PB缓冲溶液与PBS缓冲溶液有什么区别
PB磷酸盐缓冲液(pH2.0):0.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/L Na2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L 0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L NaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L
PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L,
KH2PO4 1.4mmol/L
精准的配制方法
称取二水磷酸二氢钠78.0g溶解于1L蒸馏水中得到0.5M的磷酸二氢钠母液
称取十二水磷酸氢二钠179.07g溶解于1L蒸馏水中得到0.5M的磷酸氢二钠母液
取19ml磷酸二氢钠母液和81ml磷酸氢二钠母液混匀即得到PB(0.5M pH7.4)
如果对试剂要求不高,可以用简单一点的配制方法
称取二水磷酸二氢钠33g,再称取十二水磷酸氢二钠103g,一起溶解于蒸馏水中,用NaOH调节pH至7.4,之后定容至1L.也是差不多0.5M的PB缓冲液.
由公式PH=Pka-log(Ca/Cb),结合NaH2PO4的Pka=7.2,我们知道:
log(Ca/Cb)=-0.3
也就是说:
Ca/Cb=0.5(Ca/Cb指的是concentration of the acid/base)
然而Ca+Cb=0.05
所以,Ca=0.0167M;Cb=0.0333M
具体所需质量和所配制的溶液的体积我想就不用我明说了吧。
还有,在称量的时候,看好试剂瓶上的分子量和分子式,这两种盐都是带有结晶水的
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磷酸缓冲液(PB,Phosphate Buffer),是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液,通常使用的有磷酸钠缓冲液(NaH2PO4&Na2HPO4)和磷酸钾缓冲液(K2HPO4&KH2PO4),由于它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广。
中文名
磷酸缓冲液
外文名
Phosphate Buffer
成分
NaH2PO4&Na2HPO4
磷酸缓冲液
PH5.7--8.0
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配制方法缓冲范围浓度计算优缺点
主要作用
PB(Phosphate Buffered),主要用于化学实验。简称:PB或者PB缓冲液
配制方法
0.2M磷酸缓冲液
磷酸缓冲液PH5.7--8.0(0.2M)
甲液:
NaH2PO4·2H2O:Mr=156.03,0.2mol/L溶液为31.21g/L,
NaH2PO4·H2O:Mr=138.01,0.2mol/L溶液为27.6g/L。
乙液:
Na2HPO4·2H2O:Mr=178.05,0.2mol/L溶液为35.61g/L,
Na2HPO4·7H2O:Mr=268.13,0.2mol/L溶液为53.624 g/L ,
Na2HPO4·12H2O:Mr=358.22,0.2mol/L溶液为71.64g/L。
磷酸缓冲液PH5.7--8.0(0.2M)
PH
甲液X(ml)
乙液Y(ml)
PH
甲液X(ml)
乙液Y(ml)
5.7
93.5
6.5
6.9
45
55
5.8
92
8
7
39
61
5.9
90
10
7.1
33
67
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根据要求的PH值,取X毫升甲液与Y毫升乙液,混合均匀即得.
1/15M 磷酸缓冲液
磷酸缓冲液PH4.49--9.18(1/15M)
PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml) PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml)
4.4 90 10 6.98 64
4.9 40.1 9.9 7.71 7 3
5.29 0.25 9.75 7.58 8 2
5.59 0.5 9.5 7.75 9 1
5.91 19 8.04 9.5 0.5
6.24 2 8 8.2 9.7 0.3
6.47 3 7 8.54 9.75 0.25
6.64 4 6 8.68 9.9 0.1
6.81 5 5 9.18 10 0
乙液:一水磷酸二氢钠,1/15M溶液含9.2g/L
甲液:二水磷酸氢二钠,1/15M溶液含11.864g/L
根据要求的PH值,取X毫升甲液与Y毫升乙液,混合均匀即得.
缓冲范围
磷酸缓冲液的缓冲pH值范围非常广泛,可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液,配制酸性缓冲液可直接用NaH2PO4或KH2PO4,pH范围在1-5;碱性缓冲液可直接用Na2HPO4或K2HPO4,pH范围在9-12;中性缓冲液则用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液混合,pH在5.5-8.5。
浓度计算
通常所说的磷酸缓冲液的浓度是指溶液中含有的所有的磷酸根离子的浓度,而不是钠离子(Na+)或者钾离子(K+)的浓度。正是因为如此,在配制中性缓冲液时,用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液混合,并不影响磷酸根离子的浓度,所得的缓冲液浓度仍是等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液原来的浓度,但是缓冲液中的钠离子(Na+)或者钾离子(K+)的浓度已经发生变化。
优缺点
磷酸缓冲液的优点:(1)易配制各种浓度的缓冲液;(2)适用的pH值范围宽,可配置各种pH值的缓冲液;(3)pH受温度影响较小;(4)缓冲能力强,缓冲液被稀释后pH变化小。
磷酸缓冲液的缺点:(1)易与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子缔合形成沉淀;(2)会抑制某些生化反应过程,如抑制某些酶的催化过程等。
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下面以400ml PH8.0,50mmol/L的磷酸盐缓冲液(PB)的配制为例。
试剂: NaH2PO4·2H2O Na2HPO4·12H2O
配制方法:配制时,常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4母液,两者按一定比例(5.3ml 0.2mol/L的 NaH2PO4 母液和94.7ml Na2HPO4母液)混合,加水至400ml,即成PH8.0,50mmol/L的磷酸盐缓冲液(PB)。
注:PH值可能有些浮动,可用NaOH或H3PO4调节。