伊红美蓝是亚甲基蓝吗

伊红美蓝 瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Y）染色：

1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Y）染料。

2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：

（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲 醇

ME（瑞氏染料）----→M+ + E-

在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

3.瑞氏染液配制：

(1) 瑞氏染液配制：

瑞氏染料 830gm或1g

甲醇（AR） 500ml或600ml

○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

(2) 缓冲液：

●缓冲液作用：

○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在***~6.8，

○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。

●缓冲液配制（pH6.4~6.8，弱酸性）：

配方1 ： 配方2：

1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml

1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml

H2O(新鲜) 加至1000ml

置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。

1 .瑞氏染料是由碱性染料美蓝( Methvlem blue )和酸性染料黄色伊红( Eostm Y )合称伊红美蓝 染料即瑞氏 (美蓝-伊红Y)染料。

伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。

2 .用 甲醇作瑞氏 染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用:

( 1 )甲醇使瑞氏染料中美蓝( M )与伊红( E )在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

伊红美蓝是一种用于细胞染色的染料，又称瑞氏染料，是碱性染料美蓝（Methylene blue）和酸性染料黄色伊红（Eosin Y）的合称。用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液，或称伊红美蓝染液。

伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。

扩展资料:

染色原理：

伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。

在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。

常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。

参考资料来源：百度百科-伊红美蓝

1、伊红美兰是一种用于细胞染色的染料，又称瑞氏染料，是碱性染料美蓝和酸性染料黄色伊红的合称。伊红美蓝染料染色称为瑞氏染色。

2、SS琼脂为强选择性培养基。其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。可使致病的沙门菌和志贺菌得以分离。

为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及异常变化，血涂片必须进行染色。

血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变而来。目前常用瑞氏染色法。

【目的】掌握血涂片的染色方法。

【原理】

把已制成的血细胞分布均匀的薄膜涂片，

用复合染料染色。

其着色的原理包括物理

吸附及化学亲和作用。

不同种类的细胞及同一细胞的不同成分及不结构，

对酸性及碱性染料

的结合能力不同，因而使不同种类的细胞染成不同的颜色，呈现各自的特点。

【器材】我们今天的器材是：载玻片、推片、吸耳球、显微镜。

【试剂】

1

瑞氏染料

由酸性染料伊红(eosin,E)和碱性染料亚甲蓝(methylene

blue,M|+)组成的复合染料。

★亚甲蓝(又名美蓝)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。

★伊红通常为钠盐。

★将适量的伊红，美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。

甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红ME，使其解离为M+和E+，后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；

二是具有很强的脱水作用，可固定细胞的形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。

2

瑞氏染液的配制：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油15ml。

操作如下：将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研

磨(至少半小时)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油，密闭保存。这只就是我们配制的I液。

说明：新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，美蓝逐渐转变为天青B后方可使用，这一过程称染料成熟。放置时间愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰，但我们所用的甲醇必须纯净。

II液：又称磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氢钾0.3g，磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至1000ml。

配好后用磷酸盐溶液校正PH，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。

也可用蒸馏水代替。

3

染色：①血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片平置

于染色架上，滴加染液3-5滴，使其盖满血涂片，大约1分钟后，滴加等量或稍多的II液，

用吸耳球轻轻混匀。

②冲洗：染色5-10分钟用流水染液，待干。

③结果观察，

将干燥后的血涂片置显微镜下观察。

先用低倍镜观察血涂片，

再用油镜。

(1) 瑞氏染液配制：

瑞氏染料 830gm 或 1g

甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml

先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内， 用乳棒轻轻 敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到 研芝麻声 即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入 一 清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。

(2) 缓冲液：

1) 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。 缓冲液须保持 一定的 pH 使染色稳定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使 pH 恒定。

2) 缓冲液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：

配方 1 ： 配方 2 ：

1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml

1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml

H 2 O( 新鲜 ) 加至 1000ml

置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。

染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

PH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境里正电荷增多，易和伊红结合，染色为偏红；在偏碱性环境里负电荷增多，易和美蓝或天青结合，染色偏蓝。

所以细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定清洁，要无酸碱污染。配制顼特液一定用优质甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲洗一定用水应近中性，不然可导致各种细胞染色反应异常，以致于识别困难，甚至造成错误的。

扩展资料

常用的细胞染色方法有：

1、简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色；

2、革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程；

3、瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成；

4、吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同；

5、细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。

染色细胞固定有物理法与化学法，物理法为干燥和火焰固定，化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。

1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。

2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。

3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。

参考资料来源：百度百科-吉姆萨染色

1、瑞氏色素，直接使用，无需任何配制过程，染液中加微量中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

2、经过瑞氏染色这一过程叫瑞特染色。