异硫氰酸胍在柠檬酸钠中稳定吗
不稳定。异硫氰酸胍是化学分子式为CH5N3·HSCN的化学物质。
简称：GITC
外观：白色晶体
熔点：115-120℃。
PH（4％水溶液）:4.5-7.0
紫外线吸收（300nm，6M）:≤0.1 abs单位
紫外线吸收（410nm，6M）:≤0.05abs
干燥失重：≤0.5％＃nsp。
使用异硫氰酸胍溶液需要现配吗？
答：提取试剂基于4M硫氰酸胍的终浓度：4mM柠檬酸钠，0.83％N-月桂基肌氨酸（十二烷基，N-甲基甘氨酸钠），0.2mMβ-CSB缓冲溶液由巯基乙醇制得；混合25 g异硫氰酸胍和33 mL CSB缓冲溶液直至完全溶解，并将溶液在65°C加热以制备变性溶液，将其在4°C下储存直至使用。
因此，不必立即使用异硫氰酸胍溶液，目前市场上有不同浓度的溶液，但长时间放置并不容易，否则会沉淀并需要仔细检查。使用此外，如果一次准备太多，建议分装。
异硫氰酸胍溶液准需要菌了吗？
答：异硫氰酸胍溶液无需灭菌。该溶液不是很稳定，通常将0.1％DEPC水用作裂解液。水已经消毒了。另外，在制备试剂时，所有用于RNA提取的试剂都需要用DEPC水制备，并且优选重新打开试剂并将其专用于RNA。
尽管无需对制备的裂解物进行灭菌，但应注意的是，实验中使用的塑料产品已标记为无Rnase。如果未在未打开的程序包中使用过它们，则可以直接使用它们，而所有其他则必须通过。处理：将DEPC加到双蒸馏水中至终浓度为0.1％，将塑料产品浸泡，然后将厨房通风过夜，然后用铝箔密封，在高温下高压灭菌至少30分钟，然后高压干燥，然后再干燥用。
异硫氰酸胍的毒性？
答：异硫氰酸胍的吸入，食入和皮肤接触可能会造成损害，因此在操作过程中需要穿戴实验室衣服，手套和护目镜。与酸接触时会释放出剧毒的气体，对水生生物有害。有害，可能对水环境产生长期不利影响，因此应避免释放到环境中。
如何处理废液？
答：实验室污染主要包括生物污染和化学污染，按形式可分为废水，废气和固体污染物。其中，生物污染包括生物废物污染和生物细菌毒素污染，化学污染包括有机污染和无机污染。通常，需要对各种废液进行分类。原则上，原始瓶子被回收。如果需要混合，则必须确保混合后试剂不会产生热量，有毒气体，爆炸等。药品的名称和浓度也必须在回收瓶上标出，并且必须统一回收。不得随意丢弃，以免造成环境污染和中毒。
异硫氰酸胍，CAS号：593-84-0，是一种白色结晶性粉末，有刺激性，对光敏感，溶于乙醇和水，熔点118℃。它和尿素、盐酸胍一样，都是强力的蛋白质变性剂，关于他们之间的介绍请查看之前的文章。异硫氰酸胍在变性裂解细胞和核酸提取中，能够迅速溶解蛋白质，导致其细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离，同时它能抑制细胞释放出的核酸酶，抑制RNA酶、防止RNA的降解，使核酸与蛋白质分离，保证核酸一级结构的完整性。然而，在实际的实验操作过程当中，涉及到异硫氰酸胍溶液的配制和使用中，经常会遇到一些问题，本文将对这些问题进行一一解答。
异硫氰酸胍溶液是否需要现用现配？
提取试剂以异硫氰酸胍的终浓度为4M为例：先以42mM柠檬酸钠、0.83%N-lauryl sarcosine(十二烷基，N-甲基甘氨酸钠)、0.2mM β-巯基乙醇制得CSB缓冲液；异硫氰酸胍25g、CSB缓冲液33mL，混合直至完全溶解，可加热在65℃助溶，制得变性液，4℃保存备用。
所以，异硫氰酸胍溶液可以不必非要现用现配，而且目前市场上也有不同浓度的溶液销售，但放置时间不易过长，否则会有沉淀析出，在使用前需要仔细检查；另外，如果一次性配制过多，建议进行分装。
异硫氰酸胍溶液配制好之后是否需要灭菌？
异硫氰酸胍溶液并没有必要灭菌，该溶液并不是非常稳定，而且配裂解液一般要用0.1%的DEPC水，水已经进行过灭菌。另外提取RNA的所有试剂在配制时都需要用DEPC水配制，而且试剂最好为新开启并作为RNA专用。
虽然配制好的裂解液不需要灭菌，但要注意的是，实验中所用到的塑料制品，已经标明Rnase-Free的，如果没有开封使用过，可以直接使用，其他的都必须经过处理：在双蒸水中加入DEPC，使其终浓度为0.1%，将塑料制品浸泡其中，通风厨过夜，之后再用铝箔封住，高温高压灭菌至少30min，干燥备用。
异硫氰酸胍的毒性如何？
吸入，摄入，皮肤接触异硫氰酸胍均可造成损伤，所以操作时需穿好实验服，戴好手套和护目镜；其与酸、碱（氢氧化钠）接触可释放极高毒性气体，建议在通风橱中操作。
使用过后的废液如何处理？
实验室的污染主要有生物性污染和化学污染，按形态大致可分为废水、废气和固体污染物。其中，生物污染包括生物废弃物污染和生物细菌毒素污染，而化学污染包括有机物污染和无机物污染。总体来说，各类废液需进行分类，原则上原瓶回收，如需混装，则需确定试剂混合后不产生热量、有毒气体、爆炸等。回收瓶上也需注明药品名称、浓度，进行统一回收处理，不可随意丢弃，造成环境污染和毒害。
异硫氰酸胍的作用？
除了在生化领域，异硫氰酸胍在新能源领域也有着不容忽视的作用。
根据已公开报道，在新能源领域，异硫氰酸胍主要作为电解质组分用于制备染料敏化太阳能电池和钙钛矿太阳能电池等新型太阳能电池，对于改善电池稳定性能具有重要价值。
程萍[1]等人以离子液体、无机层状材料、异硫氰酸胍等为主要组分，设计了一种准固态电解质，具有组分分布均匀、稳定性好的特点，能显著提高染料敏化太阳能电池的长期稳定性和光电转换效率。
熊娟等人[2]通过掺杂异硫氰酸胍制备了一种高效的钙钛矿太阳能电池，他们通过引入胍盐与硫氰根离子有效提高了钙钛矿电池的光电效率。通过实验证明，在同样放置624小时的前提下，未添加异硫氰酸胍的电池电池效率下降到初始值的约50％，而添加异硫氰酸胍的电池仍可保持初始效率的80％。异硫氰酸胍的加入，大幅度提升了电池的稳定性。另外，异硫氰酸胍的加入能够明显改善电池的回滞现象。
1. 一种准固态电解质及其制备方法与应用 CN101013766A
2. 钙钛矿太阳能电池及其制备方法 CN108987584A
异硫氰酸胍在此次YQ中的作用？
近日，发表在《国际检验医学杂志》上题为《XXGZ病毒核酸和抗体检测临床应用专家共识》的论文中提到，在XXGZ病毒采集过程中，推荐使用带有异硫氰酸胍等病毒灭活剂的采样管，灭活病毒同时提高检出率。那么异硫氰酸胍在XXGZ病毒核酸检测中有哪些作用，又是如何做到灭活病毒并提高检出率呢？
XXGZ病毒是一种RNA病毒，各种RNA病毒的核酸由于自体降解和生物酶介导的降解，是较难稳定保存的生物分子。而异硫氰酸胍是一类强有力的蛋白质变性剂，且具有无RNA酶和DNA酶活性的特点。采样管中加入异硫氰酸胍能够破坏RNA酶的分子结构，使样本中可能存在的核酸酶失活，起到稳定保存病毒样本的作用。
XXGZ病毒核酸检测流程包括采样→保存送样→病毒灭活→裂解核酸提取→检测等流程，异硫氰酸胍在核酸提取环节也发挥至关重要的作用。作为核酸裂解液的主要成分，异硫氰酸胍能迅速破碎病毒，使核蛋白与核酸迅速分离，同时抑制释放出的核酸酶活性，保证核酸一级结构的完整性，提高核酸提取效率。
可见，异硫氰酸胍在XXGZ病毒核酸检测中具有重要价值。
大家有其他关于异硫氰酸胍的问题，也可以在下方评论中留言，我看到后会更新解答。
1、机械破碎
2、超声破碎
3、化学方法破碎 可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白。如有人在pH>9.0溶解牛生长激素和牛凝乳蛋白酶包涵体。有些蛋白可以溶解在60mMHCl中。这些方法只适合于少部分蛋白的增溶。
变性剂的使用浓度和作用时间：一般在偏碱性性的环境中如pH8.0-9.0，尿素在碱性环境中不稳定，一般不要超过pH1.0。有些蛋白只能用盐酸胍如IL-4。增溶时一般室温过夜，但盐酸胍在37度1小时便可以使多数蛋白完全变性溶解。 通过缓慢去除变性剂使目标蛋白从变性的完全伸展状态恢复到正常的折叠结构，同时去除还原剂使二硫键正常形成。一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始，到2M左右时结束。对于盐酸胍而言，可以从4M开始，到1.5M 时复性过程已经结束。
复性中常采用
稀释复性：直接加入水或缓冲液，放置过夜，缺点是体积增加较大，变性剂稀释速度太快，不易控制。
透析复性：好处是不增加体积，通过逐渐降低外透液浓度来控制变性剂去除速度，有人称易形成沉淀，且不适合大规模操作，无法应用到生产规模。超滤复性：在生产中较多的使用，规模较大，易于对透析速度进行控制，缺点是不适合样品量较少的情况，且有些蛋白可能在超滤过程中不可逆的变性。
柱上复性：是研究较多并成功的在生产中应用的一种复性方法，如华北制药的G-CSF复性据说是通过柱上复性进行的。常用于复性的层析方法有SEC、HIC等。 还原剂一般和变性剂的去除一起慢慢的氧化去除，使二硫键慢慢形成。但是由于二硫键的形成并不是蛋白质正确折叠所必须的，可以考虑在变性剂完全去除之后，在去除还原剂使已经按照正确的结构相互接近的巯基间形成正确的二硫键。
常用的氧化方法有：
空气氧化法：在碱性条件下通空气，或者加入二价铜离子，能够取得更好的效果，缺点是不易控制氧化还原电势。
氧化还原电对（redox）：常采用GSSG/GSH，通过调整两者的比例来控制较精确的氧化还原电势，也可以在添加了还原剂如BME、DTT的增溶液中直接加入GSSG，如：5mMGSSG/2mM DTT=GSH/GSSG(1.33/1）。 1、共溶剂：如PEG6000-20000，据说可以可逆的修饰折叠中间体的疏水集团，此外由于阻止了蛋白质分子间的相互接触的机会，也可能对复性效率的提高起作用。一般的使用浓度在0.1%左右，具体条件可根据实验条件确定。
2、二硫键异构酶（PDI）和脯氨酸异构酶（PPI）：PDI可以使错配的二硫键打开并重新组合，从而有利于恢复到正常的结构，此外在复性过程中蛋白质的脯氨酸两种构象间的转变需要较高能量，常常是复性过程中的限速步骤，而PPI的作用是促进两种构象间的转变，从而促进复性的进行。
3、分子伴侣，即热休克蛋白（HSP），是一种没有蛋白质特异性的促进折叠的蛋白因子，研究发现很多蛋白在缺乏分子伴侣时无法自己正确的折叠。有人构建了与伴侣分子共同表达的菌株，据说效果不错。不过在生产中还没有看到2和3的应用的例子。
4、0.4-0.6ML-Arg：成功的应用于很多蛋白如t-PA的复性中，可以抑制二聚体的形成。
5、甘油等：增加黏度，减少分子碰撞机会，一般使用浓度在%5-30%。
6、一定的盐浓度，可能是为了降低某些带电集团间的斥力，有利于蛋白质的折叠。
7、辅助因子：添加蛋白质活性状态必须的辅助因子如辅酶辅基等或蛋白配体等很多时候对蛋白质正确的折叠是有利的。
8、色谱法：通过将目标蛋白结合到层析柱上，减少蛋白分子间的相互影响，该方法得到越来越多的应用，常用的色谱有SEC、HIC、IEC、IMAC等。
当然，虽然有很多所谓的理性的复性方案设计，复性工作更多的是一个经验的过程，没有一种通用的方法可以套用。 根据具体的蛋白性质和需要，可以从生化、免疫、物理性质等方面对蛋白质的复性效率进行检测。
1、凝胶电泳：一般可以用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳可以检测变性和天然状态的蛋白质，或用非还原的聚丙烯酰胺电泳检测有二硫键的蛋白复性后二硫键的配对情况。
2、光谱学方法：可以用紫外差光谱、荧光光谱、圆二色性光谱（CD）等，利用两种状态下的光谱学特征进行复性情况的检测，但一般只用于复性研究中的过程检测。
3、色谱方法：如IEX、RP-HPLC、CE等，由于两种状态的蛋白色谱行为不同。
4、生物学活性及比活测定：一般用细胞方法或生化方法进行测定，较好的反映了复性蛋白的活性，值得注意的是，不同的测活方法测得的结果不同，而且常常不能完全反映体内活性。
5、黏度和浊度测定：复性后的蛋白溶解度增加，变性状态时由于疏水残基暴露，一般水溶性很差，大多形成可见的沉淀析出。
6、免疫学方法：如ELISA、WESTERN等，特别是对结构决定簇的抗体检验，比较真实的反映了蛋白质的折叠状态。 1、MHCⅡ JBC 269(47）：1994
增溶：16-40mg Protein,8MGdnHCl,16-32mM DTT,1mM EDTA,50mM Tris pH8.037度1hr.
复性：8-16fold dilution to1-5mg/ml Protein.
2、增溶：10mM DTT,0.1%SDS,25mM Tris,200mMGlucine pH8.5.
复性：10倍稀释到10mM DTT,2mMDodOMalt(dodecyl-beta-D-maltoside),150mMNaCl,10mMTris pH8.0.对起始缓冲液密闭透析16hr，开口透析8hr，对150mMNaCl,10mM Tris pH8.0透析48hr。
3、Bovine Prethrombin-2,JBC 270⑴：1990 四对二硫键。
增溶：7M GdnHCl,10mMTris pH8.0,1mM EDTA 4mg/ml.
复性：稀释到100mM Na2HPO4,2 mM EDTA,0.1% PEG,0-4M GdnHCl,0.1 mM GSSG,0.2 mM GSH,pH7.4,0.025 mg/ml Protein.RT 24hr.对4L 25mM sodiumphosphate,2mM EDTA,0.1%PEG,pH7.4 透析3次，温度4度。 一般说来，复性液的体积较大，为了减少处理体积，在进行柱纯化以前可以先进行硫酸铵沉淀，沉淀在低速离心收集后复溶的盐浓度较高，可以直接进行HIC纯化，目标峰经适当稀释后（cond<5mS/cm）进行IEX纯化，然后通过SEC脱盐，更换缓冲液，除菌过滤后，在质量合格的情况下便可以进入制剂阶段。
当然在复性浓度较高的情况下，也可以直接将复性液进行IEX纯化，优点是在纯化的同时进行体积的浓缩，为以后的精制创造条件。
从生产的角度看，由于每增加一步纯化工序便降低很多收率，所以可过两到三次柱纯化，工艺越简单越有利于收率的提高。当然这只是一个一般的原则，对于纯度要求较高的产品如重组人白蛋白，不得不进行多次纯化。 1. 真核细胞表达外源蛋白质的缺点
一些蛋白质需要翻译后的修饰，如糖基化，则必须选用真核细胞。但是无论是正在临床的还是市场上的蛋白质药物，主要的是以大肠杆菌作为宿主细胞。
1982年第一次选用大肠杆菌作为表达重组DNA的宿主细胞，表达的产物是人胰岛素。选择原核细胞作为表达载体，因为真核细胞表达外源蛋白质有其缺点：⑴真核细胞的天然蛋白质的表达和外源蛋白质的表达，表达量相当少，即使有的蛋白质表达量高时，容易出现蛋白质的无活性的现象，或者形成聚集体；而原核细胞表达的蛋白质量比真核细胞大很多；
⑵相对于大肠杆菌，人类对于真核细胞的基因的了解还是有限的，而对大肠杆菌的基因了解的相当透彻，并能进行熟练的基因重组等操作对大肠杆菌的基因进行改造；
⑶真核细胞生长到高密度需要更长的时间（7天左右），并且细胞的最终浓度低，所以需要较大的培养容器，而大肠杆菌可以在几个h以内达到108cells/mL；
⑷动物细胞生长的培养液的造价较高，并且大部分使用血清作为生长液的添加剂，从而提高了产品的造价并且不利于以后的纯化步骤；
⑸原核细胞的坚硬的细胞壁，可以使用简单的搅拌的方法完成传热、传质过程，而大部分的真核细胞需要温和的培养方法及复杂的操作以达到其对培养基的要求。
基于以上的原因，真核细胞尤其是哺乳动物细胞表达外源蛋白质大部分处在研究阶段，大部分重组蛋白质使用的表达载体是大肠杆菌细胞。大肠杆菌表达的外源蛋白质量相当大，有时达到细胞内蛋白质总量的5-20%，甚至达到50%以上。但是，大肠杆菌表达的蛋白质，当含量相当大时，有时由于原核细胞缺少分泌到胞外的机制或者折叠的机制，最后表达的蛋白质往往以无活性的包涵体的形式存在。
2. 包涵体表达蛋白质的优越性
为了研究基因的功能，可以把体内的基因转移到其他表达宿主中，研究基因表达性状以确定基因的功能。但是，外源基因的表达，特别是真核生物基因在大肠杆菌中的表达，由于宿主菌缺乏此种基因表达的调控机制，细胞内的化学环境与其天然环境差异，如氧化还原环境、胞内pH、自由水的浓度，以及外源基因的导入，使得表达目的蛋白质的细胞在非正常状态下生长，表达的蛋白质多数以无活性的包涵体的形式存在。
在下游生产过程中特别是在医药生产中，以包涵体形式表达的蛋白质具有一些优越性。
⑴ 异源表达的蛋白质很容易被宿主细胞内的蛋白质酶降解，如果重组蛋白质以包涵体形式表达，由于包埋了酶攻击的位点，可以最大限度地抵抗蛋白质酶的攻击；
⑵ 包涵体表达的蛋白质没有活性，细胞破碎和以后的纯化步骤不用考虑蛋白质的失活问题；
⑶ 包涵体形式表达的蛋白质与宿主细胞的其他蛋白质的分离比可溶蛋白质的分离方法简便，造价低，使用简单的离心或者过滤的手段就能使包涵体与宿主细胞的其他蛋白质成分进行有效的分离；
⑷ 有些表达的外源蛋白质对细胞有毒性或者致死，大量表达时会导致细胞的死亡，最终的细胞数量和产物相当低；而包涵体形式的蛋白质由于丧失了生物活性从而可以高效大量地表达；
⑸ 对于以包涵体形式表达的产物可以比较容易进行在线观测定性，含有包涵体蛋白质的细胞有较大的折射率，不必像可溶的蛋白质需要细胞破碎后使用酶学或者电泳学的方法进行鉴定。
包涵体的形成和蛋白质在等电点或者高盐情况下的沉淀是不同的。在沉淀过程中，分子是通过分子表面的相互作用而形成的分子的聚集，无论在聚集的沉淀状态还是在天然状态，没有明显的构象的变化。因此，当溶液中的pH重新改变，或者沉淀重新溶解的时候，蛋白质的结构和活性会重新获得。蛋白质的包涵体形式的聚集则不同于蛋白质的沉淀，把包涵体蛋白质直接溶解在天然的缓冲液中得不到天然的构象，无活性的聚集体与其天然活性形式之间没有自然的平衡转化的过程。包涵体的形成是由于范氏引力、疏水作用力和二硫键等作用力形成的，破坏这些作用力比较困难，溶解包涵体需要加入强的变性剂破坏多肽链之间的作用力，说明聚集体的多肽链之间的作用力远远大于普通的沉淀的分子间的作用力。当变性剂溶解的包涵体只是简单地通过稀释或者透析除去变性剂，而不是寻找合适的复性的条件的话，聚集体会重新形成，并且，不同于沉淀溶解的100%的活性的保留，包涵体的复性水平往往很低。所以，蛋白质沉淀是活性的天然蛋白质之间的作用力形成的，而包涵体的形成是在细胞内新合成的蛋白质肽链中间体而形成的，体外折叠时的聚集体是折叠过程中折叠中间体形成的。这些折叠的中间体并不一定是形成高级天然结构的中间体，从天然结构也不能推论出折叠中间体的构象。
① 包涵体就是蛋白的变性聚集后的产物，6M盐酸胍及8M尿素是作为溶解包涵体的溶剂。
② 复性的过程是逐步去除盐酸胍或者尿素，从而使得蛋白天然构象逐步形成。
所以一般如果起始使用的是6M盐酸胍进行包涵体溶解，这个过程中逐步降低的是盐酸胍的浓度。梯度离心或者差速离心去除细胞碎片，一般1000r/min左右就差不多可以达到效果。包涵体是表达过快的蛋白来不及折叠而形成的蛋白团，所以一般蛋白纯度能够达到95%以上，用6M盐酸胍就基本把包涵体分开，再超滤一下加上缓冲液就基本上很纯了
温度：除一些特殊的嗜热蛋白，绝大多数蛋白质在低温时更容易保持稳定。故长期保存蛋白质需要超低温（-80度）冻存，或者液氮抽滤成冻干粉。
pH：过酸或者过碱的pH环境容易导致蛋白质变性沉淀，而过于接近蛋白质等电点的pH环境也容易造成蛋白质不稳定。
盐浓度：不同的蛋白质有不同的亲疏水性，也就是说有些蛋白质在较低的盐浓度时比较稳定，有些则相反。
化学试剂：一些化学试剂如重金属盐、尿素、乙醇、盐酸胍等等会破坏蛋白质结构，造成蛋白质不稳定。
物理因素：剧烈搅拌或者震荡形成的剪切力，加压造成的内部肽键断裂都会造成蛋白质的不稳定。
盐酸胍法辛为白色至类白色结晶粉末，难溶于水和乙醇，在甲醇中有相对较高的溶解度（>30mg/mg）。
盐酸胍法辛是选择性α2-肾上腺素受体增效剂，最早用于治疗中度至重度高血压，以口服给药的片剂给药，在美国的商品名为Tenex，规格为1mg或2mg。
由于盐酸胍法辛该药物具有很强的中枢作用，且该药物血浆蛋白结合率高，普通剂型释放速率过快使得血药浓度峰值偏高，诱发其副作用，如倦睡、头晕、入睡困难、恶心、呕吐、健忘等。
目前，盐酸胍法辛的合成报道不多，文献报道的方法主要有以下5种。
方法一：2,6-二氯苯乙腈溶于甲醇，缓慢加入浓硫酸，80℃加热进行醇解，保温12h，反应完毕缓慢加入到含有少量水的甲醇中搅拌30min，蒸馏回收大部分甲醇后，再加入适量水，用乙酸乙酯提取，有机层干燥旋蒸除去乙酸乙酯，得2,6-二氯苯乙酸甲酯；将2,6-二氯苯乙酸甲酯溶于异丙醇，然后将溶液加入到胍的异丙醇溶液中，室温搅拌10h，真空抽滤得胍法辛粗品。向粗品中加入异丙醇调成浆状后，用盐酸乙醇调pH值约1～2,真空抽滤，除去不溶物，滤液浓缩得盐酸胍法辛；
该方法以浓硫酸制备2,6-二氯苯乙酸甲酯，而浓硫酸容易残留。
方法二：2,6-二氯苯乙酸溶于甲苯后加入到胍的甲苯溶液中，120℃加热回流12h，减压蒸馏除去甲苯，得胍法辛粗品，将胍法辛粗品加入到异丙醇中调成浆状，用盐酸乙醇调节pH值约1～2,真空抽滤，除去不溶物，滤液浓缩得盐酸胍法辛；
该方法工艺简单，但使用了毒性较大的甲苯作为反应溶剂。
1，一般温度高于60摄氏度持续一段时间会变性。不同蛋白耐受高温不同，具体问题具体分析。
2，高浓度有机溶剂，如丙酮，乙醚，巯基乙醇等。
3，含有蛋白酶环境会分解蛋白。
4，变性剂，如高浓度盐酸胍和尿素。，
5，盐溶液，在一定浓度盐作用下，会使蛋白中折叠在内部的疏水集团暴露而改变折叠结构。
6，pH值变化，强酸强碱条件下会破坏蛋白质结构。等电点时蛋白质沉淀。
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因此，克服和避开上述内容可以减少变性。具体措施：
1，控制温度，pH值。避开强酸强碱和等电点。
2，尽量减少和有机溶剂和变性剂的接触。
3，添加蛋白酶抑制剂，可以减少蛋白分解。
4，盐浓度适宜，不能太高。
5，增加NMSF，N-马来酰亚胺，去氧胆酸钠等抗氧化物质，可以防止蛋白被氧化变性。
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