乙醇钠在乙醇中多少达到饱和

1、苯、乙醇、水三元共沸法　将固体氢氧化钠溶于乙醇和纯苯溶液中（或环己烷和乙醇溶液中），加热回流，通过塔式反应器连续反应脱水，使总碱量和游离碱达到标准为止。塔顶蒸出苯、乙醇和水的三元共沸混合物，塔底得到乙醇钠的乙醇溶液。

2、金属钠法　由金属钠与无水乙醇作用蒸干乙醇制得。

c2h5ona

+

h2o

=

c2h5oh

+

naoh

所以在水中，等摩尔数的乙醇钠和氢氧化钠的碱性相等。

但在碱性溶剂中，同等浓度下肯定是乙醇钠碱性强。这个很容易理解，因为乙醇电离出氢离子的能力比水弱（即乙醇的酸性比水弱），那么作为乙醇的共轭碱，乙醇钠的碱性一定比水的共轭碱（氢氧根）的碱性强。具体的比较方法是通过以下实验：选择一种碱性溶剂（如液氨，注意不是氨水），将两种碱溶于其中，分别测定二者的电导率，电导率高的（即电离能力强的）就是碱性较强的那种碱。

在水中因为乙醇钠水解而无法比较二者碱性强弱。其实所有比氢氧化钠强的有机碱（醇钠，氨基钠，氢化钠等），其碱性的强度测定都是在无水碱性溶剂中进行的。因此可以很肯定地告诉你，做这种酸性碱性的比较，一定要指明溶剂是什么。溶剂是水，则碱性相等。溶剂是碱性溶剂，则乙醇钠碱性强。溶剂是有机溶剂，因为乙醇钠在有机相溶解度更大，因此也是它碱性强。

乙醇钠有固体和液体两种类型。

所以，不能笼统地说乙醇钠溶液和乙醇钠一样，也不能笼统的说乙醇钠溶液和乙醇钠不一样。

DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。因此，本实验的目的是学习植物基因组DNA提取方法、原理和DNA的鉴定技术。

Ⅰ 植物基因组DNA 的提取（CTAB法）

一、原理

植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。

在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：

（1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。

（2）抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。

（3）防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解，一般综合考虑，取pH8.0左右为宜。

（4）防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等，DNA分子特别大，其分子量可达1012道尔顿，极易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂，所以在抽提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动。

（5）植物的次生代谢物（主要是胞质内的多酚类或色素类化合物）对核酸提取有干扰作用。因此，一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料，这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少，DNA含量高，且易于破碎，植物材料最好是新鲜的。

分离提取植物DNA的方法很多，本实验采用CTAB法提取DNA并通过紫外吸收法和电泳鉴定。

二、操作方法

（1） 取200mg样品(在液氮中研磨成粉末状)放入1.5mL离心管中，加入600μL DNA提取液，颠倒混匀5-6次。65℃保温35分钟以上，其间颠倒混匀一次。

（2）再加等体积的氯仿异戊醇(24：1)溶液轻轻摇晃30秒，在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后，取吸上清液(450μL)

（3） 再加两倍体积的预冷异丙醇，混匀静止10分钟以上，在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后，弃上清。

（4） 用600μL70%乙醇洗涤沉淀，重复一次，在室温下倒置晾干。

（5）沉淀用TE溶液溶解DNA，再加入RNase至终浓度50μg/mL，在37℃下保温半小时，将DNA样品放入冰箱保存。

Ⅱ 植物DNA 纯度的鉴定——紫外分光光度计法

一、原理

由于核酸中的碱基都具有共轭双键，所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线，其吸收高峰在260nm处，吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处，所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量。

纯度鉴定时，需测定在230、260和280nm处的消光值，经验数据表明，

纯净的核酸溶液A260/A230的消光值比大于或等于2.0；A260/A280大于或等于1.80。A260/A280值过小，说明蛋白未脱净；A260/A230过小，说明有杂质（一般为多酚类或色素）。

含量测定时，对于纯净的DNA来说，在实际应用中可根据260nm处的消光值O.D260值换算成含量，一般认为O.D260值为1时，相当于50μg/ml。在测定核酸粗制品时，样品中残留的蛋白质和色素等与其它具紫外吸收的杂质对测定有明显干扰作用，大分子核酸制备过程中变性降解后有增色效应，因此有时此法测定的结果会高于定磷法。

二、实验材料、仪器及试剂

1、材料 植物DNA

2、器材：紫外分光光度计、移液管、试管

3、试剂：TE溶液（pH8.0）（见前述）

三、操作方法

将纯化的DNA溶液用TE（pH8.0）稀释至每毫升含5-50μg DNA浓度范围，用TE（pH8.0）作空白对照，于紫外分光光度计上测定260nm、280nm和230nm吸收值，计算A260/A230和A260/A280的比值，并换算出核酸的含量。

Ⅲ 植物DNA 分子量的测定——琼脂糖凝胶电泳法

一、原理

以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳广泛应用于核酸研究中，其操作简单、快速，是分离、鉴定、纯化DNA的标准方法。DNA分子在高于其等电点的pH溶液带负电荷，在电场中向正极移动。DNA分子在电场中通过凝胶介质而泳动，除电荷效应外，还有凝胶介质的分子筛效应，也就是说与分子大小构象有关。实验表明DNA迁移率与其分子量的对数成反比。因此通过参比已知标准分子量的DNA迁移率，可测定样品DNA的分子量。用低浓度的荧光物质，插入性染料溴化乙锭（EB）使凝胶中DNA区带染色，在紫外光下可直接显示DNA在凝胶中的位置，灵敏度很高，可检出10ng（10-9g）或更少的DNA含量。

二、实验材料、仪器及试剂

1、材料： 植物DNA

2、器材：水平板型电泳槽装置 电泳仪 254nm波长的紫外分析仪塑料手套 移液管 水浴锅

3、试剂：

（1）T ris-HAc(TAE)缓冲液

A．浓缩的贮备液（50倍）每升含：242gTris 57.1ml冰醋酸，100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）。

B．使用浓度：0.04mol/L Tris-HAc/0.04mol/L EDTA。

（2） 琼脂糖：电泳纯以上。

（3）溴酚蓝甘油溶液（0.05%溴酚蓝-50%甘油溶液）：先配制0.1%溴酚蓝水溶液，然后取1份0.1%溴酚蓝溶液与等体积的甘油混合即成。

（4）已知分子量的标准DNA（λDNA-ECORI/Hind III）。

（5） 10mg/mL溴化乙锭水溶液（EB）或GV水溶液。

三、操作方法

1．琼脂糖凝胶板的制备

称取0.7g琼脂糖置于三角瓶中，加入100mlTAE缓冲液，在沸水浴中加热至琼脂糖完全溶解，冷却至50℃，然后加入EB溶液使终浓度为0.5μg/ml。倒入凹形有机玻璃槽（事先用胶带封住有机物玻璃板的边缘）。使其成2mm左右的凝胶板。在其未凝固前将样品槽模板（梳子）插入凝胶的一端，注意梳齿底与凝胶底之间应至少保持0.5-1.0mm的凝胶。待全部凝固后（室温，约30-45分钟），取出梳子及除去胶带，将凝胶板与玻璃板一起放入电泳槽内，加入TAE缓冲液使刚好超过凝胶面约1mm。

2．加样：将样品与溴酚蓝按4：1的比例混合，用移液器缓慢加入凝胶样品孔中，点样量为每孔5μgDNA。

3．电泳：点样端接负极，电泳开始时，可用较高的电压，如100伏特，这样可使样品很快进入胶内，而减少样品扩散，待样品进入胶内即可保持每厘米

5伏特左右的电压，DNA在电泳中向正极移动。当溴酚蓝的区带移至距凝胶底部1-2cm，停止电泳，当胶板为10-15cm的长度时，电泳时间一般为2小时左右。

(4)观察与鉴定

电泳结束后，取出凝胶板，在波长为254nm的凝胶成像系统下，观察电泳图谱，如果电泳条带清晰(如果EB染色看到桔黄色荧光条带，GV染色则看到绿色荧光条带)，将凝胶照相。根据标准DNA的电泳图谱，可以得知样品DNA的分子大小。

一、【实验探讨】

有所学知识可知，分子式为C2H6O的结构简式有两种：CH3CH2-OH,CH3-O-CH3。由结构式可知，当乙醇的结构式为第一种情况时，则与钠反应断开的键为羟基上的氢氧键，则产生氢气的量与所用乙醇的量的关系为2:1的；若乙醇的结构式为第二种情况，则因为所有氢的化学环境相同，则产生氢气的量与所消耗的乙醇的量为3:1的关系。因此，有以上分析我们可知，当产生氢气的量与加入乙醇的量为2:1的关系时，乙醇的结构式为CH3CH2-OH，当产生氢气的量与加入乙醇的量的3:1的关系时，则乙醇的结构式为CH3-O-CH3。

二、【实验原理】

钠与乙醇反应，生成乙醇钠并逸出氢气。由于生成的乙醇钠包在钠的表面，使反应缓慢，甚至中止。采用加热（使钠与乙醇钠熔融）与搅拌的方法，改进集气装置，能有效地提高氢气得率。

三、【实验装置】

四、【实验步骤及现象 】

4.1步骤

(1) 按实验装置图装好实验装置，在试管里放入已擦干煤油和去除氧化膜的钠粒（半个黄豆大小），试管的胶塞中央，插人一个事先抽入0.4mL无水乙醇的注射器。

(2) 经检查装置的气密性后，缓慢挤压注射器慢慢的加人0.1rnL无水乙醇，同时尽量摇动试管，使钠与无水乙醇充分接触一段时间后在加入一些乙醇，加入量不宜过多，速度也不宜过快，同时用量筒用排水法收集生成的氢气。当反应接近停止时，可将试管稍稍加热。等到没有气体产生、使装置冷却到室温时，准确读出量筒上的刻度，这就是室温下0.4mL无水乙醇与足量钠反应生成氢气的体积。

4.2现象 

钠与乙醇接触后钠渐渐的融化成小球，同时钠表面有大量气泡生成，反应较剧烈但是不如钠与水来的剧烈，用手摸量筒外壁有烫烫的感觉，排水法收集到了氢气的体积为47.0ml

五、【实验数据处理及结论】

5.1数据处理

（1）在量筒中总共收集到1V=47.0ml的水，即可说明实验中产生了47.0ml的氢气。 实验时室温1T=20.8℃=293.95K  大气压1P=101.330Kpa

（2）换算成标况下的氢气体积，

而0.4ml乙醇的量可产生的氢气体积（标况）

5.2结论

通过实验数据的计算可知乙醇的结果式为CH3CH2-OH。

氢氧化钠含有的杂质通常有铁、氯化钠、硅酸盐、碳酸盐等。取100g工业氢氧化钠溶于1L无水乙醇(不含乙醛)中，在不含二氧化碳、湿气的干燥空气中过滤，去除氯化物、碳酸盐、硅酸盐等杂质，浓缩滤液去除乙醇。

随着浓缩分离掉生成的固体乙醇钠。用纯无水乙醇洗涤数次，长时间减压加热去除残留的乙醇，则得到纯度为99.8%左右的氢氧化钠。

扩展资料：

对库存的氢氧化钠每季度至少检测一次，由于氢氧化钠放置时间过长，表面会与空气中二氧化碳发生反应，因此需要检测其有效成分的含量。将氢氧化钠试样充分溶解后，用标准的盐酸溶液来滴定，且同时用酚酞作指示剂，来测定氢氧化钠有效成分的含量。

取干净的已知重量的称量瓶，加入20g左右的固体氢氧化钠，将盖盖紧称重；再用量筒量取40mL左右的氢氧化钠溶液倒入称量瓶。

然后将试样移入500mL锥形瓶中，用蒸馏水冲洗称量瓶3~4次，再加100mL左右蒸馏水，慢慢摇动至全部溶解，稀释至400mL左右，冷却到室温后，充分混合。