提取RNA时,最后为什么要用75%乙醇洗涤
因为在70%乙醇里DNA是不溶的,而盐离子却可溶。沉淀DNA时总会加入高浓度的盐,加盐的目的是破坏能使蛋白质保持稳定的两个因素,使蛋白和DNA分离并沉淀下来。而此时盐的阳离子会与DNA结合形成DNA-阳离子盐溶于溶液中,再用无水乙醇可以将DNA-阳离子盐沉淀下来,但这样DNA中就含有较多的盐离子,这会影响下一步实验的进行,所以要用70%乙醇洗涤DNA沉淀。
除去酵母的蛋白和糖,提纯核苷酸的。
乙醇能够消除RNA的水化层,使带负电荷的磷酸基团暴露出来.Na+之类的平衡离子能够与这些带电基团结合,在沉淀形成部位降低多核苷酸链之间的排斥作用.因此只有在阳离子的量足以中和暴露的磷酸残基的电荷时才会发生乙醇沉淀。
DNA提取过程中,去除RNA的常用方法是乙醇沉淀。
因为RNA不溶于醇,乙醇能够消除RNA的水化层,使带负电荷的磷酸基团暴露出来。Na⁺之类的平衡离子能够与这些带电基团结合,在沉淀形成部位降低多核苷酸链之间的排斥作用。
因此,只有在阳离子的量足以中和暴露的磷酸残基的电荷时才会发生乙醇沉淀。
扩展资料
RNA的一级结构主要是由AMP、GMP、CMP和UMP四种核糖核苷酸通过3',5'磷酸二酯键相连而成的多聚核苷酸链。
天然RNA的二级结构,一般并不像DNA那样都是双螺旋结构,只有在许多区段可发生自身回折,使部分A-U、G-C碱基配对,从而形成短的不规则的螺旋区。不配对的碱基区膨出形成环,被排斥在双螺旋之外。
RNA中双螺旋结构的稳定因素,也主要是碱基的堆砌力,其次才是氢键。每一段双螺旋区至少需要4~6对碱基对才能保持稳定。在不同的RNA中,双螺旋区所占比例不同。
2倍无水乙醇的是用来沉淀DNA的,也可以用2/3体积的异丙醇来沉淀DNA,NaAc则是提供钠盐环境,促进DNA沉淀,效果明显。
提取DNA时加入NaAc pH5.2和2倍体积的无水乙醇的作用是什么,主要是因为DNA在一定的盐浓度条件下才能更好地沉淀下来.如果你不急用其实可以沉淀过夜的。这样就可以少了75%乙醇洗涤的那一步,那一步主要是洗去多余的盐。急用的话就加吧,但是一定要用75%乙醇洗涤。
1、你加的乙醇浓度不对,低于75%,所以RNA溶解了;
2、你加的乙醇里含有RNA酶,所以RNA降解了。应该是你加的75%的药用酒精中25%的水里混有RNA酶。所以提RNA不能用药用酒精。
提RNA时正确的75%乙醇配法应该是:用100%乙醇+无RNA酶水配成。