纯化dna的方法有哪些

沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的，而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。

一、步骤

于最多体积450 μl 的DNA 样品中，加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。

加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇，充分混匀。

样品踩于冷环境中沉淀：-20℃ 过夜，或－70℃30 min, 或干冰中5 min 。

使用干冰进行乙醇沉淀

用锤子将干冰砸成粉末，再将管子插入粉末；或将干冰砸成小块，置于抗冻容器中，加入95% 乙醇捣成稀泥，插入管子。 注意：乙醇会洗去标签。

图一  离心之后离心管中分为两层

1:上县为水相，包含着DNA ，下层为有机相，包含蛋白质。通常存水相与有机相之间有一个中间层，可见一个白色带， 这是一些被抽提出来的蛋白质。在你吸取水相的时候，不要碰那个白色带。

高速离心样品15 – 30 min, 转速至少12000g, 如果没有冷冻离心机，将离心机置于4℃ 。

除去上清，上清可以倒入下水道中。

离心管倒置于纸巾上吸干。

预冷的70％乙醇洗涤沉淀。

按步骤6干燥或使用真空浓缩机。

用pH8.0 的TE (10mmol/L Tris· HCI, 0.1 mmol/L EDTA) 重悬DNA 。如果沉淀不能完全溶解，加入更多的TE, 将样品保存于4℃。

三、温馨提示

在处理大分子DNA （大于30 kb) 时要特别小心，由于DNA 样品不能抹荡，只能颠倒或转动混匀。去除表面的氯仿，代替用乙醇沉淀DNA 样品的是， DNA 溶液需要对大体积的冷TNE 溶液进行透析或用水饱和的乙醚抽提。

乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增 大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。乙醇：乙醇是一种有机物，俗称酒精，化学式为CH3CH2OH(C2H6O或C2H5OH)或EtOH，是带有一个羟基的饱和一元醇，在常温、常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体，它的水溶液具有酒香的气味，并略带刺激。有酒的气味和刺激的辛辣滋味，微甘。乙醇液体密度是0.789g/cm(20C°) ，乙醇气体密度为1.59kg/m，沸点是78.3℃，熔点是-114.1℃，易燃，其蒸气能与空气形成爆炸性混合物，能与水以任意比互溶。能与氯仿、乙醚、甲醇、丙酮和其他多数有机溶剂混溶，相对密度(d15.56)0.816。乙醇的用途很广，可用乙醇制造醋酸、饮料、香精、染料、燃料等。医疗上也常用体积分数为70%-75%的乙醇作消毒剂等，在国防工业、医疗卫生、有机合成、食品工业、工农业生产中都有广泛的用途。DNA：脱氧核糖核酸(英语:Deoxyribonucleic acid，缩写为DNA)又称去氧核糖核酸，是一种分子，双链结构，由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖及四种含氮碱基)组成。可组成遗传指令，引导生物发育与生命机能运作。主要功能是长期性的资讯储存，可比喻为"蓝图"或"食谱"。其中包含的指令，是建构细胞内其他的化合物，如蛋白质与RNA所需。带有遗传讯息的DNA片段称为基因，其他的DNA序列，有些直接以自身构造发挥作用，有些则参与调控遗传讯息的表现。组成简单生命最少要265到350个基因 。

此次试验一般会有两个疑问：

1.为什么用无水乙醇沉淀DNA？

用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。

DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15－30分钟即可。

2.在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？

在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。

1.DNA不溶于乙醇

2.乙醇可以吸附水分子（极性相同）,使得溶液中相对的水分子减少,增大了DNA在水中的相对浓度.

3.附：乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全.

乙醇精制的步骤,仅供参考 1.加入2.5倍体积的预冷的无水乙醇,然后在加入10分之一体积的醋酸钠(PH5.2,3M)或者醋酸氨 2.混合均匀,零下80度15分钟或者零下20度30分钟 3.14000RPM,低温(一般指4度),离心15分钟 4.弃上清,加入500-600微升的70%的乙醇 5.14000RPM,低温(一般指4度),离心5分钟 6,弃上清,充分晾干,将残留的乙醇充分除净 7.根据起始的DNA的量,加入灭菌水或者TE 8.电泳定量备用我一般是将无水乙醇和70%的乙醇均放到零下20度保存,但我也做过实验,使用室温的乙醇也可以

如果DNA的量很大,醋酸钠和氯化钠是不必要的.它们的作用就是增强沉淀,纯化极少量的DNA时,它们就起很大的作用了. 要使用什么样的盐沉淀,要看下一步做什么了.

其实沉淀用的乙醇都可以使用室温的, 分子克隆上就写到了, 我用的效果也的确如此. 很多抽提DNA,RNA的KIT的PROTOCOL上也是这么用的 但大家好象都习惯用预冷的了, 也没什么坏处. 阳离子的存在是为了中和DNA上磷酸基团的负电荷, 以便于其沉淀.

加入无水乙醇后dna会沉淀是因为：

1、dna不溶于乙醇，

2、乙醇可以吸附水分子（极性相同）,使得溶液中相对的水分子减少,增大了dna在水中的相对浓度，

3、乙醇沉淀dna需要盐离子,用金属离子屏蔽dna上磷酸的负电荷,降低dna分子间的斥力,才能沉淀完全。

littlehong 说得对。75%乙醇清洗DNA的目的是脱盐的。其机理如下：75%乙醇中含有25%的水，这部分水可以溶解和DNA沉淀中混有的、DNA沉淀前加入的钾盐（或钠盐），但同时也会溶解（损失）少部分DNA（盐离子比DNA更易溶于水中）。为了减少DNA损失，所以用含量较高的乙醇溶液（DNA不溶于乙醇）。

除去了蛋白质的核酸溶液,必须再进一步沉淀和浓缩。最常用的方法是酒精沉淀法。就是将含有Na+的DNA溶液,加入到相当于其两倍体积的体积分数为95%冷酒精溶液中,混匀以后可以使DNA沉淀、浓缩,形成含杂质较少的DNA丝状物,悬浮于溶液中。如果出现的丝状物较少,可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分。浓缩后的DNA丝状物,可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附DNA的作用)。

因为无论用哪种方法提取,沉淀dna时总会加入高浓度的盐,加盐的目的是破坏能使蛋白质保持稳定的两个因素,使蛋白和dna分离并沉淀下来.而此时盐的阳离子会与dna结合形成dna-阳离子盐溶于溶液中,再用无水乙醇可以将dna-阳离子盐沉淀下来,但这样一来,dna中就含有较多的盐离子,这势必会影响下一步实验的进行,所以要用70%乙醇洗涤dna沉淀(因为在70%乙醇里dna是不溶的,而盐离子却可溶),用无水乙醇则达不到这个目的!ok?