提取RNA时，最后为什么要用75%乙醇洗涤

RNA在冷的无水乙醇里溶解度低，而蛋白溶解度高，因此可以用冷的无水乙醇把RNA沉淀下来从而达到提纯的目的。

2倍无水乙醇的是用来沉淀DNA的，也可以用2/3体积的异丙醇来沉淀DNA，NaAc则是提供钠盐环境，促进DNA沉淀，效果明显。

提取DNA时加入NaAc pH5.2和2倍体积的无水乙醇的作用是什么，主要是因为DNA在一定的盐浓度条件下才能更好地沉淀下来.如果你不急用其实可以沉淀过夜的。这样就可以少了75%乙醇洗涤的那一步，那一步主要是洗去多余的盐。急用的话就加吧，但是一定要用75%乙醇洗涤。

接着用异丙醇进行二次沉淀，随后用乙醇洗涤沉淀，可去除所有残留的蛋白质和无机盐. RNA样品中如果含有无机盐, 有可能对后续实验操作中的一些酶促反应产生抑制作用。

异丙醇是可以沉淀DNA的。后续或者前面应该有分离掉DNA的方法，因为DNA假如你是真核的话，通常是染色体的形式出现，分子量很大的，很容易沉淀下来，但是RNA的分子量就比较小，从而产生分离。

异丙醇可以沉淀RNA和蛋白质，其实。。。。假如很本质的看，都是差不多的，就是抢水。但是其还会让蛋白质变性，RNA什么的，不会，假如你不是研究什么二级结构的话。

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，

氯仿的作用有多个方面，一是作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去，同时也通过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配试剂提的方法也用苯酚，抽提蛋白时也会用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提烷之后水相里有痕量的酚，如果不除去会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用。

通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25），减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫，影响后续操作，不过个人经验感觉加不加没什么太大区别，也许是我的样品里蛋白不多吧

异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。只不过用量少一点，0.6V~1V就够了，不像乙醇沉淀需要至少2V，一般需要2.5倍体积。在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候。

2.碱性水浴条件下RNA水解为寡聚核苷酸而DNA不水解，调pH为了沉淀DNA（参考生物化学教材上关于稀碱法分离RNA的说法，但实验条件有所不同）

3.为了防止RNA过量水解成小分子而难以在乙醇中沉淀析出（参考生物化学关于RNA化学性质的说法）

乙醇能够消除RNA的水化层，使带负电荷的磷酸基团暴露出来.Na+之类的平衡离子能够与这些带电基团结合，在沉淀形成部位降低多核苷酸链之间的排斥作用.因此只有在阳离子的量足以中和暴露的磷酸残基的电荷时才会发生乙醇沉淀。

核酸不溶于乙醇，所以可以使用乙醇对核酸进行漂洗，使残留的杂质溶解于乙醇，并最终通过离心去除。可总结为去除DNA中的残留杂质（对混杂的RNA无效）。

提取时，保证核酸一级结构的完整性；核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

扩展资料：

通常与已知分子量的标准DNA片段一起电泳，经比较可获知DNA标本大小。如条带拖尾，系加入DNA量太多或凝胶未制好。若DNA分子量小或一片模糊，表明DNA有降解。

破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

RNA指的是核糖核酸。真核生物体的遗传物质存在于细胞核内，多数的真核生物使用DNA也就是脱氧核糖核酸来作为遗传的核心物质，但是少量的病毒遗传物质可以是RNA。正因为病毒的遗传物质是RNA，所以可以通过检测病毒的RNA是否存在，或者其浓度和含量来判断是否存在相应的病毒感染，感染的程度及病毒是否仍在大量复制。

乙醇俗称酒精，是一种有机物，具有特殊香味，并略带刺激、微甘。乙醇的用途很广，可以用乙醇制造醋酸、饮料、香精、染料、燃料等。医学上也常用70%-75%的乙醇作消毒剂，在国防、化工、医疗卫生、食品卫生、工农业生产中都有广泛的应用。