用紫外分光光度法检测乙醇中是否含有苯

紫外分光光度计可测试溶液在不同波长下的吸光度与透过率。其中，吸收光谱是由于物质中的分子或原子吸收了入射光中不同波长的光能，导致相应的分子发生振动能级跃迁和电子能级跃迁导致的结果。溶液对入射光的透过率不仅受其吸光度的影响，还有溶液对入射光的反射率有关。乙醇溶液在270nm处的透光率为0%，主要是由于乙醇分子对270 nm的光发生了吸收，而无法吸收500 nm处的可见光，因而乙醇溶液看起来是无色透明的液体。

1、λ=589.3nm和18.35°C下，乙醇的折射率为1.36242，即吸光度。

2、如何测定乙醇含量及各种方法：

乙醇含量的测定有物理方法和化学方法。

物理方法有气相色谱法、密度瓶法、酒精计法、折射计测定法。

化学方法重铬酸钾比色法、莫尔氏盐法、碘量滴定法。

乙醇的分子式为C H OH，也可写为EtOH，Et代表乙基。是醇类的一种，是酒的主要成份，俗称酒精，它在常温、常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体，它的水溶液具有特殊的、令人愉快的香味，并略带刺激性。乙醇的用途很广，可用乙醇来制造醋酸、饮料、香精、染料、燃料等。医疗上也常用体积分数为70%——75%的乙醇作消毒剂等。

乙醇是一种很好的溶剂，既能溶解许多无机物，又能溶解许多有机物，所以常用乙醇来溶解植物色素或其中的药用成分，也常用乙醇作为反应的溶剂，使参加反应的有机物和无机物均能溶解，增大接触面积，提高反应速率。例如，在油脂的皂化反应中，加入乙醇既能溶解氢氧化钠，又能溶解油脂，让它们在均相（同一溶剂的溶液）中充分接触，加快反应速率，提高反应限度。

乙醇的物理性质主要与其低碳直链醇的性质有关。分子中的羟基可以形成氢键，因此乙醇黏度很大，也不及相近相对分子质量的有机化合物极性大。室温下，乙醇是无色易燃，且有特殊香味的挥发性液体。

作为溶剂，乙醇易挥发，且可以与水、乙酸、丙酮、苯、四氯化碳、氯仿、乙醚、乙二醇、甘油、硝基甲烷、吡啶和甲苯等溶剂混溶。此外，低碳的脂肪族烃类如戊烷和己烷，氯代脂肪烃如1，1，1-三氯乙烷和四氯乙烯也可与乙醇混溶。随着碳数的增长，高碳醇在水中的溶解度明显下降。

由于存在氢键，乙醇具有潮解性，可以很快从空气中吸收水分。羟基的极性也使得很多离子化合物可溶于乙醇中，如氢氧化钠、氢氧化钾、氯化镁、氯化钙、氯化铵、溴化铵和溴化钠等。氯化钠和氯化钾则微溶于乙醇。此外，其非极性的烃基使得乙醇也可溶解一些非极性的物质，例如大多数香精油和很多增味剂、增色剂和医药试剂。

在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。它们与比色法一样，都以Beer-Lambert定律为基础。 上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区，可见光区，红外光区。

几种甲醇含量测定方法的比较<br>摘要：白酒中甲醇含量的测定方法包括比色法、气相色谱法、高效液相色谱法、蒸馏法等。采用气相色谱法和比<br>色法，对不同酒精度和不同甲醇含量的样品进行检测。结果表明，两种检测方法之间存在一定的差异，在实际检验过<br>程中应根据不同情况选用相应的测定方法。<br>关键词：白酒；甲醇；检测；气相色谱<br>甲醇是白酒中对人体有害的成分，为保障人体的健<br>康安全，国家发布的蒸馏酒及配制酒卫生标准中对白酒<br>中甲醇含量提出了严格的上限要求，以谷类为原料的白<br>酒中甲醇含量不得超过0.04 g/100 mL，以薯干及代用品<br>为原料的白酒中甲醇含量不得超过0.12 g/100 mL[1]。但<br>是在白酒生产发酵过程中会自然产生甲醇，同时由于甲<br>醇和乙醇的沸点接近，目前绝大部分白酒生产厂家的蒸<br>馏设备很难将其完全分离开来，所以白酒中不可避免地<br>含有一定量的甲醇。<br>目前，国内外检测酒中甲醇含量的方法主要有比色<br>法、气相色谱法、高效液相色谱法、固定化酶流动注射分<br>析法、酶电极法、激光拉曼光谱法、Fourier变换红外光谱<br>法、折射法、蒸馏法等[2]。白酒生产企业中的甲醇检测，既<br>要保证结果的准确性，又要节约检测成本，准确及时地出<br>具检测结果。因此，许多企业根据自身实际情况，选用了<br>不同的检测方法。<br>DNP气相色谱法因具有稳定性好、操作简便、检测<br>速度快、成本低等优点，在白酒企业得到广泛的应用，但<br>该法用于甲醇检测的准确度变化尚不明确；毛细管气相<br>色谱法为GB/T394.2规定的醇类测定第一法，该法具有<br>灵敏度高、分离效能和选择性好的优点，但检测所用时间<br>较长。比色法是GB/T5009.48规定的甲醇检测方法，该法<br>使用的仪器简单,但操作较为繁琐，吸光度易受温度、时<br>间等因素影响，对检验员的操作水平要求较高。本文拟就<br>上述3种方法在测定白酒甲醇时的准确性进行对比实<br>验。<br>1材料与方法<br>1.1试剂<br>甲醇（色谱纯）、无甲醇酒精、蒸馏水、高锰酸钾-磷酸<br>溶液、草酸-硫酸溶液、品红-亚硫酸溶液。<br>1.2设备<br>气相色谱（上海分析仪器厂1102型色谱仪）、气相色<br>谱（上海天美分析仪器厂7890型色谱仪）、紫外-可见分<br>光光度计（上海精密科学仪器有限公司754N）。<br>1.3方法<br>1.3.1样品的制备<br>为对比不同酒精度、不同甲醇含量的白酒按照上述3种方法进行检测时的误差情况，笔者结合目前市场上<br>常见成品白酒的酒精度分布，采用无甲醇酒精、蒸馏水配<br>制34%vol、39%vol、44%vol、52%vol 4种不同酒精度<br>样品各1000 mL，然后，将每个酒精度的样品分为4份共<br>计16个样品，再量取一定量的色谱纯甲醇分别加入到<br>16个样品中，使样品的甲醇含量分别为0.1 g/L、0.4 g/L、<br>0.8 g/L和1.2 g/L。具体样品规格见表1。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140324-704144154.jpg">1.3.2气相色谱法之一（固定相DNP）<br>选用上海分析仪器厂生产的1102色谱仪，色谱柱采<br>用填充柱，固定相为20%DNP。<br>色谱条件：载气（N2）流速为150 mL/min；氢气（H2）<br>流速为40 mL/min；空气流速为400 mL/min；气化室温度<br>为160℃；检测器温度为150℃；柱温为90℃。<br>打开N2000色谱工作站，选取正确的方法文件，吸<br>取样品1μL进样检测，检测结果见表2。<br>1.3.3气相色谱法之二（毛细管柱）<br>选用上海天美分析仪器厂7890色谱仪，色谱柱为交<br>联石英毛细管柱。<br>色谱条件：载气（N2）流速1 mL/min；氢气（H2）流速<br>30 mL/min；空气流速300 mL/min；检测器温度200℃[3]，<br>柱温采用程序升温：初始温度40℃，保持3 min，升温速<br>率为5℃/min，升至100℃后保持5 min，然后升温至<br>200℃保持5 min。<br>打开N2000色谱工作站，选取正确的方法文件，吸<br>取样品1μL进样检测，检测结果见表2。<br>1.3.4比色法<br>根据试样中乙醇浓度适当取样置于25 mL具塞比<br>色管中。吸取甲醇标准使用液分别置于25 mL具塞比<br>色管中，并加入0.5 mL无甲醇的乙醇。于试样管及标准<br>管中各加水至5 mL，再依次各加2 mL高锰酸钾-磷酸<br>溶液，混匀，放置10 min，各加2 mL草酸-硫酸溶液，混<br>匀使之褪色，再各加5 mL品红-亚硫酸溶液，混匀，于<br>20℃静置30 min，用2 cm比色杯，以零管调节零点，于波长590 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准<br>系列目测比较。此外，还可以采用建立线性回归方程的方<br>法来计算。检测结果见表2。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140404-2022133599.jpg">2结果与分析<br>2.1甲醇含量对测定结果的影响<br>由表2可以看出，样品中甲醇含量的多少，对3种检<br>测方法有着较为明显的影响，其变化曲线见图1。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140438-931846792.jpg">从图1可明显看出，当试样中甲醇含量小于0.4 g/L<br>时（样品1～4甲醇含量为0.1 g/L、样品5～8甲醇含量<br>为0.4 g/L），3种方法的检测结果差异较小；当甲醇含量<br>大于0.4 g/L时（样品9～12甲醇含量为0.8 g/L、样品<br>13～16甲醇含量为1.2 g/L），3种方法的检测结果差异<br>较大。<br>2.2酒精度对测定结果的影响<br>酒精度对测定结果的影响也比较显著，以甲醇含量<br>0.1 g/L的样品（样品1～4）为例，3种检测方法的结果<br>见图2，其中横坐标1～4分别代表酒精度为34%vol、</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140501-1579827409.jpg">39%vol、44%vol和52%vol的样品。<br>从图2可以看出，随着酒精度的增加，气相色谱法测<br>定的甲醇含量误差有增大的趋势，其中，DNP气相色谱<br>法受酒精度影响较大，毛细管柱气相色谱法次之。<br>3结论<br>3.1从检测结果看，当酒样中甲醇含量为0.1 g/L和0.4 g/L时，不同酒精度酒样，分别用3种检测方法检测<br>所得结果之间差异较小；而当酒样中甲醇含量为0.8 g/L<br>和1.2 g/L时，3种不同检测方法所得结果之间的差异较<br>大，相比而言，DNP法的检测结果误差最大，结果偏高，<br>毛细管柱次之。<br>3.2酒精度为34%vol和39%vol的酒样采用3种检<br>测方法的结果之间差异较小，而酒精度为44%vol和<br>52%vol的酒样采用3种方法检测结果之间的差异较<br>大，相比而言，DNP法的检测结果误差最大，毛细管柱<br>次之。因此，在实际检验工作中，当酒精度含量大于<br>40%vol时，不推荐使用DNP气相色谱法。<br>参考文献：<br>[1]GB/T5009.48-2003,蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析方<br>法[S]．<br>[2]李永生,齐娇娜,高秀峰.酒中甲醇测定方法的研究进展[J].酿<br>酒科技,2006,(1)：84-89.<br>[3]GB/T394.2-1994,酒精通用实验方法[S].

一、操作要领

1、先进行“使用前的检查”，一切正常后打开比色池暗箱盖，接通电源，预热20分钟。

2、调节波长选择旋钮λ至所需波长，灵敏度调节钮放在“1”位置。调节“0”电位器，校正电表指针指0。

3、将装有参比溶液及待测溶液的比色皿按顺序放入比色架中，使参比溶液处于光路位置，轻轻盖上比色皿暗箱盖，使光电管受光，调节“100%”电位器至电表指针至满刻度（T100%或A=0）处。

4、如果放大器灵敏度不合适（即步骤3中不能调满刻度），可重新调整灵敏度调节旋钮（放大器灵敏度有3档，是逐渐放大的，“1”最低，其选择原则是保证能使空白时调满刻度，尽可能采用灵敏度较低档，，这样仪器将有更高的稳定性），如果灵敏度不够，可逐渐升高，但改变灵敏度后，必须按步骤3重新校正“0”和“100%”。

5、按步骤3连续调整“0”和“100%”，直至稳定，至此调校完毕，即可进行测定工作。

6、轻轻拉动比色皿架拉杆，使待测液置于字光路位置，即可读取表头指针所指的读数（T%或A值）。

7、测量完毕，打开比色皿暗箱盖。

8、实验结束，关闭电源，将比色皿取出洗净，用软纸擦净比色皿架及暗箱盖，盖上暗箱，散热后，罩好仪器罩。

二、注意事项

1、使用721型分光光度计时，连续光照光电管的时间不可太长，以免光电管疲劳。不测定时，必须打开暗箱盖，切断光路，以光电管的使用寿命。

2、根据需要选择使用不同厚度的比色皿，同一厚度的一套比色皿应检查使用。方法是使一套比色皿盛装同一种有色溶液，测其透光率相对值，该值最大相差不应超过0.5%。

3、拿取比色皿时，只能用手捏毛玻璃片，且不可用手捏透光面，以免污损而影响透光性能。比色皿外壁的水珠应用镜头纸或柔软的吸水纸轻轻揩擦，不可用用硬纸或用力擦拭。

4、比色皿装溶液时，以装满2/3为宜，不可过满或太浅，以防拉动比色皿架时溅出或影响测定。对系列溶液的测量，应从稀到稠顺序依次进行，以减少误差。

5、比色皿应用盐酸-乙醇（1:2）混合液或1:1HNO3溶液浸泡，再用自来水，蒸馏水洗涤，不可用碱液、氧化性强的洗涤液（如铬酸洗液），以防腐蚀或造成粘结缝开裂。也不能用毛刷洗，以免损坏其透光面，更不能在炉子、火焰上或烘箱内加热干燥。

6、在分析工作中，根据有色溶液的浓度的大小选用适合规格的比色皿，以使溶液吸光度控制在0.2-0.8范围内，一面减少测量误差。

三、721分光光度计简介

721分光光度计是利用物质的光的吸收特征对不同物质进行定性或定量分析的仪器。

1、用途

广泛适用于冶金、化工、机械、医学、生物、农业、环保、教学等行业和领域。该仪器也是食品厂、饮用水厂办QS认证中的必备检验设备。

2、主要技术指标

波长范围：360∽800nm

波长精度：360∽600±3nm 600∽700±6nm 700∽800±8nm

透射比正确度：±2.5%

透射比重复性：0.5