细胞培养用胰蛋白酶溶液如何配制与消毒
博凌科为生物科技-为你解答：胰蛋白酶溶液的配制与消毒：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰 酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握 好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、 Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks 液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。1. 称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D- hanks）液中。搅拌混匀，置于4℃内过夜。2. 用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
中文名称: 胰蛋白酶 中文同义词: 胰蛋白酶胰蛋白酶1：250（猪胰脏）胰蛋白酶1：300（猪胰脏）胰淀粉酶胰液酵素胰酶-EDTA溶液胰蛋白酶1:250蛋白酶类 英文名称: Trypsin 英文同义词: TRYPSINTRYPSIN, 1-250TRYPSIN, 1-300TRYPSIN-EDTATRYPSIN, HUMAN PANCREASTRYPSIN PORCINETRYPSIN, PORCINE PANCREASec3.4.4.4 CAS号: 9002-07-7 分子式: C6H15O12P3 分子量: ≈24000 EINECS号: 232-650-8 胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取，纯化获得的结晶，再制成的冻干制剂。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有机溶剂。在pH1.8时，短时间煮沸几乎不失活；在碱溶液中加热则变性沉淀，Ca2+有保护和激活作用，胰蛋白酶的等电点为pH10.1。
牛胰蛋白酶原有229个氨基酸组成，含6对二硫键，其氨基酸排列顺序和晶体结构已被阐明。在肠激酶活自身催化下，酶原的N末端赖氨酸与异亮氨酸残基之间的肽键被水解，释放出来缬-天-天-天-天-赖6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量23800 ，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨
酸蛋白酶。
猪胰蛋白酶的化学结构与牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸残基排列顺序中，只有41个氨基酸残基不同，但分子构型有很大区别。沉降系数S20W为2.77S，pI=10.8，热稳定性较牛胰蛋白酶稳定，Ca2+对酶的保护作用不及牛羊的明显，无螯合Ca2+的中心部位。有6对二硫键，断裂1~2个键，均不至于破坏酶分子的完整结构而保护了酶的活性。酶的活力分别相当于牛的72%及羊的61%。
羊胰蛋白酶与牛、猪的相似，但其活力略高于牛和猪的。
胰蛋白酶专一作用有碱性氨基酸精氨酸及赖氨酸羧基所组成的肽键。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶转化为α-胰蛋白酶，再进一步降解为拟胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而丧失。
除存在于脊椎动物外，还存在于蚕、海盘车、蝲姑、放线菌等范围广泛的生物体中。另外与高等动物的血液凝固和炎症等有关的凝血酶、纤溶酶、舒血管素等蛋白酶在化学结构和特异性等方面与胰蛋白酶具有密切的关系，可以认为这些酶是从共同的祖先酶在进化过程中分化而来的。胰糜蛋白酶与弹性蛋白酶在结构和催化机制方面也具有密切关系，但其特异性则完全不同。
胰蛋白酶系自牛、羊或猪胰中提取的一种蛋白水解酶。中国药品标准规定按干燥品计算，每1mg 的效价不得少于2500单位。 由牛、羊、猪胰脏提取而得的一种肽链内切酶，只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。分子量24 000，pI 10.5，最适pH值7.8～8.5左右。pH>9.0不可逆失活。Ca2+对酶活性有稳定作用；重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制剂对其活性有强烈抑制。临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。
2．称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中)，加入少量D－Hanks液研磨1 000次左右，调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中，4℃下磁力搅拌使完全溶解。
3．用NaHC03干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左右(胰酶作用的最适pH值)，并加入0.02％EDTA以协助消化作用。
4．滤过除菌，－20℃冻存。
我上次是在华越洋生物买的现成EDTA胰酶消化液，方便多了。
胰蛋白胨，又称胰酪蛋白胨、胰酶消化酪蛋白胨，是一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。
我认为前者是总称。而后者不过是一个类别，用胰蛋白酶处理的。
材料来源不同。
1、胰蛋白胨（国产）是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等，可配制各种微生物培养基，生化制品及微生物学科研等领域中。
2、胰蛋白胨（进口）Tryptone
进口胰蛋白胨与国产的酪蛋白胨相同，也叫胰酪蛋白胨都是采用酪蛋白为原料，经过消化、脱色、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黄色。酪蛋白又称干酪素是从牛奶中提取的一种营养价值很高的磷蛋白，是生产蛋白胨常用的原料。
用此原料生产的蛋白胨，其氨基酸比较齐全，特别是色氨酸的含量比较高。所以它在细菌生化试验中最适宜于做靛基质和糖发酵试验。但它缺乏胱氨酸、蛋氨酸等含硫氨基酸，故不适宜做硫化氢试验。
蛋白胨:
蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。
蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。
胰蛋白胨:
胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业，氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业，生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大，临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造，生丝处理，食品加工。在国际市场上，胰蛋白胨也属于货紧价昂的短线品种之一。
