利用抑制剂来测定中间产物的实验都有哪些
生物化学实验——糖酵解中间产物的鉴定一、实验目的
了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。
二、实验原理
利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。
三、仪器 原料和试剂
（1）仪器：试管（1.5×1.5cm）、吸量管（1ml、、2ml3ml）、恒温水浴、烧杯（50ml）。
（2）原料：新鲜酵母。
（3）试剂：
①2，4-二硝基苯肼：0.1g2，4-二硝基苯肼溶于水100ml 2mol/L盐酸溶液中，贮于棕色瓶中备用。
②0.56mol/L硫酸肼溶液：称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中，这时不会全部溶解，当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。此液也可用于水合肼溶液配制，可按其分子浓度稀释至0.56mol/L，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调pH至7.4即可。
③5%葡萄糖溶液。
④10%三氯乙酸溶液。
⑤0.75mol/LNaOH溶液。
⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。
四、操作步骤
（1）取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3g，并按下表分别加入各试剂，混匀。
杯号5%葡萄糖加入量/ml10%三氯醋酸加入量/ml碘乙酸加入量/ml硫酸肼加入量/ml发酵时起泡多少
110211
210--11
310------
（2）将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵罐内，放入37℃保温1.5h，观察发酵管产生气泡的量有何不同。
（3）把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2号和3号杯中按下表补加各试剂，摇匀放10min后和第一只烧杯中内容物一起分别过滤，取滤液进行测定。
杯号10%三氯乙酸/ml碘乙酸/ml硫酸肼/ml
22----
3211
（4）取3个试管，分别加入上述滤液0.5ml，并按下表加入试剂和处理。
管号
滤液/ml0.75mol/L
NaOH/ml
室温放置
10min2，4-二硝基苯肼/ml
38℃水浴保温19min0.75mol/L
NaOH/ml
观察结果
10.50.50.53.5
20.50.50.53.5
30.50.50.53.5
五、思考题
实验中哪一发酵管生成的气泡最多？哪一管最后生成的颜色最深？为什么？
￥
5.9
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生物化学实验糖酵解中间产物的鉴定
生物化学实验——糖酵解中间产物的鉴定
一、实验目的
了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。
二、实验原理
利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。
三、仪器 原料和试剂
（1）仪器：试管（1.5×1.5cm）、吸量管（1ml、、2ml3ml）、恒温水浴、烧杯（50ml）。
（2）原料：新鲜酵母。
（3）试剂：
①2，4-二硝基苯肼：0.1g2，4-二硝基苯肼溶于水100ml 2mol/L盐酸溶液中，贮于棕色瓶中备用。
②0.56mol/L硫酸肼溶液：称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中，这时不会全部溶解，当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。此液也可用于水合肼溶液配制，可按其分子浓度稀释至0.56mol/L，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调pH至7.4即可。
③5%葡萄糖溶液。
④10%三氯乙酸溶液。
⑤0.75mol/LNaOH溶液。
⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。
四、操作步骤
（1）取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3g，并按下表分别加入各试剂，混匀。
实验做法的话将两者配制成等物质的量浓度的溶液再测量其pH值即可，pH值较小的pKa大。
从理论推导的话，碘比氢具有更强的电负性，会使碘乙酸分子中的电子云更靠近碘原子而远离羟基，从而使得氢离子更容易电离出来，因此碘乙酸的pKa更大。
一、实验目的
（1）学习一种鉴定氨基转移作用的简便方法及其原理；
（2）进一步掌握纸层析的原理和操作技术；
（3）了解氨基转移作用在中间代谢中的意义。
二、实验原理
氨基移换酶也称转氨酶,它能催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的α-酮基互换，这种作用称为氨基移换作用。它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中，在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互联系、相互转化上，都起着很重要的作用。任何一种氨基酸进行转氨作用时，都由其专一的转氨酶催化。它们的最适pH接近7.4。在各种转氨酶中，以谷氨酸—草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶、GOT）及谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶、GPT）活力最强。
三、试剂与器材
解剖器具、离心机、恒温水浴、干燥箱、台秤、层析系统等。
1/15mol/L磷酸缓冲液（pH=7.4）、1%谷氨酸溶液（用KOH中和至中性）、1%丙酮酸溶液（用KOH中和至中性）、0.1%碳酸氢钾溶液、0.05%碘乙酸溶液、15%三氯醋酸溶液、标准丙氨酸溶液(0.1%)、标准谷氨酸溶液(0.1%)、0.1%水合茚三酮乙醇溶液、酚溶剂。
四、操作方法
将兔击晕，迅速解剖，取出肝脏，在低温条件下剪碎。称取匀浆后，离心取上清液，即为制备的酶液。体外氨基移换反应。纸上层析法检查每人4个点（标准丙氨酸溶液、标准谷氨酸溶液、对照上清液、样品上清液）。点样放入层析罩内。用被酚所饱和的水溶液，平衡后，用带小漏斗的玻璃管从层析罩上加饱合酚试剂25ml于层析缸内。然后，立即盖紧塞子，当溶剂前沿达到距滤纸上端约2.5cm处，取出滤纸，晾干或吹干，以除去酚溶剂，喷洒0.1%茚三酮乙醇溶液，放入烘箱中显色氨基酸与茚三酮的反应，在滤纸上呈现紫红色斑点。
五、关键步骤与注意事项
① 取动物新鲜组织制备酶液，防止酶失活。
② 加碘乙酸抑制酶解作用。
可以反应，羧基-COOH或酚中的-OH可以与胍基（NH₂)₂-C=NH（一个碳连2个氨基，双键再连一个亚胺基。碱性与KOH相当)中NH₂-反应，发生的是酸碱中和反应，即羟基去H+，NH₂-得H+。
机理是羧基中羰基的氧诱导作用吸电子，使羧基中—OH氧电负性减弱，对H的束缚能力减小。另外氨基中N有孤对电子，（电子对的提供者）是路易斯碱。可以结合H+。
一般羟基没有自由基反应和亲电反应。氨基中的N可以发生亲电反应。
醇羟基与伯、仲或叔碳原子相连为伯醇、仲醇或叔醇，按醇分子中所含羟基数目可分为一羟醇(一元醇)和多羟醇(多元醇)，多元羟醇中的羟基在相邻碳原子上时，叫做邻醇羟基，具有与一羟醇相似的性质，也有一定的特性。
扩展资料：
在各种转氨酶中，以谷氨酸—草酰乙酸转氨酶及谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶、GPT）活力最强。
磷酸缓冲液（pH=7.4）、1%谷氨酸溶液（用KOH中和至中性）、1%丙酮酸溶液（用KOH中和至中性）、0.1%碳酸氢钾溶液、0.05%碘乙酸溶液、15%三氯醋酸溶液、标准丙氨酸溶液(0.1%)、标准谷氨酸溶液(0.1%)、0.1%水合茚三酮乙醇溶液、酚溶剂。
含氢氧根的物质溶解于水会电离出氢氧根离子，因此含氢氧根的物质水溶液多体现碱性，但是氢氧根是离子，带负电，与羟基有着本质区别，只有极少数弱碱（共价化合物）自带羟基。
参考资料来源：百度百科--羟基
参考资料来源：百度百科--氨基
丙酮酸可进入TCA产生CO2，甘油醛3磷酸可转化为甘油，合成脂肪。
