邻联甲苯胺在配制的时候为什么溶液会显示为灰色

水中余氯的测定(邻联甲苯胺比色法)

1.原理:水中余氯与邻联甲苯胺(O-tolidine)作用产生黄色的联苯醌化合物,根据其颜色的深浅进行比色定量,亦称为甲土立丁法.

2.主要器材:余氯比色测定器1个10ml小试管3支1ml吸管2支滴管1支.

3.主要试剂:

0.1%邻联甲苯胺(甲土立丁)溶液: 称取甲土立丁1g于研钵中,加入5ml 3:7盐酸调成糊状,稀释成1000ml(或按以上比例少量配制),存于棕色瓶中,在室温下可保存6个月,如溶液变黄则不能使用.

4.测定方法:取10ml刻度试管,加入0.5ml甲土立丁溶液,加水样至10ml刻度处混匀,放置3～5分钟后在余氯比色器中与标准色列进行比色,测出水样中余氯含量(mg/L).

如基层无余氯比色计可根据呈色和氯臭味,按表3-1估计水样中余氯的大致含量.

表3-1 余氯含量的目测估计表

估计余氯含量mg/L

呈现颜色

氯臭程度

0.3

淡黄色

刚能嗅出氯臭

0.5

黄 色

容易嗅出氯臭

0.7～1.0

深黄色

明显嗅出氯臭

2.0以上

棕黄色

有较强刺激味

如加入甲土立丁溶液后水呈绿色或蓝色,说明水中有石灰或锰含量过高,或水样碱度过高,可加入1:2的稀盐酸1ml,再比色.

若无甲土立丁试剂,可用淀粉碘化钾法测定余氯.即:取消毒过的水样10ml注入试管中,加碘化钾2～5粒,1%淀粉溶液5滴和1:3盐酸2滴,摇匀后由上口向下观察,如有微蓝色出现时,其余氯相当于0.2～0.4mg/L之间若呈蓝色,相当于0.5mg/L无蓝色出现,说明加入漂白粉量不足.

5.注意事项:

(1)水样温度维持15～20℃,此温度时显色最好.如水温低,可适当加温再比色.

(2)漂白粉含有效氯低于15%时,不宜做饮水消毒用.

(3)测余氯时,如水样有颜色和浊度,应向水样中加脱色剂1～2滴,消除颜色和浊度.常用的脱色剂有:巯基琥珀酸溶液,0.1mol/L硫代硫酸钠溶液和10%亚硫酸钠溶液.

(4)生活饮用水的余氯标准:含氯消毒剂与水接触30分钟后,水中余氯含量不应低于0.3mg/L,集中式给水的出厂水应符合此标准.管网末稍水不应低于0.05mg/L.

大便隐血试验【也叫邻甲联苯胺法（OB）】。是快速测定消化道出血的一种简便方法，而且无痛。主要用于检验肉眼不可见的少量出血。大便隐血试验仍是当今大肠癌普查中使用最广泛而且评估最多的一项试验。原理：血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的活性，能催化过氧化氢放出新生态氧，将受体邻联甲苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色，呈色的深浅反应了血红蛋白的多少，即出血量，灵敏度高的可检出0.2~1mg/L的血红蛋白，相当于消化道1~5ml的出血。方法：取大便少许涂于大便隐血试纸（可以自制）上，再滴加3%双氧水后观察。观察结果：（—）2min内不变为蓝色（+）30~60s后呈蓝色（++）立即呈蓝绿色（+++）立即呈深绿色注意事项：1粪便标本在粪块中央挑取，不能混入肛门、直肠的出血，粪便应新鲜，为提高检出便中血液的几率，可多次采集大便样本。2，3%的双氧水必须有效，还应该做阳性对照试验，将双氧水涂在血片上，有泡沫则可用3 试验前3天内不要食用动物血、肉、肝、铁剂（硫酸亚铁，枸缘酸亚铁、红色补丸、富马酸铁）、富含叶绿素的食物（菠菜、青菜），避免假阳性反应；亦不可大量服用Vc或其他有还原作用的物质，避免出现假阴性反应。4牙龈出血，鼻出血、经血亦可导致阳性反应。5用具应杀菌处理临床意义：1上消化道有出血：OB呈阳性2消化性溃疡：阳性率40%~70%,呈间断性阳性，治疗粪便外观正常时，OB仍可持续5~7天阳性，此后若出血停止OB可转阴；只要消化道出血大于5ml，即可出现阳性，但不作为诊断的直接依据；若OB呈强阳性提示消化性溃疡合并出血3消化道癌症：阳性率95%，呈持续阳性，可OB可作为消化道癌筛选指标4流行性出血热：阳性率84%，OB为重要佐证5药物导致胃粘膜损伤（Eg阿司匹林、消炎痛、糖皮质激素等）肠结核、溃疡性结膜炎、结肠息肉、钩虫病等，OB显示阳性。综上所述，大便隐血试验前3天最好不吃鸡蛋。

1.本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与糖醛起反应，不与血中其他还原物质起反应。故测定值较Folin-吴宪法为低。

2.显色反应与水的含量有关，故应使标准管和测定管的含水量一致。

3.温度对显色反应有明显影响，煮沸时间和温度应准确控制。

4.显色后颜色不稳定，室温每放置1分钟，颜色降低0.15％。

5.邻甲苯胺试剂中冰醋酸浓度很高，使用不当容易损坏比色仪器。

6.邻甲苯胺是致癌剂，测定过程中应小心使用。

其实都是HRP催化底物反应,与固相载体无关,他们在反应的整个过程都起到了相同的作用－－供氢体

HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2).供氢体多为无色的还原型染料,通过反应可生成有色的氧化型染料(D).酶促反应的过程如下:

HRP

DH2＋H2O2────→D＋2H2O

目前用得较广泛和较满意的供氢体是：OPD(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺).

DAB(3.3－二氨基联苯胺)的反应产物为不溶性沉淀物,并有电子密度,故适宜于做免疫酶染色或电镜观察.

5AS(5-氨基水杨酸)早期曾用于ELISA,但其溶解度不够大,且空白孔不易控制到无色,现已很少应用.

OT(邻联甲苯胺)的特点是能产生鲜艳的蓝绿色产物且灵敏度较高,但反应中受温度影响较大,而且由于产物不稳定,需要在短时间内进行测定.

目前用得较广泛和较满意的供氢体是：OPD(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺).前者形成的产物为深桔黄色或棕色,后者产物为蓝绿色,二者的可溶性均好,在避光处颜色稳定,空白可近于无色,灵敏度上据报道后者比前者可高4倍以上.

另外,还有一种供氢体称ABTS[2, 2'-边氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)],其反应产物呈蓝绿色,且灵敏度和稳定性均好.尤其是在致癌的潜在可能性方面,ABTS与TMB皆是值得被优选的供氢体.

肌红蛋白( Mb) 和血红蛋白(Hb) 一样，分子中含有血红素基团，具有过氧化物酶样活性，能催化H202 作为电子受体使色原(常用的有邻联甲苯胶、氨基比林、联苯胶等)氧化呈色，其颜色的深浅与肌红蛋白或血红蛋白含量成正比。肌红蛋白能榕于80% 饱和度的硫酸铵溶液中，而血红蛋白则不能，可以此区别。

首先测试尿液中有无血红素的存在，即依次加入新鲜尿液4 滴，邻联甲苯胺(或四甲基联苯胺)溶液2 滴， 混匀后，加入过氧化氢溶液3 滴，如有蓝色或蓝绿色出现，表示尿中有Hb 或(和) Mb的存在。

2. 离心或过滤使尿液透明，吸取5 ml ，加入硫酸铵粉末2.8 g ，使之溶解混合，约为80% 饱和度，静置5 min ，用滤纸过滤。取滤液重复测试有无血红素存在，如显蓝色，表示Mb 阳性。如不显蓝色，表示血红素已被硫酸铵沉定，为Hb 阳性。

试剂

1.  10 g/L 邻联甲苯胶( o-tolidine )溶液取邻联甲苯胺1 g ，溶于冰乙酸和无水乙醇各50 ml 的混合液中，置棕色瓶中，放冰箱内保存，可用8 - 12周，若梅液变深褐色，应重新配制。

2.  过氧化氢榕液冰乙酸1 份，加3% 过氧化氧溶液2 份。

3.  硫酸铵粉末用化学纯制品。

余氯（residual chlorine ）即水中投氯，经一定时间接触后，在水中余留的游离性氯和结合性氯的总称。

余氯可分为化合性余氯（指水中氯与氨的化合物，有 NH2Cl、NHCl2 及 NHCl3 三种，以 NHCl2 较稳定，杀菌效果好），又叫结合性余氯；游离性余氯（指水中的 ClO-、HClO、Cl2 等，杀菌速度快，杀菌力强，但消失快），又叫自由性余氯；总余氯即化合性余氯与游离性余氯之和。

自来水出水余氯指得是游离性余氯

水中余氯检测方法比较

1 材料与方法

1.1 试剂：邻联甲苯胺溶液(甲土立丁)、余氯标准比色溶液、0.00564 mol/L硫化硫酸钠标准溶液、5 碘化钾溶液、pH一4醋酸缓冲液、0.5%淀粉溶液、0.0282 mol/L碘标准溶液。

1.2 方法

(1) 比色法：

① 被测样品温度宜为15℃～20℃，如低于此温度，应先将样品浸入温水中使其温度升至15℃～20℃后，再测定数值。

② 在盛有5ml样品的比色管内，滴加邻联甲苯胺溶液2～3滴，混匀。

③ 将样品置于黑暗处，静置15分钟后，与余氯标准比色溶液比较测定，其结果为样品总余氯含量(比色时，眼睛从管口向下或由前面观察)。

④ 如余氯浓度很高时，会产生桔黄色；当样品碱度过高以及余氯浓度很低时，可能产生淡蓝绿色或淡蓝色。此时，可再加入lml(1+2)盐酸或lml邻联甲苯胺溶液，即可产生正常的淡黄色，再进行测定。

(2) 碘滴定法(碘标准溶液反滴定法)：

① 污水水样中余氯小于10 mg/L时，取200ml污水样；余氯多时，应按比例减少水样体积。

② 将200ml污水样加入500 ml锥形瓶中，加入5～ 20ml 0.00564mol/L硫化硫酸钠标准溶液，lml 5 碘化钾溶液和1 ml醋酸缓冲液，加入1 ml淀粉溶液使pH 保持在3.5～4.2之间。用0.0282 mol/L碘标准溶液滴定，滴至刚显淡蓝色为终点(混匀后蓝色不应消失)。把1滴碘液的体积(约为0.05 m1)从读数中减去。200 ml污水样消耗1 ml 0.00564N 硫化硫酸钠溶液时，相当于存在lmg/L余氯，故余氯在5mg/L时，需用5 ml试剂；余氯在10mg/L时，应加入10 ml试剂。污水中余氯更高时，就按比例增加试剂。碘滴定法测得的余氯为总余氯，并按下式计算：

Cl2(mg/L)=[(A一5B)×200]/c

式中：Cl2 一总余氯(mg/L)；

A一0.00564 mol/L硫化硫酸钠标准溶液的ml数；

B一0.0282 mol/L碘标准溶液的ml数；

碘量法滴定比较精确，该法分析步骤较多，操作繁琐；

比色法可以作水厂粗略测定余氯含量，快速、简便但是精度不高。两种方法各有各的用处。

尿的干化学试带可检测的项目有蛋白质、葡萄糖、酮体、隐血、胆红素、尿胆原、亚硝酸盐、比重、PH值等。

（1）

蛋白质（PRO）：PH指示剂蛋白误差原理。干化学试纸中含有溴酚蓝、枸橼酸缓冲系统及表面活性剂，其中溴酚蓝的PH阈为3.0-4.6，在PH3.2时会产生阴离子，与带阳离子的蛋白质结合后产生颜色反应，本试剂只适合于白蛋白的检测，球蛋白浓度高时呈弱阳性。

（2）

隐血（BLD）：血红蛋白中含有血红素基团，具有过氧化物酶活性，可使试带中的过氧化物（如过氧化氢茴香素）放出新生氧，将邻联甲苯胺受体氧化成蓝色化合物。本试带不能区分血红蛋白和肌红蛋白，与血红蛋白起反应时呈均匀的绿-蓝色；与红细胞起反应时呈斑点状绿-蓝色。

（3）

葡萄糖（GLU）：葡萄糖氧化酶法。试纸中含有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、缓冲剂及显色原。尿液中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下，天生葡萄糖酸内酯和过氧化氢，后者在过氧化物酶的催化下使色素原（如邻联甲苯胺、碘化钾等）氧化而呈色。

（4）

酮体（KET）：尿酮体包括乙酰乙酸、丙酮和β-羟丁酸。含酮体的尿液中加亚硝基铁氰化钠后，与氨液接触时出现紫红色环。

（5）

白细胞（LEU）：粒细胞中存在酯酶，能作用于试纸中的吲哚酚酯（特异性酯酶底物），使后者开释出吲哚酚，吲哚酚又与重氮盐发生反应形成紫色络合物，根据显色深浅换算白细胞数。本实验只能检测出粒细胞，而不能检测淋巴细胞。

（6）

亚硝酸盐（NIT）：Griess实验原理。试纸中含有对氨基苯胂酸，被亚硝酸盐重氮化而成重氮盐，后者与1，2，3，4-四氢苯并喹啉-3酚偶联产生粉红色。当尿液中含有硝酸盐还原阳性菌（如大肠埃希氏菌）存在并繁殖时，呈阳性反应。而球菌、真菌或支原体感染时呈阴性反应。

（7）

比重（SG）：试纸中含有高分子电解质甲乙烯酸/马来酸及指示剂麝香草酚蓝等，高分子电解质的COONˉ基与尿中的电解质发生反应时开释出H+，后着使指示剂变色。

（8）

胆红素（BIL）：重氮反应原理。试纸中含有2，4，2-三氯苯胺重氮盐，在强酸介质中葡萄糖醛酸胆红素与2，4，2-三氯苯胺重氮盐起偶联反应呈紫红色。

（9）

尿胆原（UBG）：重氮反应原理。

（10）

PH值：试纸中含有指示剂，一般为两种酸碱指示剂如甲基红（PH为4.6-6.2）和溴香草酚蓝（PH为6.7-7.5）适当配合。变色范围一般为4.5-9.0，由橙红色→蓝色。

（11）抗坏血酸（VitC）：吲哚酚法。尿中含高浓度的抗坏血酸，可使试带的葡萄糖、隐血试验呈假阴性，因此有的干化学试带上含有抗坏血酸，以便对尿液分析结果作正确判定。

1.加入Na2CO3,有气体产生的是苯甲酸或邻羟基苯甲酸

2.加入Fe3+,发生显色反应的是邻羟基苯甲酸,反之是苯甲酸.

3.另一组加入苯磺酰氯,再加氢氧化钠,产物溶于水的是N-甲基苯胺,反之是邻甲苯胺.

先加碳酸钠,有气体产生的是苯甲酸和邻羟基苯甲酸,将这两个加氯化铁溶液,显紫色的是邻羟基苯甲酸,另一个是苯甲酸.剩余两个加苯磺酰氯,出现沉淀后,分别加氢氧化钠溶液,能溶解的是邻甲苯胺,不溶的是N-甲基苯胺