安全套杜蕾丝好还是杰士邦好?
一: 先说说安全套的品牌 大家对进口的了解多些,那是杜蕾斯和杰士邦。杜蕾斯是英国品牌。杜蕾斯安全套在世界上 150 多个国家均有销售,并在 40 多个市场中占据领导地位,杜蕾斯品牌占据了世界 40 亿安全套市场份额的 26 %,是世界安全套第一品牌。 1998 年英国 SSL 集团和青岛双蝶集团共同建立青岛伦敦杜蕾斯有限公司,从 1999 年起,中国大陆销售的杜蕾斯都是在青岛生产的。其实我们买的杜蕾斯就是国货哦。杰士邦是 Ansell Limited 的品牌,是世界第二大安全套制造和销售跨国企业,其总部设在澳大利亚墨尔本及美国新泽西,杰士邦在武汉有销售公司,国内销售的一般是泰国生产的。 目前公认的安全套世界品牌就这两个,有的人偏偏搞出三大品牌,不过是借机宣传,混淆视听。 请关注大的国际名牌(杜蕾斯,杰士邦)和国内大的安全套厂家,并选择使用本厂出产销售的安全套,因为这些厂家 “ 好的 ” 能达到 A 级的自己销售,差的让其他商家贴牌销售。 好像太枯燥了,以后再说品牌了。看看安全套有什么不同吧 二: 安全套的类型 1. 按照安全套的厚度,可分为普通型、薄型、超薄型。所谓厚度,指的是安全套的单层壁厚,一般为 0.04 ~ 0.07 毫米,最薄的仅为 0.03 毫米。 2. 安全套的形状为圆柱形,具体可分 --A. 普通型 ( 光面或平面型 ) :顶端有贮精囊,体部平滑; B. 尖端膨大型; C. 紧缩型:在安全套的体部制成 1 ~ 4 个绞窄段。 3. 从对安全套体部胶膜的表面加工来看,有颗粒型、螺纹型之分。颗粒型又有大小颗粒之分。罗纹型还称环纹型。这种加工处理的安全套或多或少可以增加对阴道壁的刺激,提高性生活质量。以上两种类型的安全套常常被称为异型安全套。 4. 润滑型安全套根据润滑剂的不同,有硅油型安全套和水溶性安全套之分。初期生产的橡胶安全套均无润滑剂,使用时由于过分干涩常引起套膜破裂或损伤阴道粘膜,美国人最先在安全套上涂抹甘油和乙二醇等润滑剂, 1960 年开始使用硅油。我国早年生产的安全套以滑石粉作润滑隔离剂,因滑石粉常导致慢性宫颈炎及皮肤过敏症而被淘汰。从 80 年代起,我国开始使用甲基硅油润滑剂,它不但具有润滑作用,而且无任何刺激性,既卫生又适用。近年来我国市场上又出现了水溶性润滑剂的安全套。 5. 彩色安全套。用乳胶浸渍而成的安全套应呈透明无色或淡乳白色。目前我国市场上也有彩色安全套销售。彩色安全套的问世,一方面是为了改善一些人对安全套的反感心理,另一方面也是为了增加吸引力。人们可根据对颜色的偏爱或当时的心境情绪,选择使用不同颜色的安全套。 6. 香型安全套。在我国,这是自 90 年代初起推出的添加了各种香料的一种安全套。添加的香料类型有玫瑰香型、桂花香型等。 7. 药物型安全套。这是因为在安全套上添加了壬苯醇醚杀精剂、消炎药、性兴奋延缓剂、助勃剂等而称为双保险型、药物型、延缓型的安全套,被统称药物型安全套。 8. 根据密封 包 装材料的不同,分为简装和精装安全套。简装安全套是用塑料薄膜包装的,此种包装密封性和避光性都较差;精装安全套是用双面或单面铝箔包装的,此种包装避光性和密封性能都比较理想。 三: 安全套的选择 1: 从使用角度考虑 a :超强触感的 --- 可选用薄型、超薄型的 . 有一些人则认为避孕套会减少性交时的快感,认为像穿雨衣。这多半是心理上的,要不肯定是没试过足够好的套套。杜蕾斯的超薄装(金色)号称用了比不戴更好,当然价格也很贵。杰士邦的叫优质超薄(天蓝色)稍微便宜些。国产优秀品牌价格大概是杜蕾斯的一半,有桂林高邦挚爱超薄,广州第 6 感超薄延时,青岛双蝶 F 香味超薄等等。 b :延时功能的 --- 这又分两种:一种是加厚的(多数只是前端加厚),如杜蕾斯的耐力装,这个更贵。桂林高邦银爵颗粒延缓型;高邦爱无忧延缓型。 一种是在安全套内添加了延迟男性射精时间的药物。 对药物的使用各厂家又有不同,有用天然植物提取液的,如杰士邦超凡持久(金黄色)。 还有使用苯唑卡因 ( 麻醉剂 ), 用麻醉添加剂的安全套
尖锐湿疣
【概述】
本病又称尖圭湿疣、生殖器疣或性病疣。是由人类乳头瘤病毒(HPV)感染引起的一种性传播疾病。HPV有多种类型,引起本病的主要类型为HPV1、2、6、11、16、18、31、33及35型等,其中HPV16和18型长期感染可能与女性宫颈癌的发生有关。
【诊断】
1.不洁性交史。
2.典型皮损为生殖器或肛周等潮湿部位出现丘疹,乳头状、菜花状或鸡冠状肉质赘生物,表面粗糙角化。
3.醋酸白试验阳性,病理切片可见角化不良及凹空细胞。
4.核酸杂交可检出HPV-DNA相关序列,PCR检测可见特异性HPV-DNA扩增区带。
【治疗措施】
由于目前没有特效的抗病毒药物,尖锐湿疣的治疗必须采用综合治疗。
(一)治疗诱因:(白带过多,包皮过长、淋病)。
(二)提高机体免疫力。
(三)应用抗病药物。一般只要坚持规则的综合治疗都可治愈。
1. 手术疗法
对于单发、面积小的湿疣,可手术切除;对巨大尖锐湿疣,可用Mohs氏手术切除,手术时用冷冻切片检查损害是否切除干净。
2. 冷冻疗法
利用-196℃低温的液体氮,采用压冻法治疗尖锐湿疣,促进疣组织坏死脱落,本法适用于数量少,面积小的湿疣,可行1-2次治疗,间隔时间为一周。
3. 激光治疗
通常用CO2激光,采用烧灼法治疗尖锐湿疣,本疗法最适用女阴、阴茎或肛周的湿疣。对单发或少量多发湿疣可行一次性治疗,对多发或面积大的湿疣可行2-3次治疗,间隔时间一般为一周。
4. 电灼治疗
采用高频电针或电刀切除湿疣。方法:局部麻醉,然后电灼,本疗法适应数量少,面积小的湿疣。
5. 微波治疗
采用微波手术治疗机,利多卡因局麻,将杆状辐射探头尖端插入尖锐湿直达疣体基底,当看到就体变小、颜色变暗、由软变硬时,则热辐射凝固完成,即可抽出探头。凝固的病灶可以用镊子挟除。为防止复发,可对残存的基底部重复凝固一次。
6. β-射线治疗
我们应用β-射线治疗尖锐湿疣取得了较为满意的效果,该方法疗效高,无痛苦、无损伤、副作用少,复发率低,在临床上有推广价值。
7. 药物疗法
(1)足叶草脂:本疗法适用湿润区域的湿疣,例如发生于包皮过长而未曾作包皮环切除手术的龟头及会阴部的湿疣。但对宫颈尖锐湿疣不能用足叶草脂治疗。用20%足叶草脂酊剂涂到皮损处或用药前,先有油质抗菌药膏保护皮损周围的正常皮肤或粘膜 ,然后涂药,用后4-6小时,用30%硼酸水或肥皂水清洗,必要时3天后重复用药,该药是国外用于本病治疗的首先药,一般用一次可愈。但有很多缺点,如对组织破坏性大,使用不当可引起局部溃疡。毒性大,主要表现为恶心、肠梗阻、白细胞及血小板减少,心动过速、尿闭或少尿,故使用时必须谨慎,发现上述反应时,应立即停药。
(2)抗病毒药:可用5%酞丁胺霜剂,或用0.25%疱疹净软膏,每日2次,外涂。无环鸟苷口服,每日5次,每次200mg,或用其软膏外用,α-干扰素每日注射300万单位,每周用药五天。或干扰素300万单位注入疣体基部,每周2次。连用2-3周,主要副作用为流感样综合症,局部用药副作用较少且轻微。
(3)腐蚀剂或消毒剂:常用有30%-50%三氯醋酸或饱和二氯醋酸,或18%过氧乙酸。用10%水杨酸冰醋酸或40%甲醛、2%液化酚、75%乙醇蒸馏水100ml混合溶液,点涂局部,用于龟头、肛周湿疣,每日或隔日一次,效果甚好。消毒剂可用20%碘酊外涂,或2.5-5%碘酊注射于疣体基部,每次0.1-1.5ml,或用新洁尔灭外涂或以0.1-0.2%外敷,后者需配合全身疗法。
(4)抗癌药
① 5-氟脲嘧啶(5-F u):一般外用5%软膏或霜剂,每日2次,3周为一疗程。2.5%~5%氟脲嘧啶湿敷治疗阴茎、肛周尖锐湿疣,每次敷20分钟,每日一次,6次为一疗程。也可用聚乙二醇作基质,加入占其干质5%的5- F u粉剂制成栓剂,治疗男女尿道内尖锐湿疣,也可用5- F u基底注射,多者可分批注射。
② 噻替哌:主要用于5-F u治疗失败的尿道内尖锐湿疣,每日用栓剂(每个含15mg),连用8天,也可将本品60mg加入10-15ml消毒水中,每周向尿道内滴注,保持半小时,副作用有尿道炎。亦可用本品10mg加入10ml浸泡患处,每日3次,每次半小时,治疗阴茎、龟头冠状沟湿疣,主要用于经其它方法治疗后,尚有残存疣体或复发者。也可将此溶液再稀释两倍浸泡局部,以预防复发。
③ 秋水仙碱:可用2-8%的生理盐水溶液外涂,涂两次,间隔72小时治疗阴茎湿疣,涂后可出现表浅糜烂。
④ 争光霉素或平阳霉素:用0.1%的生理盐水溶液作皮损内注射,每次总量限制在1毫升(1 mg),大多一次可愈。平阳霉素为争光霉素换代品,用法基本相同,亦有用平阳霉素10 mg溶于10%普鲁卡因20ml内注射。
8.免疫疗法
① 自体疫苗法:用病人自己的疣体组织匀浆(融冷灭活病毒),并进行加热处理(56℃一小时)收集上清液注射,可用于顽固性肛周湿疣。
② 干扰素诱导剂:可用聚肌胞及梯洛龙。聚肌胞每日注射2 ml,连用10天,停药1-2月后,再继续用药。梯洛龙每日3次,每次300 mg,停药4天,或隔日口服600 mg。
③ 干扰素、白介Ⅱ,灵杆菌素,利百多联合应用,疗效较佳。
【病原学】
HPV在皮肤上引起疣赘、在咽部、肛周、生殖器粘膜上形成增殖性病变,其病毒型为小型DNA病毒。感染HPV发生病变多数属于良性,能自行消退,但也有恶化病例。如肛周、生殖器粘膜上形成扁平上皮癌的报道。还有罕见的遗传性皮肤疾患、疣赘状表皮发育异常症(EV)续发的皮肤癌等,在癌细胞中检出HPV。
HPV为乳多空病毒科A属成员,病毒颗粒直径50-55nm无被膜的正20面体构成的病毒壳体,具有7900碱基对的环状双链DNA组成,电镜下病毒颗粒的大小、形态与口多瘤病毒极为相似。乳头瘤病毒(PV)具有种属特异性,HPV尚未能在组织培养或实验动物模型中繁殖。
病毒的结构蛋白组成:85%的PV颗粒,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS——PAGE)可确定病毒有主要衣壳蛋白、分子量为56.000;次要衣壳蛋白,分子量迁移于76.000处,发现4种细胞组蛋白与病毒DNA相关。
所有HPV病毒的基因组结构相似,根据在严格条件下进行DNA杂交的程序可确定病毒的型和亚型,不同的HPV型DNA与其他类型病毒DNA仅50%出现交叉杂交,迄今已发现60多种HPV类型,随着研究的深入,将会鉴定出更多HPV新的类型。
【发病机理】
尖锐湿疣的HPV感染通过性接触传播,接触部位的小创伤可促进感染,三种鳞状上皮(皮肤、粘膜、化生的)对HPV感染都敏感。每一型HPV与特殊的临床损害有关,且对皮肤或粘膜鳞状上皮各有其好发部位。当含有比较大量病毒颗粒的脱落表层细胞或角蛋白碎片进入易感上皮裂隙中时,感染就可能产生,它可因直接接触或少见的自动接种或经污染的内裤、浴盆、浴巾、便盆感染。
病毒感染人体后,可潜伏在基底角朊细胞间,在表皮细胞层复制,HPV侵入细胞核,引起细胞迅速分裂,同时伴随病毒颗粒的繁殖与播散,形成特征性的乳头瘤。晚期基因表达结构多肽,即出现结构蛋白装配颗粒,病毒主要集中在颗粒层中的细胞核内,在表皮的颗粒层出现凹空细胞增多,组织学上正常的上皮细胞也有HPV,治疗后残余的DNA常可导致疾病的复发。
宿主对HPV感染引起的免疫应答,包括细胞免疫与体液免疫两个方面。
一、细胞免疫
人体细胞免疫状态是影响CA发生、转归的重要基础之一。细胞免疫比体液免疫更为重要。临床上伴细胞免疫缺陷的尖锐湿疣患者皮疹常持续不退,其外周血中抑制性T细胞数增多NK细胞功能低下,r-干扰素和白细胞介素2产生减少,而消退疣皮损中常常出现活化T细胞和NK细胞的浸润,部分角朊细胞HLA-DR阳性。
免疫抑制或免疫缺陷时,生殖器HPV感染和HPV相关疾病的发生率均增加。尖锐湿疣中辅助性T细胞耗竭,CD4/CD8比值倒置,其值<1。在CA病人的外周血中,发现抑制/细胞毒性T细胞百分率显著增高,辅助/诱导性T细胞的比值和辅助/抑制T细胞比值均降低。宫颈CA和宫颈上皮内瘤样病变(CIN)病损中朗格罕细胞明显减少。CA中NK细胞 产生r-干扰素和白介素-2减少。鲍温样丘疹病和肛门生殖器癌者中NK细胞对含有HPV-16的角朊细胞的溶解活性下降,可能是对疾病特异性靶细胞的识别缺陷所致,宫颈CA的角朊细胞不表达MHCⅡ型抗原(HLA-DR),无此抗原提呈功能可以破坏免疫监视作用。
二、体液免疫
目前血清学检测结果显示:①抗晚期蛋白抗体产生率为25%-65%,较抗早期蛋白抗体产生率高;②检测出的HPV抗体似有型特异性,无交叉反应;③抗HPV-16E7抗体与宫颈癌的存在有密切关系;④抗HPV-16E4抗体也是发生宫颈癌、复发或近期HPV感染的标志;⑤估计成人和儿童产生IgG抗体的阳性率相同,不同型别阳性率在10%-75%之间;⑥已证明HPV-16或18型肿瘤抗体阳性患者中,仅50%-70%可检出该抗体。
三、尖锐湿疣自然消退
对CA自然消退尚无系统评估,然而以安慰剂对照研究发现其自然消退率在0%,17%、18%和69%之间,CA消退或治愈后,仍有45%患者存在潜伏感染,其中67%患者复发。
【流行病学】
一、流行情况
尖锐湿疣为人类乳头瘤病毒所引起。目前一致认为此病在增多,成为STDS中的最常见疾病,在年轻成人中患病率可达0.5%-1%。英国尖锐湿疣发病率从1970年的30/10万增到1988年的260/10万,几乎增加了8倍,美国此病发病率从1966年到1984年增加了6倍。和艾滋病相似,有症状的尖锐湿疣仅代表感染者的“冰山”之顶,所以如考虑亚临床感染在内,人类乳头瘤病毒感染可能是发病率占第一位的性病。此感染的传播方式包括直接与间接传播,但以性接触最为常见,而且越是近期损害越有传染性,一次性接触估计有50%被传染的可能性;其次为直接非性接触,如自体传染以及新生儿经产道受染;再其次为间接接触,通过污染传染、推测有可能,但因此病病毒尚不能培养,未能证实。
二、尖锐湿疣发生的危险因素
(一)性行为:性伴数及过早性交是造成发生HPV感染的因素。
(二)免疫抑制:HPV感染和与HPV有关的癌似乎是慢性免疫功能抑制的晚期并发症。肾异体移植者中患CA的危险性增加。
(三)HIV感染:HIV阳性发生HPV感染及HPV相关肿瘤的机率增加。
(四)年龄,妊娠:在妇科涂片中检测HPV高峰流行率的年龄为20-40岁,随着年龄增加,流行率稳步下降;妊娠期间的HPV检出率高,产后HPV检出率下降。
【临床表现】
潜伏期3周到8个月,平均3个月,多见于性活跃的青、中年男女,发病高峰年龄为20-25岁,病程平均在3-5个月的男女患者,在性接触后不久即发病,而病程平均12个月的男性患者,其性接触者可不发病。多数患者一般无症状。损害大小及形状不等。可仅为数个,亦可为多数针头样大的损害:在阴肛部可长成大的肿瘤样物,有压迫感;有恶臭味;有时小的湿疣可出现阴部痛痒不适,病人可出现尿血和排尿困难;直肠内尖锐湿疣可发生疼痛、便血,而直肠内大的湿疣则可引起里急后重感。
男性患者好发于包皮系带、冠状沟、包皮、尿道、阴茎、肛门周围和阴囊。病初为淡红或污红色粟状大小赘生物,性质柔软,顶端稍尖,逐渐长大或增多。可发展成乳头状或囊状,基底稍宽或有带,表面有颗粒。在肛门部常增大,状如菜花,表面湿润或有出血,在颗粒间常积存有脓液,散发恶臭气味,搔抓后可继发感染。位于湿度较低干燥部位的生殖器疣,损害常小而呈扁平疣状。位于湿热湿润部位的疣常表现为丝状或乳头瘤状,易融合成大的团块。有严重肝病的患者湿疣可增大。妊娠可使湿疣复发或生长加快。
亚临床感染是指临床上肉眼不能辨认的病变,但用3%-5%醋酸液局部外涂或湿敷5-10分钟可在HPV感染区域发白,即所谓“醋酸白现象”。
HPV感染和肿瘤的发生:
(一)HPV与皮肤肿瘤的发生有关
它在皮肤癌和其他解剖部位的肿瘤似乎起决定作用。口腔良性赘生物和癌前病变,皮肤鳞状细胞癌组织中可发现HPV-11、16、18型DNA,曾报道喉部HPV-6乳头瘤恶变成喉癌,皮肤疣状表皮发育不良(EV)是HPV潜在致癌作用的证据,EV皮损中发现多种HPV型DNA,并在患者皮肤鳞状细胞癌中检出HPV-5、8、14、17及20型,皮肤鳞状细胞癌似乎是由先已存在的病毒性损害恶变而来。
(二)尖锐湿疣与肛门生殖器癌
生殖器癌与HPV类型有一定的关系。利用DNA杂交技术发现生殖器癌组织中存在HPV-6、11、16、18型等。
1.宫颈癌:根据HPV与宫颈癌的关系,可将其分为两大类型:低危型主要指HPV-6、11型,高危型是指HPV-16、18型,Gissmann等观察到在侵袭性宫颈癌中,有57.4%患者存在着HPV-16、18型,其他学者也有相同发现。还有人从侵袭性宫颈癌中分离出HPV-33和35型。
2.皮肤鳞状细胞癌(SCC):HPV感染而发生的CA也可能是癌前损害,并可发展成肛门生殖器SCC,这表明HPV是女阴、阴茎及肛门生殖器SCC的重要因素。CA,巨大CA和疣状SCC组成一个生殖器癌前病变和癌的损害病谱,有些部位生殖器癌病例在其周围皮肤有CA存在,有时肉眼见为典型的CA,但组织学检查中发现SCC的孤立病灶。
3.鲍温样丘疹病:常见于阴茎、女阴或肛门周围,曾在皮损内发现HPV-16型DNA。
【辅助检查】
一、醋酸白试验
用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟,病灶部位变白稍隆起,肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果,HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同,只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高,它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示,醋酸白试验并不是特异试验,且假阳性较常见。
二、免疫组织学检查
常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP),显示湿疣内的病毒蛋白,以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时,尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。
三、组织化学检查
取少量病损组织制成涂片,用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原,则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成红色。此法特异性强且较迅速,对诊断有帮助。
四、病理检查
主要为角化不全,棘层高度肥厚,乳头瘤样增生,表皮突增厚,延长,其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则,且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大,胞浆着色淡、中央有大而圆,深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣,表皮极度向下生长,代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混,故须多次活检。若有缓慢发展之倾向, 则为一种低度恶变的过程,即所谓疣状癌。
五、基因诊断
迄今,HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测,主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。
(一)标本的采集及处理
1.标本的采集和预处理:用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS离心(3000g,10min)洗涤2次,沉积细胞重悬于1mlPBS中,取0.5ml细胞悬液抽提DNA。
2.标本核酸的提取:按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl,pH 7.4,10mmol/L EDTA,150mmol/L NaCl,0.4%SDS,1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜且等体积酚/氯仿(1:1),氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl,pH 8.0,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃温育30min。
(二)PCR扩增
1. 引物设计和合成:HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L),每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV 6、11、16、18及33型有互补序列,也可扩增其它型HPV。
2.PCR反应试剂:Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/L dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09贮备液,灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
3.PCR扩增方法和程序:以100μl PCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
(1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。
(2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
(3)加入80-100μl石蜡油,在台式离心机上快速离心数秒钟,使各反应试剂收集于油层下。目前,PCR试剂已商品化,反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。
(4)将反应管置PCR扩增仪上,循环参数为95℃ 30s,55℃ 40s,72℃ 50s循环35次,最后72℃延伸5min。
4.每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV的重组质粒(每反应为100pg)或含有HPV的细胞系(如Caski、HeLa)DNA为阳性对照,以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。
(三)扩增产物的检测和分析
1. 凝胶电泳:扩增反应结束后,取出反应管,冷却至室温,取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪下分析结果,分子量约为450bp处出现明显的DNA带。
2. 核酸杂交:如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时,可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。
按照标准方法制32P ATP标记的寡核苷酸探针,需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h,随后于30-55℃下用洗涤液(2×SSC、0.1%SDS)迅速冲洗杂交膜,除去多余探针。然后进行洗膜,其条件依所用探针而异:公用混合探针,55℃洗膜10min;MY12、MY13及MY16探针,56-57℃下10 min,并换液重洗1次;MY14及WD74探针,58-59℃下10min,亦换液重洗1次。
用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高,GP-PCR方法以凝胶电泳直接分析结果,可检出标本中200个拷贝的HPV DNA,若以核酸杂交检测PCR产物,敏感性提高,能检出10个拷贝的HPV DNA。
鉴于PCR技术的高度敏感性,以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求,避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下,PCR扩增产物经凝胶电泳,观察产生的DNA可直接作出诊断。因此,PCR技术检测HPV实验周期短、简便快速。
【鉴别诊断】
1.生殖器鳞癌;多见于40岁以上或老年人,皮损向下浸润,发生溃疡,组织病理有特征性改变。
2.扁平湿疣:为多个湿丘疹融合成片状的皮损,多见于肛周,皮损处可查到梅毒螺旋体,梅毒血清试验呈阳性反应。
3.珍珠状阴茎丘疹病:为沿冠状沟排列,针头及粟粒大小的皮色或淡粉红色丘疹。组织病理无凹空细胞。
4.假性湿疣;损害为局限于小阴唇的粟粒大呈鱼卵状淡红色小丘疹或绒毛状改变,皮损表面光滑,醋酸白试验阴性,病理上无具有诊断意义的凹空细胞。
5.鲍温样丘疹病;为棕红色或色素性小丘疹,组织病理可见异型鳞状细胞及类似原位癌的组织象。
【预防】
控制性病是预防CA的最好方法。发现治疗患者及其性伴;进行卫生宣教和性行为的控制;阴茎套具有预防HPV感染的作用,目前尚无有效疫苗。
二丙二醇又名双丙甘醇,一缩二丙二醇,缩水二丙二醇,4氧-2,6-己二醇。1,-氧-二-2-丙醇,2-羟丙基醚,2,-二羟基二丙醚,简称DPG。
二丙二醇常温下是一种无嗅、无色、有甜味、水溶性和吸湿性液体。溶于水和甲苯,可混溶于甲醇、乙醚,有着辛辣的甜味,无腐蚀性。对皮肤刺激性很小,毒性很低。遇明火、高热可燃。与空气可形成爆炸混合物。适用于香精香料和化妆品等对气味比较敏感的用途。
扩展资料
用途:
1、二丙二醇是诸多香精香料和化妆品应用最理想的溶剂。这种原料具有很好的水分、油分和碳氢化合物共溶能力而且气味轻微、对皮肤刺激性很小、毒性很低、同分异构体分布均匀一致、品质极佳。
2、二丙二醇还可在多种不同美容化妆品应用中作为偶联剂和保湿剂。在香水领域中,二丙二醇的使用比例超过50%;而在其他一些应用领域中,二丙二醇的使用比例一般都在10%(重量)以内。
一些具体的产品应用领域包括:卷发液、皮肤清洗液(冷霜、沐浴露、沐浴液和护肤液)除臭剂、面、手和身体皮肤护理产品,滋润型皮肤护理产品和唇膏等。
参考资料来源:百度百科-二丙二醇
【概述】
本病又称尖圭湿疣、生殖器疣或性病疣。是由人类乳头瘤病毒(HPV)感染引起的一种性传播疾病。HPV有多种类型,引起本病的主要类型为HPV1、2、6、11、16、18、31、33及35型等,其中HPV16和18型长期感染可能与女性宫颈癌的发生有关。
【诊断】
1.不洁性交史。
2.典型皮损为生殖器或肛周等潮湿部位出现丘疹,乳头状、菜花状或鸡冠状肉质赘生物,表面粗糙角化。
3.醋酸白试验阳性,病理切片可见角化不良及凹空细胞。
4.核酸杂交可检出HPV-DNA相关序列,PCR检测可见特异性HPV-DNA扩增区带。
【治疗措施】
由于目前没有特效的抗病毒药物,尖锐湿疣的治疗必须采用综合治疗。
(一)治疗诱因:(白带过多,包皮过长、淋病)。
(二)提高机体免疫力。
(三)应用抗病药物。一般只要坚持规则的综合治疗都可治愈。
1. 手术疗法
对于单发、面积小的湿疣,可手术切除;对巨大尖锐湿疣,可用Mohs氏手术切除,手术时用冷冻切片检查损害是否切除干净。
2. 冷冻疗法
利用-196℃低温的液体氮,采用压冻法治疗尖锐湿疣,促进疣组织坏死脱落,本法适用于数量少,面积小的湿疣,可行1-2次治疗,间隔时间为一周。
3. 激光治疗
通常用CO2激光,采用烧灼法治疗尖锐湿疣,本疗法最适用女阴、阴茎或肛周的湿疣。对单发或少量多发湿疣可行一次性治疗,对多发或面积大的湿疣可行2-3次治疗,间隔时间一般为一周。
4. 电灼治疗
采用高频电针或电刀切除湿疣。方法:局部麻醉,然后电灼,本疗法适应数量少,面积小的湿疣。
5. 微波治疗
采用微波手术治疗机,利多卡因局麻,将杆状辐射探头尖端插入尖锐湿直达疣体基底,当看到就体变小、颜色变暗、由软变硬时,则热辐射凝固完成,即可抽出探头。凝固的病灶可以用镊子挟除。为防止复发,可对残存的基底部重复凝固一次。
6. β-射线治疗
我们应用β-射线治疗尖锐湿疣取得了较为满意的效果,该方法疗效高,无痛苦、无损伤、副作用少,复发率低,在临床上有推广价值。
7. 药物疗法
(1)足叶草脂:本疗法适用湿润区域的湿疣,例如发生于包皮过长而未曾作包皮环切除手术的龟头及会阴部的湿疣。但对宫颈尖锐湿疣不能用足叶草脂治疗。用20%足叶草脂酊剂涂到皮损处或用药前,先有油质抗菌药膏保护皮损周围的正常皮肤或粘膜 ,然后涂药,用后4-6小时,用30%硼酸水或肥皂水清洗,必要时3天后重复用药,该药是国外用于本病治疗的首先药,一般用一次可愈。但有很多缺点,如对组织破坏性大,使用不当可引起局部溃疡。毒性大,主要表现为恶心、肠梗阻、白细胞及血小板减少,心动过速、尿闭或少尿,故使用时必须谨慎,发现上述反应时,应立即停药。
(2)抗病毒药:可用5%酞丁胺霜剂,或用0.25%疱疹净软膏,每日2次,外涂。无环鸟苷口服,每日5次,每次200mg,或用其软膏外用,α-干扰素每日注射300万单位,每周用药五天。或干扰素300万单位注入疣体基部,每周2次。连用2-3周,主要副作用为流感样综合症,局部用药副作用较少且轻微。
(3)腐蚀剂或消毒剂:常用有30%-50%三氯醋酸或饱和二氯醋酸,或18%过氧乙酸。用10%水杨酸冰醋酸或40%甲醛、2%液化酚、75%乙醇蒸馏水100ml混合溶液,点涂局部,用于龟头、肛周湿疣,每日或隔日一次,效果甚好。消毒剂可用20%碘酊外涂,或2.5-5%碘酊注射于疣体基部,每次0.1-1.5ml,或用新洁尔灭外涂或以0.1-0.2%外敷,后者需配合全身疗法。
(4)抗癌药
① 5-氟脲嘧啶(5-F u):一般外用5%软膏或霜剂,每日2次,3周为一疗程。2.5%~5%氟脲嘧啶湿敷治疗阴茎、肛周尖锐湿疣,每次敷20分钟,每日一次,6次为一疗程。也可用聚乙二醇作基质,加入占其干质5%的5- F u粉剂制成栓剂,治疗男女尿道内尖锐湿疣,也可用5- F u基底注射,多者可分批注射。
② 噻替哌:主要用于5-F u治疗失败的尿道内尖锐湿疣,每日用栓剂(每个含15mg),连用8天,也可将本品60mg加入10-15ml消毒水中,每周向尿道内滴注,保持半小时,副作用有尿道炎。亦可用本品10mg加入10ml浸泡患处,每日3次,每次半小时,治疗阴茎、龟头冠状沟湿疣,主要用于经其它方法治疗后,尚有残存疣体或复发者。也可将此溶液再稀释两倍浸泡局部,以预防复发。
③ 秋水仙碱:可用2-8%的生理盐水溶液外涂,涂两次,间隔72小时治疗阴茎湿疣,涂后可出现表浅糜烂。
④ 争光霉素或平阳霉素:用0.1%的生理盐水溶液作皮损内注射,每次总量限制在1毫升(1 mg),大多一次可愈。平阳霉素为争光霉素换代品,用法基本相同,亦有用平阳霉素10 mg溶于10%普鲁卡因20ml内注射。
8.免疫疗法
① 自体疫苗法:用病人自己的疣体组织匀浆(融冷灭活病毒),并进行加热处理(56℃一小时)收集上清液注射,可用于顽固性肛周湿疣。
② 干扰素诱导剂:可用聚肌胞及梯洛龙。聚肌胞每日注射2 ml,连用10天,停药1-2月后,再继续用药。梯洛龙每日3次,每次300 mg,停药4天,或隔日口服600 mg。
③ 干扰素、白介Ⅱ,灵杆菌素,利百多联合应用,疗效较佳。
【病原学】
HPV在皮肤上引起疣赘、在咽部、肛周、生殖器粘膜上形成增殖性病变,其病毒型为小型DNA病毒。感染HPV发生病变多数属于良性,能自行消退,但也有恶化病例。如肛周、生殖器粘膜上形成扁平上皮癌的报道。还有罕见的遗传性皮肤疾患、疣赘状表皮发育异常症(EV)续发的皮肤癌等,在癌细胞中检出HPV。
HPV为乳多空病毒科A属成员,病毒颗粒直径50-55nm无被膜的正20面体构成的病毒壳体,具有7900碱基对的环状双链DNA组成,电镜下病毒颗粒的大小、形态与口多瘤病毒极为相似。乳头瘤病毒(PV)具有种属特异性,HPV尚未能在组织培养或实验动物模型中繁殖。
病毒的结构蛋白组成:85%的PV颗粒,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS——PAGE)可确定病毒有主要衣壳蛋白、分子量为56.000;次要衣壳蛋白,分子量迁移于76.000处,发现4种细胞组蛋白与病毒DNA相关。
所有HPV病毒的基因组结构相似,根据在严格条件下进行DNA杂交的程序可确定病毒的型和亚型,不同的HPV型DNA与其他类型病毒DNA仅50%出现交叉杂交,迄今已发现60多种HPV类型,随着研究的深入,将会鉴定出更多HPV新的类型。
【发病机理】
尖锐湿疣的HPV感染通过性接触传播,接触部位的小创伤可促进感染,三种鳞状上皮(皮肤、粘膜、化生的)对HPV感染都敏感。每一型HPV与特殊的临床损害有关,且对皮肤或粘膜鳞状上皮各有其好发部位。当含有比较大量病毒颗粒的脱落表层细胞或角蛋白碎片进入易感上皮裂隙中时,感染就可能产生,它可因直接接触或少见的自动接种或经污染的内裤、浴盆、浴巾、便盆感染。
病毒感染人体后,可潜伏在基底角朊细胞间,在表皮细胞层复制,HPV侵入细胞核,引起细胞迅速分裂,同时伴随病毒颗粒的繁殖与播散,形成特征性的乳头瘤。晚期基因表达结构多肽,即出现结构蛋白装配颗粒,病毒主要集中在颗粒层中的细胞核内,在表皮的颗粒层出现凹空细胞增多,组织学上正常的上皮细胞也有HPV,治疗后残余的DNA常可导致疾病的复发。
宿主对HPV感染引起的免疫应答,包括细胞免疫与体液免疫两个方面。
一、细胞免疫
人体细胞免疫状态是影响CA发生、转归的重要基础之一。细胞免疫比体液免疫更为重要。临床上伴细胞免疫缺陷的尖锐湿疣患者皮疹常持续不退,其外周血中抑制性T细胞数增多NK细胞功能低下,r-干扰素和白细胞介素2产生减少,而消退疣皮损中常常出现活化T细胞和NK细胞的浸润,部分角朊细胞HLA-DR阳性。
免疫抑制或免疫缺陷时,生殖器HPV感染和HPV相关疾病的发生率均增加。尖锐湿疣中辅助性T细胞耗竭,CD4/CD8比值倒置,其值<1。在CA病人的外周血中,发现抑制/细胞毒性T细胞百分率显著增高,辅助/诱导性T细胞的比值和辅助/抑制T细胞比值均降低。宫颈CA和宫颈上皮内瘤样病变(CIN)病损中朗格罕细胞明显减少。CA中NK细胞 产生r-干扰素和白介素-2减少。鲍温样丘疹病和肛门生殖器癌者中NK细胞对含有HPV-16的角朊细胞的溶解活性下降,可能是对疾病特异性靶细胞的识别缺陷所致,宫颈CA的角朊细胞不表达MHCⅡ型抗原(HLA-DR),无此抗原提呈功能可以破坏免疫监视作用。
二、体液免疫
目前血清学检测结果显示:①抗晚期蛋白抗体产生率为25%-65%,较抗早期蛋白抗体产生率高;②检测出的HPV抗体似有型特异性,无交叉反应;③抗HPV-16E7抗体与宫颈癌的存在有密切关系;④抗HPV-16E4抗体也是发生宫颈癌、复发或近期HPV感染的标志;⑤估计成人和儿童产生IgG抗体的阳性率相同,不同型别阳性率在10%-75%之间;⑥已证明HPV-16或18型肿瘤抗体阳性患者中,仅50%-70%可检出该抗体。
三、尖锐湿疣自然消退
对CA自然消退尚无系统评估,然而以安慰剂对照研究发现其自然消退率在0%,17%、18%和69%之间,CA消退或治愈后,仍有45%患者存在潜伏感染,其中67%患者复发。
【流行病学】
一、流行情况
尖锐湿疣为人类乳头瘤病毒所引起。目前一致认为此病在增多,成为STDS中的最常见疾病,在年轻成人中患病率可达0.5%-1%。英国尖锐湿疣发病率从1970年的30/10万增到1988年的260/10万,几乎增加了8倍,美国此病发病率从1966年到1984年增加了6倍。和艾滋病相似,有症状的尖锐湿疣仅代表感染者的“冰山”之顶,所以如考虑亚临床感染在内,人类乳头瘤病毒感染可能是发病率占第一位的性病。此感染的传播方式包括直接与间接传播,但以性接触最为常见,而且越是近期损害越有传染性,一次性接触估计有50%被传染的可能性;其次为直接非性接触,如自体传染以及新生儿经产道受染;再其次为间接接触,通过污染传染、推测有可能,但因此病病毒尚不能培养,未能证实。
二、尖锐湿疣发生的危险因素
(一)性行为:性伴数及过早性交是造成发生HPV感染的因素。
(二)免疫抑制:HPV感染和与HPV有关的癌似乎是慢性免疫功能抑制的晚期并发症。肾异体移植者中患CA的危险性增加。
(三)HIV感染:HIV阳性发生HPV感染及HPV相关肿瘤的机率增加。
(四)年龄,妊娠:在妇科涂片中检测HPV高峰流行率的年龄为20-40岁,随着年龄增加,流行率稳步下降;妊娠期间的HPV检出率高,产后HPV检出率下降。
【临床表现】
潜伏期3周到8个月,平均3个月,多见于性活跃的青、中年男女,发病高峰年龄为20-25岁,病程平均在3-5个月的男女患者,在性接触后不久即发病,而病程平均12个月的男性患者,其性接触者可不发病。多数患者一般无症状。损害大小及形状不等。可仅为数个,亦可为多数针头样大的损害:在阴肛部可长成大的肿瘤样物,有压迫感;有恶臭味;有时小的湿疣可出现阴部痛痒不适,病人可出现尿血和排尿困难;直肠内尖锐湿疣可发生疼痛、便血,而直肠内大的湿疣则可引起里急后重感。
男性患者好发于包皮系带、冠状沟、包皮、尿道、阴茎、肛门周围和阴囊。病初为淡红或污红色粟状大小赘生物,性质柔软,顶端稍尖,逐渐长大或增多。可发展成乳头状或囊状,基底稍宽或有带,表面有颗粒。在肛门部常增大,状如菜花,表面湿润或有出血,在颗粒间常积存有脓液,散发恶臭气味,搔抓后可继发感染。位于湿度较低干燥部位的生殖器疣,损害常小而呈扁平疣状。位于湿热湿润部位的疣常表现为丝状或乳头瘤状,易融合成大的团块。有严重肝病的患者湿疣可增大。妊娠可使湿疣复发或生长加快。
亚临床感染是指临床上肉眼不能辨认的病变,但用3%-5%醋酸液局部外涂或湿敷5-10分钟可在HPV感染区域发白,即所谓“醋酸白现象”。
HPV感染和肿瘤的发生:
(一)HPV与皮肤肿瘤的发生有关
它在皮肤癌和其他解剖部位的肿瘤似乎起决定作用。口腔良性赘生物和癌前病变,皮肤鳞状细胞癌组织中可发现HPV-11、16、18型DNA,曾报道喉部HPV-6乳头瘤恶变成喉癌,皮肤疣状表皮发育不良(EV)是HPV潜在致癌作用的证据,EV皮损中发现多种HPV型DNA,并在患者皮肤鳞状细胞癌中检出HPV-5、8、14、17及20型,皮肤鳞状细胞癌似乎是由先已存在的病毒性损害恶变而来。
(二)尖锐湿疣与肛门生殖器癌
生殖器癌与HPV类型有一定的关系。利用DNA杂交技术发现生殖器癌组织中存在HPV-6、11、16、18型等。
1.宫颈癌:根据HPV与宫颈癌的关系,可将其分为两大类型:低危型主要指HPV-6、11型,高危型是指HPV-16、18型,Gissmann等观察到在侵袭性宫颈癌中,有57.4%患者存在着HPV-16、18型,其他学者也有相同发现。还有人从侵袭性宫颈癌中分离出HPV-33和35型。
2.皮肤鳞状细胞癌(SCC):HPV感染而发生的CA也可能是癌前损害,并可发展成肛门生殖器SCC,这表明HPV是女阴、阴茎及肛门生殖器SCC的重要因素。CA,巨大CA和疣状SCC组成一个生殖器癌前病变和癌的损害病谱,有些部位生殖器癌病例在其周围皮肤有CA存在,有时肉眼见为典型的CA,但组织学检查中发现SCC的孤立病灶。
3.鲍温样丘疹病:常见于阴茎、女阴或肛门周围,曾在皮损内发现HPV-16型DNA。
【辅助检查】
一、醋酸白试验
用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟,病灶部位变白稍隆起,肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果,HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同,只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高,它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示,醋酸白试验并不是特异试验,且假阳性较常见。
二、免疫组织学检查
常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP),显示湿疣内的病毒蛋白,以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时,尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。
三、组织化学检查
取少量病损组织制成涂片,用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原,则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成红色。此法特异性强且较迅速,对诊断有帮助。
四、病理检查
主要为角化不全,棘层高度肥厚,乳头瘤样增生,表皮突增厚,延长,其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则,且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大,胞浆着色淡、中央有大而圆,深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣,表皮极度向下生长,代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混,故须多次活检。若有缓慢发展之倾向, 则为一种低度恶变的过程,即所谓疣状癌。
五、基因诊断
迄今,HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测,主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。
(一)标本的采集及处理
1.标本的采集和预处理:用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS离心(3000g,10min)洗涤2次,沉积细胞重悬于1mlPBS中,取0.5ml细胞悬液抽提DNA。
2.标本核酸的提取:按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl,pH 7.4,10mmol/L EDTA,150mmol/L NaCl,0.4%SDS,1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜且等体积酚/氯仿(1:1),氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl,pH 8.0,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃温育30min。
(二)PCR扩增
1. 引物设计和合成:HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L),每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV 6、11、16、18及33型有互补序列,也可扩增其它型HPV。
2.PCR反应试剂:Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/L dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09贮备液,灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
3.PCR扩增方法和程序:以100μl PCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
(1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。
(2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
(3)加入80-100μl石蜡油,在台式离心机上快速离心数秒钟,使各反应试剂收集于油层下。目前,PCR试剂已商品化,反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。
(4)将反应管置PCR扩增仪上,循环参数为95℃ 30s,55℃ 40s,72℃ 50s循环35次,最后72℃延伸5min。
4.每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV的重组质粒(每反应为100pg)或含有HPV的细胞系(如Caski、HeLa)DNA为阳性对照,以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。
(三)扩增产物的检测和分析
1. 凝胶电泳:扩增反应结束后,取出反应管,冷却至室温,取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪下分析结果,分子量约为450bp处出现明显的DNA带。
2. 核酸杂交:如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时,可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。
按照标准方法制32P ATP标记的寡核苷酸探针,需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h,随后于30-55℃下用洗涤液(2×SSC、0.1%SDS)迅速冲洗杂交膜,除去多余探针。然后进行洗膜,其条件依所用探针而异:公用混合探针,55℃洗膜10min;MY12、MY13及MY16探针,56-57℃下10 min,并换液重洗1次;MY14及WD74探针,58-59℃下10min,亦换液重洗1次。
用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高,GP-PCR方法以凝胶电泳直接分析结果,可检出标本中200个拷贝的HPV DNA,若以核酸杂交检测PCR产物,敏感性提高,能检出10个拷贝的HPV DNA。
鉴于PCR技术的高度敏感性,以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求,避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下,PCR扩增产物经凝胶电泳,观察产生的DNA可直接作出诊断。因此,PCR技术检测HPV实验周期短、简便快速。
【鉴别诊断】
1.生殖器鳞癌;多见于40岁以上或老年人,皮损向下浸润,发生溃疡,组织病理有特征性改变。
2.扁平湿疣:为多个湿丘疹融合成片状的皮损,多见于肛周,皮损处可查到梅毒螺旋体,梅毒血清试验呈阳性反应。
3.珍珠状阴茎丘疹病:为沿冠状沟排列,针头及粟粒大小的皮色或淡粉红色丘疹。组织病理无凹空细胞。
4.假性湿疣;损害为局限于小阴唇的粟粒大呈鱼卵状淡红色小丘疹或绒毛状改变,皮损表面光滑,醋酸白试验阴性,病理上无具有诊断意义的凹空细胞。
5.鲍温样丘疹病;为棕红色或色素性小丘疹,组织病理可见异型鳞状细胞及类似原位癌的组织象。
【预防】
控制性病是预防CA的最好方法。发现治疗患者及其性伴;进行卫生宣教和性行为的控制;阴茎套具有预防HPV感染的作用,目前尚无有效疫苗。
女性尖锐湿疣潜伏期平均为2-3个月,病变发展无自限性,症状为局部搔痒,疼痛,少数病人无症状.生长部位:外阴,阴道,宫颈,肛周,常见两个部位同时发生,局部表现为淡红色或灰色小丘疹,呈疣状突起,常融合形成菜花样赘生物,有性乱史,用5%的醋酸涂后病变处变白.假性湿疣潜伏期3天-3周,有自限性,一般无症状,有的局部搔痒,多见两侧小阴唇对称性分布,少见两个部位同时发生,病变呈鱼子样或珍珠样小丘疹,有的呈息肉样,绒毛样,不融合,无性乱史,5%醋酸涂后不变白.病因尚不清楚,有人认为多激素,真菌感染或其他慢性刺激有关,易被误诊为尖脱湿疣.
由于目前没有特效的抗病毒药物,尖锐湿疣的治疗必须采用综合治疗.
(一)治疗诱因:(白带过多,包皮过长,淋病).
(二)提高机体免疫力.
(三)应用抗病药物.一般只要坚持规则的综合治疗都可治愈.
1,手术疗法 对于单发,面积小的湿疣,可手术切除;对巨大尖锐湿疣,可用Mohs氏手术切除,手术时用冷冻切片检查损害是否切除干净.
2,冷冻疗法 利用-196℃低温的液体氮,采用压冻法治疗尖锐湿疣,促进疣组织坏死脱落,本法适用于数量少,面积小的湿疣,可行1-2次治疗,间隔时间为一周.
3,激光治疗 通常用CO2激光,采用烧灼法治疗尖锐湿疣,本疗法最适用女阴,阴茎或肛周的湿疣.对单发或少量多发湿疣可行一次性治疗,对多发或面积大的湿疣可行2-3次治疗,间隔时间一般为一周.
4, 电灼治疗 采用高频电针或电刀切除湿疣.方法:局部麻醉,然后电灼,本疗法适应数量少,面积小的湿疣.
5,微波治疗 采用微波手术治疗机,利多卡因局麻,将杆状辐射探头尖端插入尖锐湿直达疣体基底,当看到疣体变小,颜色变暗,由软变硬时,则热辐射凝固完成,即可抽出探头.凝固的病灶可以用镊子挟除.为防止复发,可对残存的基底部重复凝固一次.
6,β-射线治疗 我们应用β-射线治疗尖锐湿疣取得了较为满意的效果,该方法疗效高,无痛苦,无损伤,副作用少,复发率低,在临床上有推广价值.
7,药物疗法
(1)足叶草酯(尤脱欣,鬼臼毒素,疣迪):本疗法适用湿润区域的湿疣,例如发生于包皮过长而未曾作包皮环切除手术的龟头及会阴部的湿疣.但对宫颈尖锐湿疣不能用足叶草脂治疗.用20%足叶草酯酊剂涂到皮损处或用药前,先有油质抗菌药膏保护皮损周围的正常皮肤或粘膜 ,然后涂药,用后4-6小时,用30%硼酸水或肥皂水清洗,必要时3天后重复用药,该药是国外用于本病治疗的首先药,一般用一次可愈.但有很多缺点,如对组织破坏性大,使用不当可引起局部溃疡.毒性大,主要表现为恶心,肠梗阻,白细胞及血小板减少,心动过速,尿闭或少尿,故使用时必须谨慎,发现上述反应时,应立即停药.
(2)抗病毒药:可用5%酞丁胺霜剂,或用0.25%疱疹净软膏,每日2次,外涂.无环鸟苷口服,每日5次,每次200mg,或用其软膏外用,α-干扰素每日注射300万单位,每周用药五天.或干扰素300万单位注入疣体基部,每周2次.连用2-3周,主要副作用为流感样综合症.
(3)腐蚀剂或消毒剂:常用有30%-50%三氯醋酸或饱和二氯醋酸,或18%过氧乙酸.用10%水杨酸冰醋酸或40%甲醛,2%液化酚,75%乙醇蒸馏水100ml混合溶液,点涂局部,用于龟头,肛周湿疣,每日或隔日一次,效果甚好.消毒剂可用20%碘酊外涂,或2.5-5%碘酊注射于疣体基部,每次0.1-1.5ml,或用新洁尔灭外涂或以0.1-0.2%外敷,后者需配合全身疗法.
(4)抗癌药
① 5-氟脲嘧啶(5-F u):一般外用5%软膏或霜剂,每日2次,3周为一疗程.2.5%~5%氟脲嘧啶湿敷治疗阴茎,肛周尖锐湿疣,每次敷20分钟,每日一次,6次为一疗程.也可用聚乙二醇作基质,加入占其干质5%的5- F u粉剂制成栓剂,治疗男女尿道内尖锐湿疣,也可用5- F u基底注射,多者可分批注射.
② 噻替哌:主要用于5-F u治疗失败的尿道内尖锐湿疣,每日用栓剂(每个含15mg),连用8天,也可将本品60mg加入10-15ml消毒水中,每周向尿道内滴注,保持半小时,副作用有尿道炎.亦可用本品10mg加入10ml浸泡患处,每日3次,每次半小时,治疗阴茎,龟头冠状沟湿疣,主要用于经其它方法治疗后,尚有残存疣体或复发者.也可将此溶液再稀释两倍浸泡局部,以预防复发.
③ 秋水仙碱:可用2-8%的生理盐水溶液外涂,涂两次,间隔72小时治疗阴茎湿疣,涂后可出现表浅糜烂.
尖锐湿疣药物种类繁多,治疗机理各不相同,使用不当反会加重肝脏负担,因此应该选择性应用.在应用抗病毒药的同时,还应注意查明导致肝,肾功能不良的副作用,标本兼治,才能达到保护身体健康,清除体内病毒的目的.
8.免疫疗法
① 自体疫苗法:用病人自己的疣体组织匀浆(融冷灭活病毒),并进行加热处理(56℃一小时)收集上清液注射,可用于顽固性肛周湿疣.
② 干扰素诱导剂:可用聚肌胞及梯洛龙.聚肌胞每日注射2 ml,连用10天,停药1-2月后,再继续用药.梯洛龙每日3次,每次300 mg,停药4天,或隔日口服600 mg.
③ 干扰素,白介Ⅱ,卡介素,灵杆菌素,利百多联合应用,疗效较佳.