洁净室使用杀孢子剂擦拭消毒，但含过氧化氢和过乙酸、乙酸

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8246颗粒物防护口罩对（无机）酸性气体的异味有一定的减除作用，但乙酸属于有机物，8246并不太适合；现场工作时间每次长达6小时，人对乙酸的刺激味道非常敏感，减除异味类的防护口罩有可能快速失效。

根据您对作业情况的描述和我们对3M呼吸器对这两类毒物防护功能的了解，建议您选择防毒面具。过氧化氢是强氧化剂，乙酸对眼睛和呼吸道具有明显的刺激性，为保证在长时间工作中既安全又舒适，建议您考虑在保护呼吸道的同时，增加对眼睛的防护，如选择全面罩。

您可以选择的过滤式呼吸器如3M 6200半面罩或6800全面罩，配6001CN或6003CN滤毒盒都可以。

希望以上答复令您满意！如仍有疑问，欢迎向企业知道提问。

杀孢子剂是一种广谱高效的消毒剂，能够杀灭孢子、芽孢的一切化学消毒剂都可以叫作杀孢子剂。化学灭菌剂常称为Sporicide，由于中国的制药工业完全来自美国与欧盟标准，所以制药工业同时将Sporicide这个词引入，将其翻译为“杀孢子。

二、杀孢子剂的成分是什么？

制药行业所说的杀孢子剂的成分有多种，一般为过氧化氢+过氧乙酸，纯过氧化氢，过氧化氢+银离子，过氧化氢+过氧乙酸+醋酸等，但是不管哪一种都含有过氧化氢成分。

三、杀孢子剂的气味大吗？

不同成分的杀孢子剂的气味不同，纯过氧化氢的杀孢子剂是没有气味的，气味刺激的是含过氧乙酸的杀孢子剂。

四、杀孢子剂要达到什么效果？

按照规范要求杀孢子剂必须在10分钟以内对芽孢达到3log杀灭效果以上。

五、杀孢子剂有残留吗？

从杀孢子剂的成分上看，只有纯过氧化氢的杀孢子剂才是唯一一款无残留的杀孢子剂，也是PDA法规唯一指定没有残留的消毒剂。

六、杀孢子剂对人员有害吗？

每种市售的杀孢子剂都应该有相应的毒理检测报告，里面有说明毒性等级。化学消毒剂或多或少对人员有害，有害程度和成分有直接的关系，过氧乙酸的对人员的有害程度比较大，而过氧化氢对人员有害是zui低的。

七、杀孢子剂需要有EPA认证？

不是所有杀孢子剂都要经过EPA认证，美国生产的杀孢子剂需要经过EPA认证才能上市销售，而欧洲地区生产的杀孢子剂需要经过欧盟检测，拥有EN报告，EN报告作用等同于EPA认证，中国生产的杀孢子剂需要卫生许可证，这些都只是一种市场进入许可。

八、杀孢子剂需要做哪些验证？

需要做杀菌能力验证和残留验证。一般厂家会提供验证文件，也可以委托第三方做，收费应该不便宜。

九、杀孢子剂需要轮换交替使用吗？

消毒剂交替使用是为了防止耐受菌的产生，但是这个话题一直存在争议，根据新版GMP规范要求两种以上消毒剂使用。

十、杀孢子剂的成本高吗？

杀孢子剂属于灭菌剂，高效的消毒水平，比普通的消毒剂的成本会高些，物有所值嘛，无菌车间不可缺少杀孢子剂，合理的使用还是可以减少成本的，对于正规的企业这些是必须承担的，也是可以承担的。

制药厂洁净区芽孢和孢子是相对难以控制的微生物，因为许多制药企业都沿用酒精对物体表面进行擦拭，酒精对芽孢的抑制效果不理想，基本上是没有效果。如果采用其它的消毒方法要重新撰写验证报告，又要考虑残留和腐蚀性等诸多因素，困扰着企业更新消毒方法。芽孢、孢子的存在势必会对产品造成不良的影响，如果有一种新的消毒技术既可以高效杀灭芽孢抑制其生长繁殖又可以轻松通过GMP消毒验证。

比利时诺福杀孢子剂，是GMP无菌车间消毒专用的产品，诺福杀孢子剂的出现成功的破除了：消毒有刺激性，有害，有残留的传统消毒概念。

诺福是一款高效广谱的消毒杀菌剂，能够高效杀灭芽胞，彻底解决芽胞对无菌室等场所的困扰。主要成分是由高纯过氧化氢制成的试剂，所采用的氧化剂为活性羟基，是比利时IC集团研制、生产，是目前国际上一款卓越的杀孢子剂。由于其独特的作用原理，能够快速杀灭包括芽孢、细菌孢子、真菌孢子、放射菌、分支杆菌、酵母菌、霉菌、病毒在内的所有类型的微生物。

可以通过是否经过无菌检测来辨别是否为无菌杀孢子剂。

目前国内几乎没有能力生产杀孢子剂等级的高精试剂，国内制药厂等使用的杀孢子剂主要来自欧盟或美国，例如欧盟方面的德国Oxytech（过氧化氢银离子复合型），美国方面主要是复合型过氧乙酸（毒性和腐蚀性比较大）。欧盟杀孢子剂在安全性和腐蚀性方面比较理想，所占据的市场比重也越来越大。

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有过氧化氢复合过氧乙酸的杀孢子剂、过氧化氢银离子的杀孢子剂、高纯度过氧化氢的杀孢子剂。

芽孢也叫芽胞，有部分领域称之为“孢子”，但学术上芽胞和孢子是两种不同物质。芽胞是细菌的休眠体。某些细菌（芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌，少数球菌等）在其生长发育后期，在细胞内形成的一个圆形或椭圆形，厚壁，含水量低，抗逆性强的休眠体构造，称为芽孢。芽胞是整个生物界中抗逆性最强的生命体，在抗热，抗化学药物和抗辐射等方面，十分突出。例如，肉毒梭菌的芽胞在沸水中要经过5至9.5小时才被杀死；巨大芽胞杆菌芽胞的抗辐射能力比E.coli细胞要强36倍。芽胞的休眠能力更为突出，在常规条件下，一般可以保持几年至几十年而不死。据文献记载，有的芽胞甚至可以休眠数百至数千年，最极端的例子是在美国的一块有2500万~4000万年历史的琥珀，至今从其中蜜蜂肠道内还可以分离到有生命的芽胞。

芽胞特点：

1. 自由存在的芽孢没有明显的代谢作用，只保持潜在的萌发力，称为隐藏的生命。一旦环境条件合适，芽孢便可以萌发成营养细胞。

2. 芽孢是细菌的休眠体，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞。

3. 产芽孢细菌的保藏多用其芽孢。产芽孢的细菌多为杆菌，也有一些球菌。

4. 芽孢的有无、形态、大小和着生位置是细菌分类和鉴定中的重要指标。

5. 芽孢与营养细胞相比化学组成存在较大差异，容易在光学显微镜下观察。（相差显微镜直接观察；芽孢染色）

芽胞是人人都讨厌和害怕的一种生物，因此灭菌也一直以来都是大家都在热议的话题。杀灭芽胞对制药厂洁净车间、GMP车间、实验室、化妆品生产车间、保健品生产车间等场所来说十分重要，是否能消灭芽孢也是衡量各种消毒灭菌手段的最重要的指标。那么说到灭菌，我国目前GMP条例对实验室（特别是无菌品)都存在着极其严格的要求。在GMP的验证过程中，很多的人力推过氧化氢灭菌这一方法。其实，国内目前比较常用的几种灭菌方法包括干热灭菌法、湿热灭菌法和臭氧灭菌法等等。不过过氧化氢是上述几种灭菌最好的消毒剂。

杀孢子剂可以作为杀孢子剂或高效杀菌剂使用，一般用纯水稀释后作为高效杀菌剂使用。

杀孢子剂适用于预清洁过的表面，可安全的用于不锈钢、钢、塑料、玻璃、地板、墙壁 等各种表面。

GMP车间目前常用的消毒方式有：甲醛熏蒸消毒、含氯类消毒剂、臭氧消毒等。

甲醛熏蒸消毒：目前GMP环境消毒主要是采用甲醛熏蒸消毒+杀孢子剂方式进行。甲醛熏蒸的强毒性残留会长时间存在于洁净区内，会造成产品的重复污染，对操作人员和环境造成长久的潜在危害。并且在熏蒸之后要长时间通风，人员才能进入洁净区，造成了生产效率较低。目前常见的杀孢子剂主要成分是乙酸、过氧化氢和过氧乙酸，虽然具有较好的杀菌效果，但是杀菌不长效，且乙酸与过氧乙酸都是有害物质，消毒后也会留下有毒残留。

含氯类消毒剂：氯制消毒剂初次消毒效果较好，但不具备长久效应，不具备抑菌作用，不适合长期使用。氯类消毒剂受环境温度、光照等多种参数影响，效果较难控制，且会改变PH值，影响食品口味等，不适合食品厂使用。且氯制消毒剂也会留下毒性残留。

臭氧杀菌：臭氧只有在极低浓度下才算无害，高浓度的臭氧会危害人身健康，严重情况下会导致中毒甚至致癌。但臭氧浓度比较难掌握，消毒效果较差，风险较高。

目前国际上常用的灭菌剂有两种类型，一种是复合型过氧乙酸（过氧乙酸和过氧化氢复合，典型代表为美国制造，高毒性和腐蚀性，属于传统的灭菌剂），另外一种是复合型过氧化氢（含5%过氧化氢+100ppm银离子，典型代表为德国Oxytech，属于极低腐蚀的生态型灭菌剂）。

洁净区要定期使用灭菌剂来彻底处理环境空间的微生物，在平时可使用臭氧或紫外线作为辅助措施，从而取得对沉降菌和浮游菌达到最理想的控制效果。

在70摄氏度中数分钟内可对真菌、病毒和病原细菌的营养细胞进行消毒；在100摄氏度可对许多孢子进行消毒。然而，一些腐生生物的孢子在煮沸数小时后仍可存活。加热是目前最常用的确保对孢子进行消毒的方法。

孢子的外壳由包含多达孢子总蛋白质的80％的角蛋白样蛋白质组成。正是该蛋白质外壳负责孢子对化学消毒剂的抗性。微生物生活史的孢子阶段特征在于代谢休眠和对可破坏营养阶段的微生物的环境因素的抗性。

细菌内生孢子和真菌孢子的萌发伴随着增加的代谢和对热与化学反应物降低的抗性。为发生萌发，孢子必须感知环境足以支持生长和繁殖。简单的α氨基酸可刺激孢子萌发。

本发明提供了杀死或灭活孢子的改善的酶促方法。

发明概述本发明提供了杀死或灭活孢子的方法，该方法包括使孢子与卤过氧化物酶(haloperoxidase)、过氧化氢源和碘化物离子源接触。

在一个实施方案中，该卤过氧化物酶是氯过氧化物酶或溴过氧化物酶。在另一个实施方案中，该卤过氧化物酶是含有钒的卤过氧化物酶。

在另外一个实施方案中，本发明的方法也包括使孢子与在下文中进一步进行表征的增强剂接触。

发明详述卤过氧化物酶和展示卤过氧化物酶活性的化合物适合于整合入本发明方法中的卤过氧化物酶包括氯过氧化物酶、溴过氧化物酶和展示氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。卤过氧化物酶形成一类酶，该酶能够根据如下反应式在过氧化氢或生成过氧化氢的系统中将卤化物(Cl-、Br-、I-)氧化为相应的次卤酸

其中X-是卤化物而HOX是次卤酸。

卤过氧化物酶根据其对卤化物离子的特异性进行分类催化从氯化物离子形成次氯酸盐、从溴化物离子形成次溴酸盐和从碘化物离子形成次碘酸盐的氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)；和催化从溴化物离子形成次溴酸盐和从碘化物离子形成次碘酸盐的溴过氧化物酶。然而，次碘酸盐自发地歧化为碘，因而碘是观察到的产物。这些次卤酸盐化合物随后可以与其他化合物进行反应而形成卤化化合物。

已从各种生物中分离卤过氧化物酶哺乳动物、海洋动物、植物、藻类、地衣、真菌和细菌。普遍接受的是卤过氧化物酶是自然界中负责形成卤化化合物的酶，尽管可能涉及其他的酶。

卤过氧化物酶已从许多不同的真菌中分离，特别是从真菌暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycetes)类中分离，该类例如卡尔黑霉属(Caldariomyces)如C.fumago、链格孢属(Alternaria)、弯孢霉属(Curvularia)如C.verruculosa和不等弯孢(C.inaequalis)、Drechslera、Ulocladium和葡萄孢属(Botrytis)。

也已从细菌中分离了卤过氧化物酶，例如假单胞菌属(Pseudomonas)如吡咯菌素假单胞菌(P.pyrrocinia)和链霉菌属(Streptomyces)如金霉素链霉菌(S.aureofaciens)。

在一个优选的实施方案中，卤过氧化物酶是源自弯孢霉属物种的钒卤过氧化物酶(即含有钒或矾酸盐的卤过氧化物酶)，所述物种特别是C.verruculosa和不等弯孢，如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS102.42，如由WO 95/27046图2中的DNA序列编码的钒卤过氧化物酶(全文引入作为参考)；或者如描述于WO 97/04102中的C.verruculosa CBS147.63或C verruculosa CBS 444.70。

在另一个优选的实施方案中，卤过氧化物酶是含有矾的卤过氧化物酶，如钒氯过氧化物酶。钒氯过氧化物酶可源自WO 01/79459中的Drechslerahartlebii、描述于WO 01/79458中的Dendryphiella salina、描述于WO01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie或描述于WO 01/79460中的棉丝菌属(Geniculosporium sp.)。钒卤过氧化物酶更优选地源自Drechslerahartlebii(DSM 13444)、Dendryphiella salina(DSM 13443)、Phaeotrichoconis crotalarie(DSM 13441)或棉丝菌属物种(DSM 13442)。

卤过氧化物酶的浓度一般在0.01-100ppm酶蛋白质的范围内，优选地为0.05-50ppm酶蛋白质，更优选地为0.1-20ppm酶蛋白质且最优选地为0.5-10ppm酶蛋白质。

卤过氧化物酶活性的确定通过如下步骤进行微量滴定测定，即，将100μl卤过氧化物酶样品(约0.2μg/ml)与100μl0.3M pH7的磷酸钠缓冲液-0.5M溴化钾-0.008％苯酚红混合，将溶液加入到10μl0.3％的H2O2中，并测量作为时间的函数的595nm的吸收。

应用一氯双甲酮(Sigma M4632，290nm时ε＝20000M-1cm-1)作为底物的测定进行如下。作为时间的函数对290nm吸收的降低进行测量。应用浓度为约1μg/ml的卤过氧化物酶在0.1M磷酸钠或0.1M乙酸钠、50μM一氯双甲酮、10mM KBr/KCl和1mM H2O2中进行该测定。将HU定义为每分钟在pH5和30℃氯化或溴化的1微摩尔一氯双甲酮。

过氧化氢源卤过氧化物酶需要的过氧化氢源可为过氧化氢或原位产生过氧化氢的过氧化氢前体。任何溶解时可释放卤过氧化物酶能应用的过氧化物的固体实体均可充当过氧化氢源。在溶解于水或适当的基于水的介质时可产生过氧化氢的化合物包括但不局限于金属过氧化物、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过氧酸、烷基过氧化物、酰基过氧化物、过氧化酯、过氧化脲、过硼酸盐和过氧羧酸或其盐。生成可被卤过氧化物酶应用以氧化碘化物的过氧化物的任何化合物均是本发明可接受的过氧化氢源；这包括大量本领域技术人员可意识到的化合物。也可应用这些物质之两种或多种的混合物。

另一个过氧化氢源是生成过氧化氢的酶系统，如氧化酶及该氧化酶的底物。氧化酶和底物的组合的例子包括但不局限于氨基酸氧化酶(参见如US 6,248,575)和适当的氨基酸、葡萄糖氧化酶(参见如WO 95/29996)和葡萄糖、乳酸氧化酶和乳酸、半乳糖氧化酶(参见如WO 00/50606)和半乳糖，以及醛糖氧化酶(参见如WO 99/31990)和适当的醛糖。

通过研究EC1.1.3._、EC1.2.3._、EC1.4.3._和EC1.5.3._或类似的种类(按国际生物化学协会(International Union of Biochemistry))，本领域的技术人员易于识别这种氧化酶和底物的组合的其他例子。

过氧化氢源可在过程开始时或过程中添加，如一般添加的量相应于0.001mM～25mM的水平，优选地为0.005mM～5mM的水平，且特别地为0.01～1mM的水平。

碘化物离子源根据本发明，与卤过氧化物酶反应所需的碘化物离子源可以以许多不同方式得到，如通过添加碘化物盐。在一个优选的实施方案中，碘化物盐是碘化钠或碘化钾或其混合物。

碘化物离子源的浓度一般相应于0.01mM～1000mM碘化物离子的浓度，优选地为0.05mM～500mM。

增强剂我们已观察到可通过在本发明的组合物中包括增强剂以获得改善的抗微生物活性。该增强剂优选地为胺化合物，该胺化合物可为具有下面分子式的化合物 其中取代基团R1和R2可以相同或不同，为任何一个下面的基团氢、苯基和C1-6-烷基；其中苯基和C1-6-烷基基团可未取代或由一个或多个独立的取代基团R3取代；该取代基团R3为任何一个下面的基团羟基、卤素、甲酰基、羧基及其酯和盐、氨甲酰基、磺基及其酯和盐、氨磺酰基、硝基、氨基、苯基、酰基、C1-6-烷基和C1-6-烷氧基；其中氨甲酰基、氨磺酰基、氨基、苯基、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基和酰基基团可以进一步是未取代的或由一个或多个独立的取代基团R4取代；该取代基团R4为任何一个下面的基团卤素、羟基、甲酰基、羧基及其酯和盐、氨甲酰基、磺基及其酯和盐、氨磺酰基、硝基、氨基、苯基、酰基、C1-6-烷基和C1-6-烷氧基；其中氨甲酰基、氨磺酰基和氨基基团可以进一步为未取代的或由羟基、C1-4-烷基和C1-4-烷氧基独立地取代一次或两次；且其中苯基、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基和酰基基团可以进一步为未取代的或由一个或多个下面的基团独立地取代卤素、羟基、氨基、甲酰基、羧基及其酯和盐、氨甲酰基、磺基及其酯和盐和氨磺酰基。

在一个实施方案中，当取代基团R3是羧基及其酯时，R3不能直接与如下碳原子连接，该碳原子在上式中与氮原子直接连接。

如在此处所用的，其中n可为2～6的术语“C1-n-烷基”代表具有一个到指定数目的碳原子(n)的饱和或不饱和的分支或直链烷基基团。一般的C1-6-烷基包括但不局限于甲基、乙基、乙烯基、正丙基、异丙基、丙烯基、异丙烯基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、巴豆基、甲代烯丙基、戊基、异戊基、丙烯基、异戊二烯基、己基、异己基等。

如在此处所用的，其中n可为2～6的术语“C1-n-烷氧基”代表通过醚基团连接的C1-n-烷基基团；如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基