成为整个的植物，保持全能。

章生物的新陈代谢

31。代谢的基本特征是生物，生物和非生物的最本质的区别。

32。酶是活细胞，以产生一类有机化合物，其特征在于，所述的酶是具有生物催化的蛋白质，少量的酶是RNA。

33。的效率和特异性的酶催化反应中，并且需要适当的条件，如温度和pH值。

34。 ATP是代谢所需的能量的直接来源。

35。光合作用的绿色植物叶绿体，利用光能的有机物质，所储存的能量成二氧化碳和水并释放出氧气。光合作用氧释放所有的水。

36。的渗透产生必须具备两个条件：首先，用半透膜，该层上的半透膜两侧的溶液具有浓度差。

37。成熟的区域？植物根的表皮细胞吸收矿质元素，水的渗透吸收是两个相对独立的过程。

38。碳水化合物，脂类和蛋白质可以转化的，并且是有条件的相互限制。

39。高等多细胞动物体细胞内环境的外部环境，只有通过物质的交换。

40。正常机体的神经系统和体液的调节，通过活动的各种器官和系统的协调工作，共同维护一个相对稳定的环境，在国家，所谓的稳定状态。稳定状态的机构来进行正常的生命活动的必要条件。

41。生物，呼吸的生理意义表现在两个方面：首先，生物体的生命活动所需的能量，二是身体中的其他化合物的合成提供原料。规管的活动的生活

章

42。向光性实验：感受光刺激胚芽鞘尖端尖端的网站，而在下面的章节部分的光线弯曲。

43。生长素的植物生长往往具有双重性质。这是有关与生长素浓度水平和类型的植物器官。在一般情况下，低浓度下促进生长，高浓度抑制生长。

44。番茄（黄瓜，辣椒，等）上的雌蕊涂覆有一定浓度的生长素的溶液可用子果没有授粉。

45。植物的生长和发展的过程，而不是由一个单一的激素的调节，而是由多种激素的共同协调监管。

46。下丘脑是人体调节内分泌活动的枢纽。

47。相关激素之间的协同作用和拮抗作用。

48。神经系统调节动物体内的活动是一种反射。反射活动的结构基础反射弧。

49。神经元受到刺激产生兴奋和传导兴奋，兴奋性神经元和神经元之间通过突触传递兴奋在神经元之间传递只在一个方向。

50。在中枢神经系统的调节和高等动物生理活动的大脑皮层高级中枢。

51。建立在动物身上获得的性行为的主要方式是一种条件反射。

52。判断和推理是动物性的最高级形式获得的发展，大脑皮质的功能活动，还通过学习获得的。

53。动物行为学，神经调节，激素调节神经调节协调作用仍是处于优势地位。

54。动物行为的神经系统，内分泌系统和运动器官共同协调下形成的。

章生物的生殖和发育

55。有性繁殖产生的后代的遗传特性的父母有更大的生活能力和可变性的生存与进化生物学意义。

56。营养繁殖使后代能够保持性状的父母。

57。减数分裂，一半的生殖细胞中的染色体数目是小于原始生殖细胞。

58。减数分裂过程中联邦同源染色体之间彼此分开，这表明与若干独立染色体两条同源染色体朝向电极是随机的，对染色体的不同（非同源染色体）可以自由组合。

59。染色体数目减半的发生减数分裂过程中的减数第一次分裂。

60。一个精原细胞减数分裂，形成4个精子细胞，精子细胞，然后通过复杂的变化，精子的形成。

61。一个卵原细胞经过减数分裂，形成一个卵细胞。

62。有性繁殖的生物，减数分裂和受精前保持每一种生物的后代体细胞染色体数目不变，生物的遗传和变异是非常重要的

63。有性生殖的生物个体发育的起点，一个受精卵。

64。双子叶植物的成熟种子无胚乳，胚乳胚胎的胚和胚乳发育的过程中，存储在子叶后种子发芽需要吸收营养。

65。植物花芽的形成标志着生殖生长的开始。

66。高等动物??的个体发育，可以分为两个阶段的胚胎发育和胚胎后发育。胚胎发育是指受精卵发育成幼虫。后胚胎发育，孵化的幼虫从卵膜或母亲的身体从出生到性成熟个体的发展。

章遗传和变异

67。 DNA是物质的R型细菌产生稳定的遗传变化，噬菌体的各种性状是通过DNA后代，这两个实验证明DNA是遗传物质。

68。现代科学研究证明，比遗传物质DNA，RNA。因为绝大多数的遗传物质是DNA，因此，DNA是主要的遗传物质。

69。千变万化的顺序的基础上，构成每个DNA分子的特异性的碱基对的DNA分子，和特定的顺序构成的多样性。从分子水平上的生物多样性和特异性。

70。的遗传信息的传输是通过DNA分子的复制。

71。的独特的DNA分子的双螺旋结构提供了精确的用于复制的模板通过互补碱基配对，以确保一个副本，可以准确地进行。

72。子代和亲本性状类似的后代获得了DNA复制的父母着想。

73。基因的DNA片段的遗传效应，线性排列在染色体上的基因，染色体上的基因的载体。

74。基因表达是实现控制蛋白质合成的DNA。

75。由于不同的基因的脱氧核苷酸序列（碱基序列）的安排是不同的，因此，不同的基因含有不同的遗传信息。 （即：基因的脱氧核苷酸顺序代表了遗传信息）。

76。的DNA分子的脱氧核苷酸的顺序决定的信使RNA的核糖核苷酸顺序，信使RNA的核糖核苷酸顺序决定氨基酸序列的蛋白质的氨基酸序列的最后决定的结构和功能的特异性，从而使生物体表现出各种遗传特征。

77。所有生物的基因控制的遗传性状。一些基因控制，通过控制合成的酶的代谢过程基因控制性状的另一种情况下，通过控制的蛋白质分子的结构，直接影响的性状。

78。基因的分离定律：在这种混合的两种生物特征较纯的一对，第一代只表现出显性性状分离现象的第二代，数接近3：1的显性性状和隐性性状。

79。本质的的基因隔离法：在一对同源染色体杂合子的细胞，具有一定程度的独立性，和生物体在减数分裂过程中与分离形成配子，等位基因的分离，分别进入两个配子配子它们的后代。

80。基因分型的特征记忆体的表型基因型表现。

81。自由组合的遗传规律的本质是：位于非同源染色体不分离，或它们的组合的非等位基因为非干扰。减数分裂过程中所形成配子同源染色体上的等位基因彼此分离，同时非同源染色体的非等位基因自由组合。

82。基因的连锁和交换法的本质：在不同的基因位于同一染色体上，经常在一起成配子减数分裂形成配子时，四分体形成的减数分裂过程中，有时会发生同源染色体上的等位基因位于非姐妹染色单体的交换与交流，导致在重组。

83。生物性别决定的主要有两种方式：一种是XY型，另一个ZW型。

84。遗传变异的三个来源：基因突变，基因重组，染色体畸变。

85。在生物进化中的基因突变是很重要的。它是生物变异的根本来源，为生物进化的起始原料。

86。通过有性生殖过程实现的基因重组，提供了极其丰富的生物变异的来源。这是形成生物多样性的重要原因之一，而生物进化具有非常重要的意义。

87生物进化的第七章。在本质上是生物进化过程中群体基因频率的变化过程。

88。为核心的现代生物进化论的自然选择理论，其基本点是：人口的基本单位是生物进化，生物进化，种群基因频率的变化的本质。基因突变和基因重组，自然选择和隔离的物种形成过程的三个基本环节，通过它们的综合影响，人口司，最终导致新物种的形成。第八章生物与环境

89。在工厂和分销的生理，光起着决定性的作用。

90。许多生态因素影响生物的生存，生态因素构成了生物的生存环境。生物适应环境，为了生存。

91。保护色，警告色和模仿生物体在进化过程中的适应特征，通过长期的自然选择逐渐形成的。

92。适应的相对电阻的相互作用的物质的遗传稳定性和环境条件的变化的结果。

93。生物和环境之间相互依存，相互制约，相互影响和相互作用。生物环境是一个不可分割的统一整体。

94。在一定区域内的生物，形成了人口，个人的同一品种，不同物种的细胞克隆。的各种特性的人口，人口变化和生物群落的结构的，与环境中的各种生态因素有着密切的关系。

95。生态系统类型，与不同类型的生物群落生活。在不同的生态系统的生物物种和群落结构有不同。然而，生态系统结构和功能的统一的整体。

96。生态系统的能量来源的太阳。生产者固定的太阳能是流经生态系统的总能量。这些能量流动，逐步沿着食物链（网）。

97。一个生态系统，往往有一个反比关系之间的电阻稳定性和恢复力稳定性。

高中生物学综述

常常生物：

1。细菌：原核生物类：与细胞结构，细胞分化的核膜和核仁，也没有复杂的细胞器，包括：细菌（杆形，球形，螺旋），放线菌，蓝细菌，支原体，衣原体立克次氏体，螺旋体。的

①细菌：所有类型的细菌在第三部：

乳酸细菌，硝化细菌（代谢）

肺炎双球菌S型，R-型（遗传的物质基础）

结核分枝杆菌和麻风杆菌（胞内寄生菌）

根瘤菌轮棕色固氮菌（固氮菌）

大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）（遗传工程转运体，也可以用来作为受体细胞的基因工程）

苏云金芽孢杆菌（Bt基因棉抗虫基因）

假单胞菌（油超级细菌分解）>菌，谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum），黄色短杆菌（微生物的新陈代谢）

链球菌（一般的厌氧型）

产生甲烷杆菌（严格厌氧型）等的

②放线菌的主要抗生素产生菌。它们产生链霉素，庆大霉素，红霉素，四环素，环丝氨酸，多氧霉素，环酰胺，如氯霉素和磷霉素多种抗生素（85％）的。孢子繁殖滋生。

③沙眼：沙眼衣原体。

2。病毒：病毒：未有的细胞结构，主要组成的蛋白质和核酸，包括病毒和亚病毒（病毒，拟病毒，朊病毒）（1）动物病毒：RNA（脊髓灰质炎病毒，狂犬病病毒，麻疹病毒，腮腺水泡性口炎病毒，流感病毒，艾滋病病毒，手足口病病毒，脑膜炎病毒，SARS病毒）

DNA类（痘病毒，腺病毒，疱疹病毒，虹彩病毒，乙肝病毒）

2植物病毒： RNA类（烟草花叶病毒，马铃薯X病毒，黄瓜花叶病毒，大麦黄病毒）

③微生物病毒：噬菌体。

3。真核类：复杂的细胞器，形成了核，包括：酵母菌，霉菌（丝状真菌），蘑菇（大型真菌），真菌，单细胞藻类，原生动物（草履虫草履虫，变形昆虫之间的间日疟原虫），真核微生物。的

①模具：在发酵工业中，广泛用于生产酒精，柠檬酸，甘油，一种酶制剂（如蛋白酶，淀粉酶，纤维素酶），类固醇，维生素等可以使用。在农业上可以用于饲料发酵，生产的生长素（如赤酶新霉素），杀虫剂（如白僵菌代理），和除草剂。如食物霉变的危害能产生毒素（如黄曲霉毒素，镰刀菌毒素可能与克山病）与致癌作用。常见的真菌主要是毛霉，根霉，曲霉，青霉属，镰刀菌，白僵菌，脉胞菌，霉菌等。

4。微生物代谢类型：

①光的能量自筹：光合细菌，蓝藻（水氢身体）紫色硫细菌，绿硫细菌（H2S作为氢供体，严格厌氧）2H2S + CO2 [ CH 2 O] + H 2 O 2 S >②光能传递异养：光作为能源的有机物质（如甲酸，乙酸，丁酸，甲醇，异丙醇，丙酮酸，乳酸）增长阵营光合碳和氢供体。阳光细菌利用丙酮酸和乳酸作为唯一碳源光合生长。

③自养硫菌，铁细菌，氢细菌，硝化细菌和产甲烷菌（厌氧化能自养细菌）

④CO2 +4 H2 CH4 +2 H2O能异养：寄生，腐生菌。

⑤好氧菌：硝化细菌的谷氨酸棒状杆菌和短杆菌芽孢杆菌

⑥厌氧菌：乳杆菌，破伤风杆菌

⑦中间类型：红螺菌（光自养和异养厌氧[太阳能营养] ），氢嗜水气单胞菌（自养和异养兼性自养），酵母（好氧，厌氧氧兼性厌氧型）

⑧固氮细菌共生固氮微生物（根瘤菌等），自生的氮固氮微生物（圆褐固氮菌）

5。植物：C3和C4植物，阳光和阴生植物，豌豆，荠菜，玉米，大米（2×12），葱（2×8），香蕉（3N），普通小麦（六倍体），八倍体小黑麦，否种子西瓜第（3n），无籽番茄，棉花，豆类。

6。动物：人（2×23），果蝇（2×4），马（2×32），（2×31）驴，骡（63）。

二，常用的物质和试剂：

1。常用的物质：

ATP PEP（磷酸丙酮酸），PEG（聚乙二醇），灭活的病毒，和NADPH（还原型辅酶Ⅱ），变应原，植物激素，植物生长素，生长信息素类似物，动物激素，丙酮酸，叶绿素特殊地位，质粒，限制性内切酶，DNA连接酶的一个小数目的分子。

2。常用试剂：

斐林试剂，苏丹III，苏丹IV，缩二脲试剂，二苯基胺，50％的酒精溶液，15％盐酸，95％的酒精溶液，龙胆紫溶液，醋酸洋红肝的20％，和3％的过氧化氢，3.5％的氯化铁，3％可溶性淀粉溶液，3％蔗糖，2％的新鲜的淀粉酶溶液，5％盐酸，5％氢氧化钠，碘，丙酮，液相色谱法，二氧化硅，碳酸钙，0.3g/mL的蔗糖溶液，硝酸钾溶液，柠檬酸钠溶液0.1g/ml，2mol / L的和0.015摩尔/ L的氯的氢氧化钠溶液，95％的冷醇溶液，75％的酒精溶液，胰蛋白酶，秋水仙素，氯化钙，等。

重要的长远的角度来看，得出的结论

（一）名词：

1。的应力，细胞，自由水，和水，肽键，多肽，真核细胞，原核细胞自由扩散，促进扩散，主动运输，细胞分化，细胞癌变细胞老化，致癌因子，丝分裂细胞周期，有丝分裂 BR />

2。酶，ATP，高能磷酸化合物，高能磷酸键，渗透，原生质体，原生质层，优质的质壁分离质壁分离回收，选择性地吸收光反应，暗反应，光合作用的效率，有氧呼吸，无氧呼吸的内环境，稳定状态，脱氨，氨基转换角色化学合成的作用

3。各向同性的运动，神经调节和体液调节，激素调节，顶端优势，反馈调节，协同作用，拮抗作用，反射，反射弧，条件反射，条件反射，突触，高级神经中枢，先天性行为收购行为

4。有性繁殖，无性繁殖，营养，生殖系统，双受精，受精，有丝分裂与减数分裂，生殖细胞，初级卵母细胞，次级卵母细胞，染色体，染色单体，同源染色体的非同源染色体，四分体基因组，染色体，常染色体显性遗传的个体发育，发展的胚，胚乳，顶部细胞，基底细胞，胚胎发育，胚胎发育，卵裂，囊胚期，原肠胚动物极植物极

5。 DNA，RNA，碱基互补配对，半保留复制，转录，翻译，显性，隐性性状，相对形状，基因型，表现型，等位基因，基因分离规律，自由的基因组合的规律，正交，反交，性连锁遗传交叉遗传，基因突变，基因重组，染色体畸变，杂交育种，人工诱变育种，单倍体育种，多倍体育种，花药培养在体外，单基因遗传性疾病，遗传性疾病，染色体异常的遗传性疾病，优生 BR />6。理论的自然选择，基因库，基因频率，隔离，地理隔离，生殖隔离

7。生物圈保护区，生态环境，生态，共生，寄生，竞争，捕食，人口，人口密度，人口增长曲线，生物群落，生态系统（森林，海洋，草原，农业，湿地，城市），食物链，食物网营养水平，材料回收，能量流，生态系统稳定性，生物多样性，生物圈的碳循环，氮循环，硫循环，生态农业

8的稳定状态。人体的稳态，平衡和调节人体，糖尿病，营养成分，营养，特异性免疫功能，免疫系统，抗原，抗体，抗原，表位，体液免疫，细胞免疫，过敏性反应，自身免疫性疾病，免疫缺陷疾病

9。生物固氮共生固氮微生物的自生固氮细菌

10。细胞核遗传，细胞质，母系遗传，编码区，非编码区的RNA聚合酶结合位点，外显子，内含子，人类基因组计划，基因工程，质粒

11。生物膜，生物膜系统的细胞，细胞工程，植物组织培养，植物体细胞杂交，全能干细胞，骨痂，脱分化，再分化，动物细胞培养，原代培养，传代培养，细胞系，细胞系，单克隆抗体

12 。微生物菌落，衣壳，核衣壳，囊膜，尖峰，碳源，氮源，生长因子，在选择培养基中，识别介质，初级代谢产物，次级代谢产物，本构酶，诱导酶，微生物的很重要的一点生长曲线，接种，发酵罐，发酵工程，单细胞蛋白

（二）结论：

1。生物体都有一个共同的物质基础和结构基础。细胞是所有的动物和植物结构的基本单位。无细胞的病毒结构。细胞是生物体的结构和功能的基本单元。

2。新陈代谢是所有生命有机体的基础上，基本的生物学特性，本质上??是不同的生物和非生物的最

。

3。生物的遗传和变异特性的不同品种基本稳定，但也继续发展。

，生物遗传生物物种保持相对稳定。生物变异的生物物种可以产生新的特征，形成

到一个新的物种，进化向前发展。

4。生物体的压力，从而可以适应周围环境。机体能适应一定的环境，也影响环境。

5。生物体的化学元素组成，可以发现在无机性质，而不是化学元素是独特的生物圈，事实证明，生物和非生物世界的团结。生物圈保护区和非生物圈也有差异。组成生物体的化学元素和化合物是生物体生命活动的物质基础。

6。糖类是细胞的主要能量来源，葡萄糖是重要的能源物质的细胞。淀粉和糖原的植物和动物细胞内的存储材料。蛋白质是一切生命活动的实施方案。脂肪是一个能量存储材料的有机体。核酸是所有生物的遗传物质。

7。组成生物体的化合物是不能够单独完成某一种生活，只有这些化合物按照一定的有机组织起来，为了表现出的细胞和生物体的生命现象。该单元格是这些物质的形式的基本结构。

8。在此结构中膜有一定的流动性，特性，并与选择性渗透的功能。

9。的支持和保护的植物细胞的细胞壁。线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。叶绿体是绿色植物光合作用的部位。核糖体是细胞内合成的氨基酸的蛋白质的空间。染色质与染色体的细胞在不同的时间与物质的两种形式。细胞核是遗传物质储存和复制的场所，是细胞??遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。

10。细胞结构的一部分，彼此不是孤立的，而是相互密切的联系，协调，一个细胞就是一个有机统一的整体，细胞只有保持完整性的各种生命活动的，能够正常完成。

11。原核细胞的最重要的特点是由一个典型的核核膜周围没有。

12。细胞分裂增殖，细胞增殖机体生长，发育，繁殖和遗传基础。

13。细胞有丝分裂的重要意义（特征），母细胞的染色体在复制后后完全平均分配到两个子细胞中去，从而之间的亲生父母和的后代保持稳定的遗传生物遗传性状的重要意义。

14。高度分化的植物细胞仍然有能力发展成为整个的植物，保持全能。

15。酶催化剂具有高的效率和特异性，要求适当的条件，如温度和pH值。

16。 ATP的能量代谢需求的直接来源。

17。光合作用氧释放所有的水。部分的氨基酸和脂肪酸的光合作用的直接产物。因此，精确地说，光合作用的产物是有机物和氧气。在叶绿体的光能转换，并包括三个步骤：转换的能量转化为电能的光活跃的化学能的能量的转??换活性化学品可以被转换成一种稳定的化学能量。

18。植物成熟的片区？表皮细胞吸收矿质元素，水的渗透吸收是两个相对独立的过程。

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一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。

盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫b分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。

② 有机溶剂沉淀法

　有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。该法优点在于：1）分辨能力比盐析法高，即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀；2）沉淀不用脱盐，过滤较为容易；3）在生化制备中应用比盐析法广泛。其缺点是对具有生物活性的大分子容易引起变性失活，操作要求在低温下进行。总体来说，蛋白质和酶的有机溶剂沉淀法不如盐析法普遍。

有机溶剂的选择首先是能和水混溶，使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮，还有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等。

③ 其他沉淀法

一．等电点沉淀法

两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。如工业上生产胰岛素时，在粗提液中先调PH8.0去除碱性蛋白质，再调PH3.0去除酸性蛋白质。

利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性，不然盲目使用十分危险。 不少蛋白质与金属离子结合后，等电点会发生偏移，故溶液中含有金属离子时，必须注意调整PH值。 等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀方法联合使用，以提高其沉淀能力。

二．生成盐复合物沉淀法

1．金属复合盐法

许多有机物质包括蛋白在内，在碱性溶液中带负电荷，能与金属离子形成沉淀。根据有机物与它们之间的作用机制，可分为羧酸、胺及杂环等含氮化合物类，如铜锌镉；亲羧酸疏含氮化合物类，如概镁铅；亲硫氢基化合物类，如汞银铅。 蛋白质-金属离子复合物的重要性质是它们的溶解度对溶液的介电常数非常敏感，调整水溶液的介电常数（如加入有机溶剂），即可沉淀多种蛋白。

2． 有机盐法

含氮有机酸如苦味酸、苦酮酸、鞣酸等能与有机分子的碱性功能团形成复合物而沉淀析出。但此法常发生不可逆的沉淀反应，故用于制备蛋白质时，需采用较温和的条件，有时还需加入一定的稳定剂。

3．无机复合盐法

如磷钨酸盐、磷钼酸盐等。

以上盐类复合物都具有很低的溶解度，极易沉淀析出。若沉淀为金属复合盐，可通以H2S使金属变成 硫化物而除去，若为有机酸盐或磷钨酸盐，则加入无机酸并用乙醚萃取，把有机酸和磷钨酸等移入乙醚中除去，或用离子交换法除去。值得注意的是此类方法常使蛋白质发生不可逆沉淀，应用时必须谨慎。

三． 选择性变性沉淀

其原理是利用蛋白质、酶和核酸等生物大分子对某些物理或化学因素敏感性不同，有选择地使之变性沉淀，以达到分离提纯的目的。

此方法可分为：1）利用表面活性剂(三氯乙酸)或有机溶剂引起变性；2）利用对热的不稳定性,加热破坏某些组分，而保存另一些组分；3）酸碱变性。

四．非离子多聚物沉淀法

非离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂，最早用于提纯免疫球蛋白、沉淀一些细菌和病毒，近年来逐渐广泛应用于核酸和酶的分离提纯。这类非离子多聚物包括不同分子量的聚乙二醇、NPEO、葡聚糖、右旋糖酐硫酸钠等，其中应用最多的是聚乙二醇。

用非离子多聚物沉淀生物大分子和微粒，一般有两种方法：1）选用两种水溶性非离子多聚物组成液液两相体系，不等量分配，而造成分离。此方法基于不同生物分子表面结构不同，有不同分配系数。并外加离子强度、PH值和温度等影响，从而扩大分离效果。2）选用一种水溶性非离子多聚物，使生物大分子在同一液相中，由于被排斥相互凝聚而沉淀析出。该方法操作时先离心除去大悬浮颗粒，调整溶液PH值和温度至适度，然后加入中性盐和多聚物至一定浓度，冷贮一段时间，即形成沉淀。

病毒名称：玉米雷亚朵非纳病毒Maize rayado fino virus（MRFV）。

分类地位：玉米细条病毒属Marafivirus，芜菁黄花叶病毒科Tymoviridae。在国际病毒分类委员会（ICTV）中的编码为00.077.0.02.003。

病毒提纯：将玉米病叶在0.01mol/L（pH7.0）磷酸缓冲液中匀浆，通过离心（10000g，10min）澄清提取液。加入聚乙二醇（PEG6000）至8%的浓度，加入氯化钠至0.3mol/L浓度使病毒沉淀，随后离心（10000g，10min）；将沉淀悬浮于磷酸缓冲液中。将该程序重复进行3次。病毒粗提物在5%～35%的蔗糖垫上进行超速离心（87000g）1h；收集界面处的病毒，稀释5倍后加入聚乙二醇沉淀病毒，重新悬浮后，再将病毒粗提物在5%～55%的蔗糖垫上再次进行超速离心（42000g）16h；（Gmez et al.，1977）；最后用氯化铯等密度带超速离心进一步纯化。

病毒理化特性：

①病毒粒子：等轴球状，直径为33nm（上部组分）和31.5nm（底部组分）；分子质量约为5.7*106u，蛋白质外壳与核蛋白粒子的A260/A280分别为0.87和1.58。

②核酸：单链RNA，基因组全长6305nt（GenBank登录号为AF265566），约占粒体重量的33%。

③蛋白：用聚丙烯酰胺凝胶（含有0.5%SDS）电泳获得一个分子质量约为20.5ku的蛋白质。

株系：Maize rayado colombiano virus（Martínez-López，1977）和Brazilian corn streak virus（Kitajima et al.，1976）与MRFV的多数特性类似，但凝胶双扩散试验表明血清学上有显著差异。

其他：病毒的抗原专化性、粒子特性、叶蝉介体种类以及病毒—介体关系的差异可将MRFV与在玉米上产生类似症状的其他病毒区分开来。MRFV可导致严重的经济损失。在中美洲的一些品种上，已经发现成熟穗重量可减产40%～50%，在一些高度感病的品种上产量损失可达100%；虽然有耐病性的品种，但尚未发现具有遗传免疫性的种质（Gmez，1977；Martínez-López，1977）。

酶的分离纯化方法简介

生物细胞产生的酶有两类：一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶，称为细胞外酶。这类酶大都是水解酶，如酶法生产葡萄糖所用的两种淀粉酶，就是由枯草杆菌和根酶发酵过程中分泌的。这类酶一般含量较高，容易得到；另一类酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化作用，称为细胞内酶，如柠檬酸、肌苷酸、味精的发酵生产所进行的一系列化学反应，就是在多种酶催化下在细胞内进行的，在类酶在细胞内往往与细胞结构结合，有一定的分布区域，催化的反应具有一定的顺序性，使许多反应能有条不紊地进行。

酶的来源多为生物细胞。生物细胞内产生的总的酶量虽然是很高的，但每一种酶的含量却很低，如胰脏中期消化作用的水解酶种类很多，但各种酶的含量却差别很大。

因此，在提取某一种酶时，首先应当根据需要，选择含此酶最丰富的材料，如胰脏是提取胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、淀粉酶和脂酶的好材料。由于从动物内脏或植物果实中提取酶制剂受到原料的限制，如不能综合利用，成本又很大。目前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的酶制剂。从微生物中来生产酶制剂的优点有很多，既不受气候地理条件限制，而且动植物体内酶大都可以在微生物中找到，微生物繁殖快，产酶量又丰富，还可以通过选育菌种来提高产量，用廉价原料可以大量生产。

由于在生物组织中，除了我们所需要的某一种酶之外，往往还有许多其它酶和一般蛋白质以及其他杂质，因此为制取某酶制剂时，必须经过分纯化的手续。

酶是具有催化活性的蛋白质，蛋白质很容易变性，所以在酶的提纯过程中应避免用强酸强碱，保持在较低的温度下操作。在提纯的过程中通过测定酶的催化活性可以比较容易跟踪酶在分离提纯过程中的去向。酶的催化活性又可以作为选择分离纯化方法和操作条件的指标，在整个酶的分离纯化过程中的每一步骤，始终要测定酶的总活力和比活力，这样才能知道经过某一步骤回收到多少酶，纯度提高了多少，从而决定着一步骤的取舍。

酶的分离纯化一般包括三个基本步骤：即抽提、纯化、结晶或制剂。首先将所需的酶从原料中引入溶液，此时不可避免地夹带着一些杂质，然后再将此酶从溶液中选择性地分离出来，或者从此溶液中选择性地除去杂质，然后制成纯化的酶制剂。下面就酶的分离纯化的常用方法作一综合介绍：

一、预处理及固液分离技术

1.细胞破碎（cell disruption）

高压均质器法：此法可用于破碎酵母菌、大肠菌、假单胞菌、杆菌甚至黑曲霉菌。将细胞悬浮液在高压下通入一个孔径可调的排放孔中，菌体从高压环境转到低压环境，细胞就容易破碎。菌悬液一次通过均质器的细胞破碎率在12%-67%。细胞破碎率与细胞的种类有关。要达到90%以上的细胞破碎率，起码要将菌悬液通过均质器两次。最好是提高操作压力，减少操作次数。但有人报道，当操作压力达到175Mpa时，破碎率可达100%。当压力超过70Mpa时，细胞破碎率上升较为缓慢。高压均质器的阀门是影响细胞破碎率的重要因素。丝状菌会堵塞均质器的阀门，尤其高浓度菌体时更是如此。在丰富培养基上比在合成培养基上生长的大肠菌更难破碎。

容菌酶处理法：蛋清中含有丰富的溶菌酶，价格便宜，常用来裂解细胞。具体做法是：溶壁微球菌(micrococcus lysodeikticus)43kg，置于0.5%的氯化钠溶液中，使细胞浓度为5%（干重），在35℃用0.68kg（干重）的蛋清处理20min，得到的细胞碎片用相同体积的乙醇处理，用离心机将细胞碎片和胞内蛋白质除去，再将乙醇浓度提高到75%（体积分数），可以得到纯度为5%的过氧化氢酶1500g。

2.离心

离心分离过程可分为离心过滤、离心沉淀、离心分离3种类型，所使用的设备有过滤式离心机、沉降式离心机和离心机。过滤式离心机的转鼓壁上开有小孔，壁上有过滤介质，一般可用于处理悬浮固体颗粒较大、固体含量较高的场合。沉降式离心机用于分离固体浓度较低的固液分离，如发酵液中的菌体，用盐析法或有机溶剂处理过的蛋白质等。分离机用于分离两种互不相溶的、密度有微小差别的乳浊液或含微量固体微粒的乳浊液。

在生物领域采用的离心机系统，除了应具备离心机的一般要求外，还应满足生物生产的技术要求，这包括灭菌、冷却、密封，以保证产品不受污染并不污染环境。现代哦离心机装置包括以下三个步骤，并进行程序控制：离心、离心系统的灭菌及就地清洗。如阿法-拉伐公司离心机产品的装置，具有双重轴向密封，密封由装在转筒主轴上下的碳化硅动环和固定环组成，密封由水连续冷却和润滑，可防止产品被污染，也可防止生产过程中排出的废物对环境的污染。该离心机又如一个密闭的压力容器，可在121℃温度下进行蒸汽灭菌，该离心设备设有环绕离心机转筒的冷却夹套，对悬浮液和浓缩的固体都能进行充分的冷却，并能有效地控制温度，这对于生物制品是非常重要的。如BTPX205型离心机可用于细胞收集、培养液的净化和细胞碎片的分离，可用于疫苗、酶制剂等的提取。该机的其他辅助系统及控制系统也较为完善，如设有压力指示器、力量计、温度传感器和液面传感器。

3.膜分离技术

在蛋白质纯化过程中主要用到的膜分离技术多为超滤。在静压作用下降溶液通过孔径非常小的滤膜，使溶液中分子量较小的溶质透过薄膜，而大分子被截留于膜表面。大多数超滤膜是由一层非常薄的功能膜与较厚的支撑膜结合在一起而组成的。功能膜决定了膜的孔径，而支撑膜提供机械强度以抵抗静压力。超滤浓缩的优点是：操作条件温和，无相变化，对生物活性物质没有破坏。

超滤系统主要由料液贮罐、泵、超滤器、透过液收集罐组成，料液经泵打入超滤器，水及低分子量物质排出超滤器外，被浓缩的料液在料液贮罐、泵、及超滤器中循环。当料液浓缩至一定的倍数后即可作为进一步处理的浓缩料液。

超滤应用于蛋白质类物质的浓缩和脱盐过程中时应注意以下问题：第一，在超滤循环过程中，由于泵和叶轮与料液的摩擦放热作用，料液的温度会逐渐升高，会造成蛋白质分子的损失。因此，料液贮罐应加冷却系统，并安装自动测温及控制系统。第二，某些酶的辅助因子散失为问题：一些酶含有辅助因子，其分子量小，超滤时易从透过液中排除掉，因而在超滤前或超滤后要添加一定浓度的的辅助因子。

还可将超滤与亲和层析相结合以提高分离纯度。其工作原理是：当溶液中欲被分离的蛋白质不受阻碍地通过超滤膜的孔隙时，如果在膜的一侧结合着亲和配基，该蛋白质就会与配基结合因而结聚在膜的这一侧。不与配基结合的其他物质就将穿过孔而被带走。再用适宜的洗脱剂将该蛋白质洗脱下来，洗脱液用于进一步的分离纯化。

4.泡沫分离

原理：将气体通入含多种组分的溶液中，由于这些组分的表面活性由差异，因此在溶液的表面，某些组分将形成泡沫，泡沫的稳定性取决于操作条件及溶液的生物学特性。泡沫中含有更多的表面活性成分，故泡沫的组分种类及其含量与溶液中的不相同。这样，溶液中的组分舅得以分离。

蛋白质较易吸附与气液界面，这有利于其结构的稳定。泡沫分离过程是：蛋白质从主体溶液中扩散到气液界面，该过程可能是可逆的也可能是不可逆的；分子发生重排，一般认为在空气-水界面会形成两种类型的膜，一种是稀膜，另一种是浓膜，可能会发生由多个分子聚集在一起的现象。在气液界面形成的蛋白质膜可以是单层的也可以是多层的。膜的类型取决于主体溶液及气液界面上蛋白质的特性、结构和浓度。

泡沫分离的目的，一方面提高酶蛋白的富集率（泡沫中蛋白质的浓度/最初溶液中蛋白质浓度），另一方面提高酶蛋白的提取率（泡沫中蛋白质的提取率/最初的蛋白质质量），或使多组分混合物中某一组分的分配系数最大。

二、抽提

沉淀

1.盐析

常用的盐析剂是硫酸铵，其溶解度大、价格便宜。硫酸铵沉淀蛋白质的能力很强，其饱和溶液能使大多数的蛋白质沉淀下来。对酶没有破坏作用。

pH的控制：应从酶的溶解度与稳定性两个方面考虑，在酶等电点时其溶解度最小易沉淀，但有些酶再等电点时稳定性较差，因此要选择最佳pH值.一般要求在酶最稳定的pH值的前提下再考虑最适宜酶沉淀的pH值。在操作中一旦确定最佳pH值后，在添加硫酸铵之前甲酸或碱调节好酶液的pH值，要尽量避免溶液pH值的波动以免破坏酶的稳定性。在添加硫酸铵时要注意搅拌，并注意硫酸铵的加入速度，一般是由少到多，缓慢加入，硫酸铵尽可能磨成细粉。

温度的控制：有些酶在较高温度下稳定性能较好，可在常温下进行盐析操作，而对于大多数酶，尽可能在低温下操作。

酶液的净置：加完硫酸铵后，酶液要静置一段时间，使酶蛋白完全沉淀下来，酶静置后，就不要再加以搅拌。

2．有机溶剂沉淀

有机溶剂选择：可用于酶蛋白沉淀的有机溶剂包括醇类物质等，如甲醇、乙醇、异丙醇。乙醇的亲水性能较好，可防止蛋白质的变性，酶蛋白在其中的溶解度也较低。

有机溶剂沉淀操作：有机溶剂一般都使蛋白质变性，当温度较高时变性蛋白质分子就会变成永久失活。因此用有机溶剂处理时最好在0℃以下进行。用有机溶剂沉淀得到的酶蛋白不要放置过久，要尽快加水溶解。

3.聚合物絮凝剂沉淀

聚合物絮凝剂，如葡聚糖和聚乙二醇，与酶分子争夺水分子，具有脱水作用使酶沉淀。聚乙二醇作为一种沉淀剂的优点是在水溶液中，其浓度可达到50%，浓度为6%-12%的蛋白质大都可以沉淀下来。这种试剂不需要低温操作，而且对蛋白质的稳定还有一定的保护作用。聚乙二醇不会被吸附，故在离子交换吸附前不必去除。

4．用金属离子和络合物沉淀

酶和其他蛋白质都会形成金属盐，其溶解度较低。用金属离子沉淀的缺点是酶与金属离子相互作用后，可逆变化较差，尤其是用巯基衍生物，它结合的]金属离子会催化酶变性而失活。

5．用特殊试剂沉淀法

用链霉素可选择性去除核酸，从而使胞内酶沉淀出来。链霉素盐（浓度为0.5-1.0mg/mg蛋白质）对于选择性沉淀核酸的效果比锰离子还要好，酶不易失活。

6．亲和沉淀

将亲和反应的高度选择性、低处理量特性与沉淀操作的大处理量、地选择性有机结合形成了亲和沉淀技术。将配基与可溶性载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物与生物分子结合后在一定条件下可以沉淀出来。

配基-载体复合物可以选择性地与蛋白质结合，溶液中的pH值、离子强度及蛋白质浓度等条件对亲和结合的影响力并不大，只有竞争性的配基会降低产物与原配基的亲和结合力，甚至使亲和结合发生逆转。

引导产生沉淀的方法有：离子交联；加入带相反电荷的聚合物；加入带相反电荷的疏水基团；改变pH值，诱导产生疏水沉淀；温度诱导产生沉淀。

亲和结合：将亲和配基加入到含有目的物蛋白质的溶液中，调节好有关沉淀的条件，使之有利于亲和结合。

洗涤：为经过处理的粗制液中发生亲和沉淀可能会发生非特异性结合，尤其是使用带电的聚合物，离子交换的效应将使其他蛋白质共同沉淀，因此在分离目的物之前要洗涤沉淀物。其做法是：加入适当的清洗剂重新溶解沉淀，再沉淀；或在专一性洗脱之前，彻底清洗沉淀。在上述过程中要始终保持目的蛋白质与配基处于亲和结合状态。

配基-载体复合物与目的蛋白质的分离：分离结束之后，要确保回收目的蛋白质和配基-载体复合物，目的蛋白质要达到一定的纯度，回收率要高