苯酚硫酸法测定总糖和dns法测定还原糖的区别

会的。

DNS必须储藏在棕色瓶或者无光的地方，因为DNS(3'5'二硝基水杨酸)上有羟基，本身容易被氧化。

在空气中，时间一长，NaOH会吸收CO2导致碱性变弱，而橘红色必须在碱过量才能发生；亚硫酸钠暴露在空气中也会被慢慢氧化成硫酸钠。DNS(3'5'二硝基水杨酸)上有羟基，本身容易被氧化成酮基。因此时间一长，颜色变浅甚至褪色。

围内,吸收值与糖浓度呈线性关系,从而可比色测定其含量。苯酚比色不能排除还原性杂质(包括单糖)的干扰,且显色剂极

易氧化而影响比色。

3

,5一二硝基水

杨酸法(DNs法),选用以

水解前测得空白值校正水解后样品测定值,达到消除还原性杂质干扰的效果

两种不同的DNS配制方法，加苯酚和无水硫酸钠，目的为提高显色色度。与不加苯酚和无水硫酸钠的DNS相比，吸光值高于后者。标准曲线回归方程斜率大于后者，既产生的比色常数也低于后者。

3，5-二硝基水杨酸 结构式　3，5－二硝基水杨酸，3,5-Dinitrosalicylic acid ，简称DNS。在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度量呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。DNS试剂配制（1）以称取3,5-二硝基水杨酸（C7H4N2O7）6.3 g，氢氧化钠 21.0 g充分溶解于500 ml蒸馏水中（水先煮沸10分钟后冷却）（2）加入酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O）182.0g，苯酚（在50℃水中融化） 5.0g，偏重亚硫酸钠（NaS2O5）5.0g，搅拌至全溶，定容至1000 ml。（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置10天后便可使用。平时盛一小瓶放在外面使用，其它储于冰箱中。此溶液每月配制一次。注意：DNS一定要在配制结束后立即转移到小棕色瓶中，同时，使用过程中尽量减少与空气接触。

10mg/mL标准葡萄糖溶液：

精密称取无水葡萄糖1.0000置80mL蒸馏水中搅拌溶解，待完全溶解后定容至100mL。标记为10mg/mL的标准葡萄糖溶液，同时标记配制日期，4℃条件下保存。

DNS试剂的配制

称取3,5-二硝基水杨酸31.50g缓慢加入5000mL蒸馏水中，不断搅拌，水浴至45℃，逐步加入1000mL氢氧化钠溶液（e），不断搅拌至溶液清澈透明（在加入氢氧化钠溶液过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸钾钠910.0g、苯酚25.0 g、无水亚硫酸钠25.0 g，继续45℃水浴加热，同时补水3000mL，不断搅拌，至上述物质完全溶解后，冷却至室温，并定容到10000 mL。用滤布过滤，将滤液储存于棕色瓶中，标识名称和配制日期，避光，室温保存7天后可以使用。有效期6个月。

分析步骤：

标准曲线的绘制：

取8支试管按下表加入相关试液后再加入1.5mLDNS试剂,充分摇匀，置沸水浴中反应5min。迅速冷却至室温，用水定容至5.0mL，用0号试管试液作对照，在540nm波长下测其它各试管试液的吸光度。以吸光度为纵坐标，以葡萄糖含量为横坐标绘制标准曲线。

试管号

0

1

2

3

4

5

6

7

缓冲液加入量（μL ）

1000

990

985

980

975

970

965

960

葡萄糖标准液加入量（μL ）

0

10

15

20

25

30

35

40

葡萄糖含量（μg）

0

100

150

200

250

300

350

400

DNS试剂的配方是：称取3，5-二硝基水杨酸3.15 g(化学纯)，加水500 mL。搅拌5 s，水浴至45 ℃。然后逐步加入100 mL 0.2g/ mL的氢氧化钠溶液，同时不断搅拌。

DNS试剂，一种可用于物质中还原糖含量测定的试剂。

Ghose法 DNS试剂的配制

甲液：将6.9 g结晶苯酚溶于15.2 mL10%NaOH溶液，蒸馏水稀释至69 mL，在此溶液中加入6.9 g亚硫酸氢钠。

乙液：将255 g酒石酸钾钠溶于300 mL10%NaOH溶液中，再加入880 mL1%的3，5-二硝基水杨酸溶液。

将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，储于棕色瓶中放置7-10 d后使用。在棕色瓶内保存一年有效。

dns，即3，5-二硝基水杨酸．在酶活的测定中担任显色剂的作用。dns能与木糖反应生成有色络合物，从而用于比色测定。dns试剂的配制方法如下。称取10g

3，5．二硝基水杨酸济于水中，全部溶解后，加入20

g

naoh、200g酒石酸钠，加人蒸馏水，使总体积至500ml左右，加热溶解后，加2

g苯酚、o．5g无水亚硫酸钠，加热搅拌至全部溶解，冷却，甩水稀释至1000ml，储于棕色瓶中，1周后使用。

Ghose法DNS试剂的配制甲液，将6.9g结晶苯酚溶15.2mL10%NaOH溶液，蒸馏水稀释至69mL，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。乙液，将255g酒石酸钾钠溶于300mL10%NaOH溶液中，再加入880mL1%的3.5-二硝基水杨酸溶液。将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，储于棕色瓶中放置7-10d后使用。在棕色瓶内保存一年有效。

轻工业部标准DNS试剂的配制称取3.5—二硝基水杨酸(10土0.1)g，置于约600mL水中，逐渐加入氢氧化钠10g，在50℃水浴中(磁力)搅拌溶解，再依次加入酒石酸甲钠200g、苯酚(重蒸)2g和无水亚硫酸钠5g，待全部溶解并澄清后，冷却至室温，用水定容至1000mL，过滤。贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置7d后使用。

DNS：在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度量呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。

蒽酮比色法是一种快速而简便的定糖方法，糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛及其衍生物，该衍生物与蒽酮发生反应，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收。因此可用此方法测定多糖含量。它的精确度不如DNS法高。

那不是的 明白它的反应原理就知道不是多糖，蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应。