实验室同常用的二甲苯是那种

不可以。

石蜡包埋，石蜡不溶于水，而溶于二甲苯，所以不可以用水溶解。

石蜡包埋即把组织放到像蜡烛一样的蜡里面进行包埋，把它包埋成硬硬的组织。

石蜡切片法 ：

石蜡切片法是以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法.在研究植物的细胞,组织,胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法.

石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片.

取材

用锋利的刀片切取新鲜的植物材料,选定适宜的材料,立即固定.

取材的注意事项如下:

(1)取材料要新鲜.动作要迅速,以免挤压损坏组织取病理材料时,应设置对照材料.

(2)所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm,切取成5-10mm小段叶片一般取过中脉处,切成2-5mm宽,5-8mm长.在切材料时,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,否则制成的切片细胞是斜的. 雌,雄蕊一般不需分割.

(3)取材时间可根据切片要求有所区别.如:在进行植物发育的研究过程时,需要找到细胞分裂相,一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材,此时植物细胞分裂活动较明显.

(4)取材不易过老,否则制片有难度(过老的材料须在滑走切片机上进行)对纵切的材料适当多取材,如根尖,茎尖等,因为切到材料正中的概率较低.

(二)固定

将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中.借助固定液的作用,使细胞的新陈代谢瞬时停止,并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化.从而达到使组织变硬从而便于切片,增强内含物的折光度,令细胞易于着色的目的,同时具有防腐作用.以新鲜配制固定液效果较好.固定的时间依材料的种类,性质,大小等而定.材料固定完毕,保存于加盖的容器内,贴上标签.

良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色.

常用固定液:

简单固定液 以一种化学药品配制的固定液.

⑴ 乙醇 为凝固型固定剂.常用无水乙醇或95%乙醇.

⑵ 甲醛 为非凝固性固定剂.具强烈刺激性气味.纯净的甲醛为无色透明液体.固定用的浓度为4%-10%.

⑶ 醋酸 为凝固型固定剂.为无色透明的液体,刺激性极强,低温下凝结成冰,故又名冰醋酸.

2. 混合固定液:

由几种试剂,适量配制而成.混合遵循原则:① 优缺点互补② 膨胀与收缩相互平衡③ 强氧化剂与还原剂应分别配置.

常用混合固定液有下列几种:

⑴ FAA 固定液(福尔马林-冰醋酸-乙醇) 广泛适用于根,茎,叶,花药,子房的组织切片,所以又称为万能固定液.一般固定时间不低于24 h.该固定液优点是在较低温度下(10℃左右)适用于材料的长期保存,可兼作保存液.并且固定的材料,不妨碍染色,但用于细胞学上的固定效果较差.

⑵ 纳瓦兴(Navaschjn's)固定液 1912年首创.适用于细胞学与组织学研究的切片观察.但渗透慢,不能长期保存主要用于显示分裂相.

(三)抽气

植物材料内部多由于含有空气,导致固定液不能完全深入.材料投入固定液后需要立即抽气.以便让固定液有效透入材料组织中,并排除材料内气泡的干扰.

一般抽气时间为20-30 min.抽过气的材料在停止抽气,应沉入底部.

(四)洗涤

固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶,影响观察有的还会继续作用,使材料变质等.因此,在使用材料时,需根据固定液的种类,用水,缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液.如:用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次.如用水洗涤,可将材料自固定液中取出,放入指形管,加入半管水,用纱布将管口扎紧,置于水槽内,进行流水冲洗.流水冲洗时间一般为12-24 h.

(五)脱水

材料经洗涤后含有部分水分,会使材料分解.而且透明剂与水是不相混合的,不利于材料的透明和包埋等后期处理.因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分,以便让石蜡渗透进细胞.所以,脱水是制片的关键环节.脱水剂要求能与水混合,而且能与其他有机溶剂互相替代.

脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行,防止吸收空气中的水分在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料,以免损坏材料.

(六)透明

透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质,可以将材料中的脱水剂置换出来,使石蜡能顺利进入材料中.

二甲苯是目前应用最广的透明剂,作用迅速,但易使材料变脆..

(七)浸蜡

是指逐步清除材料中的透明剂,以使石蜡充分渗透于材料内部的过程.这样,材料的各部分都能保持原来的结构与位置,切片不致发生破裂或其他变形.

浸蜡是一个渐进的过程,常用的正丁醇.

每次浸蜡的时间,视材料大小而调节.

(八)包埋

材料经过足够时间的浸蜡后,需包入蜡块,以备切片.

操作方法:根据切片材料大小,确定所需纸盒的尺寸,用表面光滑的磅纸预先叠好纸盒.

(九)切片

即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带.

(十)贴片

是用黏贴剂把切片平铺贴在载玻片上,以便于染色和观察.

常用的粘片剂有下列二种:

(1) 明胶黏片剂

(2) 蛋清黏片剂

(十一) 染色

即根据植物细胞中不同的化学性质,用染料分别进行染色,以利于观察切片中细胞与组织的形态与构造及其内含物等.染色基本程序为脱蜡,染色,分色封片.

染色方法可分为下列几类:

① 单染 只用一种染料染色.

② 双重染色 两种染料染色,如番红--固绿苏木精---曙红.

③ 多重染色 多种染料染色,如番红—固绿—桔红G酸性品红—苯胺蓝—桔红G等.

(十二) 封藏

封藏于中性树胶中,使材料能在显微镜下清晰地显示出来,并能长期保存.

方法:将含材料的载玻片放在吸水纸上(切片一面向上),迅速地在切片的中央滴一滴树胶(必须在二甲苯干燥前进行),用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧,稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触,然后再缓慢地放下,避免产生气泡.

冷冻切片法：

冷冻切片的制作方法

（1）低温恒冷箱冷冻切片制作法

1．本室现有Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机的主要性能。该机的箱面上有电子控制板，装有即时冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，机器马上进行工作状态，并可持续10mins。启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉，并可持续15mins。有照明键一个，启动该键可照明工作间，有利工作及观察组织的冰冻状况。配有消毒键一个，当进行一周的工作或者一天的工作后，启动该键，可对工作间进行消毒。当每天工作完毕时，可启动密锁键，锁住工作间。除此之外，箱面的左边有四个按键，两个为快速自动进退键，两个为微小进退键，还有一个手动旋钮，调节修组织块时的进退。

冷冻箱内左边的冷冻台，温度可达-60℃左右，冷冻箱的中间为一台切片机，工作间的温度在0-30℃间可任意调节，并在箱面上的荧屏显示出来。

2．操作方法及步骤：

①取材，未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为24×24×2mm。

②取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。

③将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

④调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10um间。

⑤调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。

⑥应视不同的组织选择不同的冷冻度。冷冻箱中冷冻度的高低，主要根据不同的组织而定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10- -15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-15～20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃左右，切含大量的脂肪时，应调至-30℃。

3．冰冻切片时的注意事项：

①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。

②多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。

③放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。

④组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。

⑤当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。另者，调高冰冻点。

⑥用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。

4．冰冻切片的快速染色法

冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，经一年多来1000例冰冻切片的制作实践认为这样制作固定切片好，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存。

方法：

① 切片固定30秒－1分钟。

② 水洗。

③ 染苏木素3－5分钟。

④分化。

⑤ 于碱水中返蓝20秒。

⑥ 伊红染色10－20秒。

⑦脱水，透明，中性树胶封固。

冰冻组织1－2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。总共在10分钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。

冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等，这些方法在目前来说已很少使用，因此在这里不作阐述。

  产品特点

◎裂解液、消化液经专门优化，无需过夜温育即可从福尔马林固定的、石蜡包埋组织中高效纯化基因组RNA；

◎提取的RNA纯度高，A260/A280为1.8-2.0；

◎产率高，同样的样本量提取的RNA更多。

产品介绍

BIOG RNAFFPE Tissue Kit专为快速高效的从福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本中提取RNA而设计。试剂盒使用我司特别研制的裂解液释放组织中的RNA，并使用反复优化的消化液去除RNA交联和已经降解的小片段RNA。BIOG RNAFFPE Tissue Kit采用进口离子膜吸附RNA，而大多数蛋白质、多糖和脂类物资则被去除。较其它品牌的同类试剂盒产量更大，纯度更高，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染，可以直接应用于Northern杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。 

操作步骤：

[if !supportLists]1. [endif]请自行准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。

[if !supportLists]2. [endif]取出析出液和洗涤液，按以下操作：a)析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

[if !supportLists]3. [endif]样本处理：a) 取5-8 μm 厚石蜡切片5-10张，60℃放置5分钟，放入装有二甲苯的玻璃瓶中，浸泡10分钟后，用手术刀或刀片，将组织刮下，放入1.5 mL离心管。也可将石蜡切片60℃放置5分钟后，直接放入含1.2 mL二甲苯的1.5 mL离心管，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2min，弃上清。b）石蜡块：手术刀刮取20-30 mg石蜡包埋组织样本（尽量去除石蜡部分），放入1.5 mL离心管，加入1 .2mL二甲苯，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2min，弃上清。c）福尔马林固定、未包蜡样本：取30 mg样本，用手术刀剪碎，置于1.5 ml离心管中，加入500 μL生理盐水，涡旋振荡20秒， 12,000 rpm室温离心2 分钟，弃上清。重复2次，转步骤6处理。

[if !supportLists]4. [endif]在上述处理过的脱蜡样本管中加入1.2mL无水乙醇，旋涡震荡30 秒，12,000 rpm离心2分钟，弃上清（注意不要倒掉沉淀，少量乙醇可用吸水纸吸去，未包蜡样本不需此步）。

[if !supportLists]5. [endif]开盖，室温放置5分钟，去除残留无水乙醇。

[if !supportLists]6. [endif]加入100 μL生理盐水，震荡混匀20秒；加入200 μL裂解液，20μL消化液A，振荡混匀，室温放置5分钟。

[if !supportLists]7. [endif]加入20 μL消化液B，震荡混匀，56℃水浴90分钟至组织完全消化裂解。（最好消化至溶液中无组织碎片，皮肤、肺脏、子宫等结缔组织较多的切片应适当延长消化时间。）

[if !supportLists]8. [endif]加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。

[if !supportLists]9. [endif]将吸附柱放入收集管内，将混合物吸入吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

[if !supportLists]10. [endif]将吸附柱放回收集管内，加500 μL洗涤液至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

[if !supportLists]11. [endif]将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm离心2分钟，离去残留的洗涤液。

[if !supportLists]12. [endif]取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-100 μL洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃离心2分钟，收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-70℃保存。

注意事项：

1. 为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。

2. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

3. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于37℃水浴中溶解即可。

BIOG操作步骤：

1. 请自行准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及1.5mL离心管。

2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

3. 样本处理：a) 取5-8 μm 厚石蜡切片5-10张，60℃放置5分钟，放入装有二甲苯的玻璃瓶中，浸泡10分钟后，用手术刀或刀片，将组织刮下，放入1.5 mL离心管。也可将石蜡切片60℃放置5分钟后，直接放入含1.2 mL二甲苯的1.5 mL离心管，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2 min，弃上清。 b）石蜡块：手术刀刮取20-30 mg石蜡包埋组织样本（尽量去除石蜡部分），放入1.5 mL离心管，加入1 .2mL二甲苯，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2 min，弃上清。c）福尔马林固定、未包蜡样本：取30 mg样本，用手术刀剪碎，置于1.5 ml离心管中，加入500 μL生理盐水，涡旋振荡20秒， 12,000 rpm室温离心2 分钟，弃上清。重复2次，转步骤6处理。

4. 在上述处理过的脱蜡样本管中加入1.2 mL 无水乙醇，旋涡震荡30 秒，12,000 rpm 离心 2分钟，弃上清（注意不要倒掉沉淀，少量乙醇可用吸水纸吸去，未包蜡样本不需此步）。

5. 开盖，室温放置5分钟，去除残留无水乙醇。

6. 加入100 μL生理盐水，震荡混匀20秒；加入200 μL裂解液，20μL消化液A，振荡混匀，室温放置5分钟。

7. 加入20 μL消化液B，震荡混匀，56℃水浴90分钟至组织完全消化裂解。（最好消化至溶液中无组织碎片，皮肤、肺脏、子宫等结缔组织较多的切片应适当延长消化时间。）

8. 加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。

9. 将吸附柱放入收集管内，将混合物吸入吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

10. 将吸附柱放回收集管内，加500 μL洗涤液至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

11. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm离心2分钟，离去残留的洗涤液。

12. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-100 μL 洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃离心2分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项： 本试剂盒提取DNA品质有赖于样本本身的质量，组织是否及时固定、固定时间、固定剂种类等均影响DNA的完整性。裂解液、析出液、消化液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于37℃水浴中溶解即可。

染色流程(1)二甲苯（Ⅰ） 15min (2) 二甲苯（Ⅱ） 15 min (3)100%乙醇（Ⅰ） 5min (4)100%乙醇（Ⅱ） 5 min (5)80%乙醇 5min (6)蒸馏水 5 min (7)苏木精液染色 5 min (8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s (9) 1%盐酸乙醇 1-3 s (10) 稍水洗 10-30 s (13)蒸馏水过洗 1-2 s (14) 0.5%伊红液染色 1-3 min (15) 蒸馏水稍洗 1-2 s (16) 80%乙醇稍洗 1-2 s (17) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s (18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s (19) 无水乙醇 5-10 min (20) 石炭酸二甲苯 5-10 min (21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min (22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min (23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min (24) 中性树胶封固 注：①第（10）、（11）步可省去,（12）步冲水时间需延长至20-30min.②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇.* 冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定 10～30 s （2）稍水洗 2 s （3）苏木精液染色（60℃） 30～60 s （4）流水洗去苏木精液 10 s （5）1%盐酸乙醇 3 s （6）稍水洗 2 s （7）促蓝液返蓝 10 s （8）流水冲洗 15～30 s （9）0.5%曙红液染色 30～60 s （10）蒸馏水稍洗 2 s （11）80%乙醇 2 s （12）95%乙醇 2 s （13）无水乙醇 2 s （14）石炭酸二甲苯 3 s （15）二甲苯（Ⅰ） 3 s （16）二甲苯（Ⅱ） 3 s （17）中性树胶封固.注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇.染色结果：细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色.4．12 切片脱水透明 切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖.如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色.切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水.石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去.

石蜡包埋组织的DNA因受固定剂的类型、固定时间、固定温度及组织处理过程等多种因素影响而极易断裂，故操作步骤不宜过多。如何提高石蜡包埋组织DNA提取质量，我们的体会是：

1.蜡块的选择，在DNA提取前检查组织切片。如果有自溶、退变或组织结构不清，大片出血等改变的蜡块不能用；若哟明显坏存在的蜡块，最好不用或将坏死部分切去后再用。

2.由于固定和包埋组织由于化学修饰作用，使得DNA与蛋白质不易分离。因此必须增加SDS和蛋白酶K的浓度和作用时间：SDS可增至1%~2%，蛋白酶K可分次加入，并注意不时震摇，使酶与组织充分接触。

3.根据组织细胞密度和细胞外间质的多少，DNA释放率是有差异的。对于含有较多间质的肺组织，我们在预实验中观察孵育时间最少要达到24h。

4.在DNA提取过程中，应尽可能轻柔操作，避免过多地移管。若必需移管时应选用大口吸管。尽可能避免人为的DNA剪切。

BIOG石蜡包埋组织DNA抽提试剂盒对福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本中的DNA提取很有用。

1 、非切片法

即不用切片机，不经切片手续而制成切片的方法，根据材料性质的不同，有不同的处理方法，该类方法操作简单快捷，其中铺片法、封藏法可使原有组织结构不被破坏，涂片法、压片法弥补了用包埋、切片法所不可能观察清楚的不足，因此是显微标本制作的中常用的手段。

1.1 涂片法

主要用于血液、精液、尿液、痰液、微生物等不能切片成薄片的液态颗粒性材料，可在载玻片上涂成单层细胞，再经固定，脱水，染色等手段制成永久标本。

1.2 铺片法

主要用于动、植物组织的表皮层观察，可活体取待观察动、植物组织，用尖镊子撕去一层表皮，迅速平铺在载玻片上。 如洋葱表皮细胞的铺片制备。

1.3 压片法

一些较幼嫩，柔软的材料可将其置载玻片上，用小解剖刀将其分散，加染料一滴，再盖上盖玻片，用拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄片，再进行观察，如植物根尖观察染色体，花粉粒观察发育阶段等。

1.4 离析法

该方法是利用化学试剂使组织的细胞间质溶解，使细胞能分散成单个个体。经染色、脱水、透明即可观察其个体形态，适用于肌肉、叶片、茎等部位。

1.5 磨片

用于很坚硬的组织，如骨和牙。

2 、切片法

切片法是必须依靠手或切片机将组织切成薄片来进行观察的方法。为了能清晰地观察到动、植物的组织结构及细胞形态，必须先经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质，使组织变硬以利于切成薄片，根据所用支持剂的种类不同，可分为徒手切片法、石蜡切片法、火棉胶切法、冰冻切片法等类型，切成薄片后还需要去蜡，染色、脱水、透明等步骤，将其制成永久标本。

下边以石蜡切片为例，介绍显微标本制作方法。

2.1 取材

根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求新鲜、准确、完整，材料要避免挤压、挫伤、干枯。所采集材料应立即放入固定剂，并编号，注明采集时间、地点、名称、组织部位，所取组织块要大小适当，即要能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。一般组织学取材稍大，细胞学取材稍小，植物组织取材稍小，动物组织取材要稍大。

动、植物的任何组织部位，要制成切片，首先用化学试剂将其固定，固定的作用在于通过固定剂，在尽量短的时间内使原生质体停止生命活动，并如同生前一样精细的保存其细胞结构，同时易于后步骤的染色所以良好的固定剂应该具备以下条件：迅速渗入组织杀死原生质体，在短时间内，组织内外完全固定；尽可能避免使组织膨胀或收缩，并且软硬合适于切片；增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，同时增加媒染作用和染色能力。固定液同时是防腐液，使材料不致变质。

2.3 脱水

脱水是用一种即能与水又能与透明液混合的液体来逐渐置换样品中游离的水。现采用的脱水剂一般是丙酮或乙醇来进行梯度脱水，脱水的时间，可根据组织的类型，大小而定。

脱水的过程：

一般是30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%→90%→100% →100%

脱水应逐步而不应跨越太大的进行，否则将引起组织强烈的收缩或变形，在经无水乙醇处理时，应保证试剂的纯度。

2.4 透明

透明是用一种即能与酒精又能与包埋介质混合的液体来置换样品中的酒精，从而为最终的包埋创造一个有利的条件。 现采用的透明剂一般是二甲苯、甲苯、氯仿等。

其过程为：1/3二甲苯+2/3乙醇混合液→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→2/3二甲苯+1/3乙醇混合液→二甲苯→二甲苯

二甲苯是使用最广泛的一种透明剂，它具有渗透力强，溶解石蜡量大，又易挥发的优点，其缺点是易使组织收缩，变硬，变脆，因此透明时间应根据组织块大小及质地酌情而定。

2.5 渗蜡

将完成透明步骤的组织块浸入透明剂与石蜡混合液中，不断提高石蜡的比例，直至用石蜡完全置换了组织块中的透明剂，便于今后的包理与切片。 石蜡有液态与固态二种，渗蜡要在恒定温箱（60°c）中进行，以保证石蜡处于液态中。

2.6 包理

组织块经石蜡渗透后，其内部间隙已完全被石蜡占据，此时还需要用同种硬度的石蜡包理成蜡块以利于后边的切片，包理可用相同的器具，也可折叠一牛皮纸盒。

将液态石蜡缓缓倒入纸盒中，再用镊子轻轻将浸好蜡的组织块夹入纸盒，浅埋在石蜡内，待石蜡冷却成固态即包埋完毕。

至此，一块组织已完成前处理过程，可以切片，前边的步骤表明看来既无高深的理论，又无复杂的技术，一切看似简单，但一步做不到都会造成整个制片的前功尽弃。

2.7 切片

修块：切片前需修整蜡块，即将包埋好的一大块蜡块切开，使每一小块都含有一块组织，并将这组织周围的石蜡切除，将组织修成一小块蜡块并粘在大小适宜的硬木块上，以便于固定在切片机上。

贴片：一手持毛笔，一手转动切片机，切片的蜡片连成一长条蜡带

切下的蜡带放在一干净黑纸上，用小刀根据需要切成数段，分别贴在干净载玻片上。在恒温展片台上展平、烘干。

2.8 染色

切片可用不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用二甲苯去除石蜡再用酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同的染剂，最常用的是苏木精，伊红染色苏木精使细胞核是深紫色，伊红使细胞质显粉红色，以此显示清晰的细胞形态和核的大小，位置，染色后再根据制片的基本原理，使带水的载片经历脱水→透明步骤最后哟感树胶封片

基本步骤如下：二甲苯×2（脱蜡）→酒精+二甲苯（1:1）→100%酒精×2→90% 酒精→80%→70%→50%→30%→水→苏木精染色(镜检)→水→50%→70%→90%→0.5%伊红(95%酒精配制)→95%→100%×2→二甲苯:酒精(1:1)→二甲苯×2→树胶封片

简便方法：

先将各种材料切成片，要薄，不要用力的用镊子夹，放在载玻片上，在载玻片上滴一滴水，将薄片放入，如颜色十分淡，加碘酒染色，盖上盖玻片，用纸巾将水吸干，即可。