为什么反相高效液相色谱法对硝基苯酚
实验方法原理 反相离子对色谱是用疏水的固定相和含有低浓度反离子的极性缓冲液作流动相进行色谱分离的一种方法。它可以用于离子型或可解离化合物的分离，有代替离子交换色谱的趋势，成为液相色谱的一个很有生气的组成部分。最容易被接受的机制是认为解离的溶质与流动相中的反粒子形成疏水性离子对，然后按反相色谱的规律进行分离。反离子的大小及浓度、有机改良剂的浓度和 pH 值均是控制分离的重要因素。硝基酚类是可解离的有机酸，分离时采用四丁基铵离子作为反离子，在弱碱性条件下，硝基酚类按 pKa值减小的顺序流出。内标法是广泛使用的色谱定量方法。在进行色谱定量之前，要选择合适的内标物，并准确测定校对因子。硝基酚类的测定采用 2，4—二氯苯酚做内标物。测定校对因子 fi 时，将一定量组分 i 的标准品，与一定量的内标物混合，进行色谱分离，测得的峰面积分别为 Ai和 As，W 代表重量。进行定量分析时，将需一定量的内标物 S 加入欲测的样品中，进行.....
硝基苯酚:联合国、国际海事组织和美国等规定为有毒污染物，做出了大气、地面水、水排放、废弃物、食品包装、海洋运输等方面的管理要求与容许限值。联邦德国规定三种异构体的空气排放标准为20mg/m3（一级），150mg/m3（二级），300 mg/m3（三级）。苏联规定大气初步安全水平为3μg/ m3，地面水最高容许浓度为0.02mg/L。
1、酚在室温下可被稀硝酸硝化，生成邻、对位硝基化合物。使用稀硝酸即可生成邻硝基苯酚和对硝基苯酚的混合物。如使用浓硝酸和浓硫酸的混合物作硝化剂则可生成二硝基苯酚或三硝基苯酚。
2、酚水溶液与溴水反应立刻生成三溴苯酚白色沉淀，环境检测中常用来对苯酚定性或定量测定。
3、苯酚使红色溶液（滴有酚酞试液的氢氧化钠溶液）逐渐变浅。
扩展资料
1、酚羟基由于p-π共轭而难于被取代，但苯环上的氢原子可被取代，发生卤化、硝化和磺化等反应，并且羟基是邻、对位定位基，对苯环有活化作用，故酚比苯更容易进行亲电取代反应。
2、苯酚最早是从煤焦油回收，目前绝大部分是采用合成方法。到20世纪60年代中期，开始采用异丙苯法生产苯酚、丙酮的技术路线，已发展占世界苯酚产量的一半，目前采用该工艺生产的苯酚已占世界苯酚产量的90%以上。其他生产工艺有甲苯氯化法、氯苯法、磺化法。
参考资料来源：百度百科-酚
参考资料来源：百度百科-苯酚
水质硝酸盐氮的测定酚二磺酸分光光度法
1 适用范围
本标准适用于测定饮用水、地下水和清洁地面水中的硝酸盐氮。
1．1 测定范围
本方法适用于测定硝酸盐氮浓度范围在0．02-2．0mg／L之间。浓度更高时，可分取较少的试份测定。
1．2 最低检出浓度
采用光程为30mm的比色皿，试份体积为50ml时，最低检出浓度为0．02mg／L。
1．3 灵敏度
当使用光程为30mm的比色皿，试份体积为50ml，硝酸盐氮含量为0．60mg／L时，吸光度约0．6单位。
使用光程为10mm的比色皿，试份体积为50ml，硝酸盐氮含量为2．0mg／L时，其吸光度约0．7单位。
1．4 干扰
水中含氯化物、亚硝酸盐、铵盐、有机物和碳酸盐时，可产生干扰。含此类物质时，应作适当的前处理，以消除对测定的影响。
2 原理
硝酸盐在无水情况下与酚二磺酸反应，生成硝基二磺酸酚，在碱性溶液中，生成黄色化合物，于410nm波长处进行分光光度测定。
3 试剂
本标准所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂，实验中所用的水，均应用蒸馏水或同等纯度的水。
3．1 硫酸：?=1．84g／ml。
3．2 发烟硫酸(H2SO4·SO3)：含13％三氧化硫(SO3)。
注：(1)发烟硫酸在室温较低时凝固，取用时，可先在40-50℃隔水浴中加温使熔化，不能将盛装发烟硫酸的玻璃瓶直接置入水浴中，以免瓶裂引起危险。
(2)发烟硫酸中含三氧化硫(SO3)浓度超过13％时，可用硫酸(3．1)按计算量进行稀释。
3．3 酚二磺酸(C6H3(OH)(SO3H)2)。
称取25g苯酚置于500ml锥形瓶中，加150ml硫酸(3．1)使之溶解，再加75ml发烟硫酸(3．2)，充分混和。瓶口插一小漏斗，置瓶于沸水浴中加热2h，得淡棕色稠液，贮于棕色瓶中，密塞保存。
注：(1)当苯酚色泽变深时，应进行蒸馏精制。
国家环境保护局1987-03-14批准 1987-08-01实施
(2)无发烟硫酸时，亦可用硫酸(3．1)代替，但应增加在沸水浴中加热时间至6h，制得的试剂尤应注意防止吸收空气中的水分，以免因硫酸浓度的降低，影响硝基化反应的进行，使测定结果偏低。
3．4 氨水(NH3·H2O)：?=0．90g／ml。
3．5 硝酸盐氮标准溶液：cN=100mg／L。
将0．7218g经105-110℃干燥2h的硝酸钾(KNO3)溶于水中，移入1000ml容量瓶，用水稀释至标线，混匀。加2ml氯仿作保存剂，至少可稳定6个月。
每毫升本标准溶液含0．10mg硝酸盐氮。
3．6 硝酸盐氮标准溶液：cN=10．0mg／L。
吸取50．0ml硝酸盐氮标准溶液(3．5)，置蒸发皿内，加氢氧化钠溶液(3．9)使调至pH8，在水浴上蒸发至于。加2ml酚二磺酸试剂(3．3)，用玻璃棒研磨蒸发皿内壁，使残渣与试剂充分接触，放置片刻，重复研磨一次，放置10min，加入少量水，定量移入500ml容量瓶中，加水至标线，混匀。
每毫升本标准溶液含0．010mg硝酸盐氮。
贮于棕色瓶中，此溶液至少稳定6个月。
注：本标准溶液应同时制备两份，如发现浓度存在差异时，应重新吸取硝酸盐氮标准溶液(3．5)进行制备。
3．7 硫酸银溶液
称取4．397g硫酸银(Ag2SO4)溶于水，稀释至1000ml。
1．00ml此溶液可去除1．00mg氯离子(C1-)。
3．8 硫酸溶液：0．5mol／L。
3．9 氢氧化钠溶液：0．1mol／L。
3．10 EDTA二钠溶液。
称取50gEDTA二钠盐的二水合物(C10H14N2O3Na2·2H2O)，溶于20ml水中，使调成糊状，加入60ml氨水(3．4)充分混合，使之溶解。
3．11 氢氧化铝悬浮液。
称取125g硫酸铝钾(Kal(SO4)2·12H2O)或硫酸铝铵(NH4Al(SO4)2·12H2O)溶于1L水中，加热到60℃，在不断搅拌下徐徐加入55ml氨水(3．4)，使生成氢氧化铝沉淀，充分搅拌后静置，弃去上清液。反复用水洗涤沉淀，至倾出液无氯离子和铵盐。最后加入300ml水使成悬浮液。
使用前振摇均匀。
3．12 高锰酸钾溶液：3．16g／L。
4 仪器
常用实验室仪器及：
4．1 瓷蒸发皿：75～100ml容量。
4．2 具塞比色管：50ml。
4．3 分光光度汁：适用于测量波长410nm，并配有光程10mm和30mm的比色皿。
5采样和样品
按照国家标准规定及根据待测水的类型提出的特殊建议进行采样。实验室样品可贮于玻璃瓶或聚乙烯瓶中。
硝酸盐氮的测定应在水样采集后立即进行，必要时，应保存在4℃下，但不得超过24h。
6 步骤
6．1 试份体积的选择
最大试份体积为50m1，可测定硝酸盐氮浓度至2．0mg／L。
6．2 空白试验
取50ml水，以与试份测定完全相同的步骤、试剂和用量，进行平行操作。
6．3 干扰的排除
6．3．1 带色物质
取100ml试样移入100ml具塞量筒中，加2ml氢氧化铝悬浮液(3．11)，密塞充分振摇，静置数分钟澄清后，过滤，弃去最初滤液的20ml。
6．3．2 氯离子
取100ml试样移入100ml具塞量筒中，根据已测定的氯离子含量，加入相当量的硫酸银溶液(3．7)，充分混合，在暗处放置30min，使氯化银沉淀凝聚，然后用慢速滤纸过滤，弃去最初滤液20ml。
注：(1)如不能获得澄清滤液，可将已加过硫酸银溶液后的试样在近80℃的水浴中加热，并用力振摇，使沉淀充分凝聚，冷却后再进行过滤。
(2)如同时需去除带色物质，则可在加入硫酸银溶液并混匀后，再加入2ml氢氧化铝悬浮液，充分振摇，放置片刻待沉淀后，过滤。
6．3．3 亚硝酸盐
当亚硝酸盐氮含量超过0．2mg／L时，可取100ml试样，加1ml硫酸溶液(3．8)，混匀后，滴加高锰酸钾溶液(3．12)，至淡红色保持15min不褪为止，使亚硝酸盐氧化为硝酸盐，最后从硝酸盐氮测定结果中减去亚硝酸盐氮量。
6．4 测定
6．4．1 蒸发
取50．0ml试份入蒸发皿中，用pH试纸检查，必要时用硫酸溶液(3．8)或氢氧化钠溶液(3．9)，调节至微碱性(pH≈8)，置水浴上蒸发至干。
6．4．2 硝化反应
加1．0ml酚二磺酸试剂(3．3)，用玻璃棒研磨，使试剂与蒸发皿内残渣充分接触，放置片刻，再研磨一次，放置10min，加入约10ml水。
6．4．3 显色
在搅拌下加入3～4ml氨水(3．4)，使溶液呈现最深的颜色。如有沉淀产生，过滤；或滴加EDTA二钠溶液(3．10)，并搅拌至沉淀溶解。将溶液移入比色管(4．2)中，用水稀释至标线，混匀。
6．4．4 分光光度测定
于410nm波长，选用合适光程长的比色皿，以水为参比，测量溶液的吸光度。
6．5 校准
6．5．1 校准系列的制备
用分度吸管向一组10支50ml比色管中，加入硝酸盐氮标准溶液，所加体积如下表，加水至约40ml，加3ml氨水(3．4)使成碱性，再加水至标线，混匀。
按6．4．4进行分光光度测定。所用比色皿的光程长亦如表所示。
校准系列中所用标准溶液体积 标准溶液(3．6)体积ml
硝酸盐氮含量 mg
比色皿光程长 mm
0
0
10、30
0.1
0.001
30
0.3
0.003
30
0.5
0.005
30
0.7
0.007
30
1
0.01
10、30
3
0.03
10
5
0.05
10
7
0.07
10
10
0.1
10
6．5．2 校准曲线的绘制
由除零管外的其他校准系列测得的吸光度值减去零管的吸光度值，分别绘制不同比色皿光程长的吸光度对硝酸盐氮含量(mg)的校准曲线。
7 结果的表示
7．1 计算方法
试份中硝酸盐氮的吸光度Ar用式(1)计算：
Ar=As-Ab …………………………………(1)
式中：As--试份溶液(6．4)的吸光度；
Ab--空白试验溶液(6．2)的吸光度。
注：对某种特定样品，As和Ab应在同一种光程长的比色皿中测定。
硝酸盐氮含量cNmg／L表示。
7．1．1 未经去除氯离子的试样，按式(2)计算：
cN=m／V×1000 ……………………………………(2)
式中：m--硝酸盐氮质量，mg，由Ar值和相应比色皿光程的校准曲线(6．5．2)确定；
V--试份体积，ml；
1000--换算为每升试样计。
7．1．2 经去除氯离子的试样，按式(3)计算：
CN=(m／V)×1000×〔(V1+V2)／V1〕 …………………………………………(3)
式中：V1--供去氯离子的试样取用量，ml；
V2--硫酸银溶液加入量，ml。
7．2 精密度和准确度
7．2．1 经5个实验室的分析方法协作试验结果如下：
7．2．1．1 实验室内
浓度范围为0.2～0.4mg/L的加标地面水，最大总相对标准偏差6.4％，回收率平均值78％。
浓度范围1.8～2.0mg/L的加标地面水，最大总相对标准偏差5.4％，回收率平均值98.6％。
7．2. 1. 2 实验室间
a. 分析含硝酸盐氮1.20mg/L的统一分发标准样，实验室间总相对标准偏差为9.4％，相对误差为-6.7％。
b. 52个实验室测定含硝酸盐氮1．59mg／L的合成水样，相对标准偏差为11.0％，相对误差为8．8％。
还有离子色谱法\离子选择电极法等等
正常成人血清ALP主要来自肝脏，而来自骨组织的ALP一般少于总活性一半。其各自含量与年龄密切相 关，但也受性别的影响。还可能存在少量的小肠型ALP，特别是血型为分泌型B型或O型的人。 现已知人体含4型ALP同工酶，即肠型（IALP）、胎盘型（PALP）、生殖细胞型（GALP）和非特异组织型（TUALP）ALP。其中非特异组织型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。
[临床意义] 肝胆疾病，尤其是阻塞性黄疸患者，该酶活性显著升高。骨骼疾病时血清ALP活性增高。血清ALP活性测定成为鉴别肝胆疾病和诊断骨质增生不可缺少的指标。 [测定原理] 在碱性条件下，碱性磷酸酶将无色磷酸对硝基苯酚水解为黄色对硝基苯酚，在405nm测定对硝基苯酚生成 的速率，这个速率与血清中ALP活性成正比。反应需要Mg2+作为激活剂。 [常用测定方法] 测定ALP活性受到组织来源、底物类型、反应温度，特别是缓冲液种类的影响，目前，国际上生化试剂主要生产厂家，生产的ALP检测试剂盒的主要差异就在于所使用的缓冲液不同。常用的激活型缓冲液不仅起缓冲作用，并可作为磷酸的受体参与反应，因而能增进酶促反应的速率。激活型缓冲液中，二乙醇胺（DEA）的激活作用比2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）的激活作用更强。因此用不同缓冲液测定的ALP活性，其参考值不同。 不少国家，包括我国，多采用AMP或DEA做缓冲液，但这两类物质不易提纯，前者常混有5-氨基-3-吖-2, 2,5-三甲基乙醇，后者易含一乙醇胺，均对ALP有抑制作用。故日本学者建议采用2-乙氨基乙醇缓冲液，而德国学者建议使用甲基葡萄糖胺缓冲液，此类试剂纯度高，不含抑制ALP活性的物质，可不加螯合剂，其pK值高于DEA。
根据所使用的激活型缓冲液不同，目前常用的检测方法主要有四种： 1、 IFCC推荐方法：AMP（2-氨基-2-甲基-1-丙醇）缓冲液 正常参考范围：45~130 U/L，37℃ 2、 JSCC推荐方法：EAE（2-乙氨基乙醇）缓冲液 正常参考范围：115~359 U/L，37℃ 3、 GSCC推荐方法：DEA（二乙醇胺）缓冲液 正常参考范围：80~260 U/L，37℃ 4、 DSKG推荐方法（新GSCC方法）：MEG（N-甲基-D-葡萄糖胺）缓冲液 正常参考范围：45~130 U/L，37℃
二、甘油三酯（TG）常用测定酶法中，为什么采用推荐方法—去除游离甘油的二步酶法优于一步酶法？
血脂异常是动脉粥样硬化性疾病的重要危险因素之一，甘油三酯（TG）、血清总胆固醇（TC）、高密度与低密度脂蛋白胆固醇（HDL-C与LDL-C）是四项基本指标。临床上制定四项血脂的合适水平或异常水平的划分标准、治疗指针及治疗目标，必须在血脂测定结果准确性的基础上进行。由于TG的脂肪酸组成复杂，而且血中还有游离甘油与不完全甘油酯，使TG测定的结果的准确性显得尤其重要。TG测定的常规方法，国内普遍采用甘油磷酸氧化酶法，也是检验学会的推荐方法，但目前因为商品试剂大都未用二步酶法去除游离甘油，这对多数住院病人是不合适的。 [测定原理] 标本中的游离甘油经第1试剂中甘油激酶（GK）作用，最后生成过氧化氢，再经过氧化氢酶分解成H2O，使游离甘油的影响被消除；另外，维生素C由维生素C氧化酶去除。第2试剂中TG等经脂蛋白脂酶（LPL）等作用所产生的过氧化氢，在POD的作用下，使4-氨基安替比林（4-AA）与HDAOS发生氧化缩合，生成紫色的醌色素，通过测定该色素的增加，求出TG浓度。
以SYSMEX公司生产的二步酶法TG测定试剂盒为例：
第一步反应： 抗坏血酸 + 1/2O2 AOD 脱氢抗坏血酸 + H2O 游离甘油 + ATP GK 3-磷酸甘油 + ADP 3-磷酸甘油 + O2 GPO 磷酸二羟丙酮 + H2O2 H2O2 过氧化氢酶 H2O + 1/2O2 第二步反应： 甘油三酯 + 3H2O LPL 甘油 + 3分子游离脂肪酸 甘油 + ATP GK 3-磷酸甘油 + ADP 3-磷酸甘油 + O2 GPO磷酸二羟丙酮 + H2O2 2H2O2 + 4-AA + HDAOS POD 醌类染料 [参考值 ] 高甘油三酯血症： 1.69mmol/L以上（150mg/dL以上）。
[说明] 现阶段允许一步酶法与两步酶法并存，要求逐步过渡到统一采用两步法。在未统一方法前，实验室报告TG测定结果时应注明“去FG值”或“未去FG值”，这将有助于临床医生对结果的正确判断。 正常人血清FG浓度平均约0.11mmol/L(10mg/dl)，在糖尿病、服用含甘油的药物、静脉营养、情绪应急、血标本污染时，FG将明显增高，以致影响对TG水平的判断。 国外学者建议：临床实验室应备有可以去FG空白的试剂，供必要时采用；糖尿病及特殊门诊以及TG>2.3mmol/L者，最好作FG空白校正。
1、《工业水处理》
《工业水处理》（月刊）创刊于1981年，由中海油天津化工研究设计院主办、国家工业水处理工程技术研究中心协办，为全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊（中国科技核心期刊）、中国期刊方阵双效期刊。每月20日出版。
2、《给水排水》
《给水排水》创刊于1964年，是中国建筑科学类中文核心期刊，中国科技论文统计源期刊。由中华人民共和国住房与城乡建设部主管，中国建筑设计研究院、中国土木工程学会、亚太建设科技信息研究院（建设部科技信息研究所）主办。
扩展资料
《工业水处理》主要报道工业废水、工艺用水、循环冷却水、锅炉水、市政污水、海水淡化等的水处理技术动态、研究报告、专题述评、经验总结、科学管理及行业快讯等。读者对象主要是从事水处理工作的科研、设计、教学、生产、管理等单位的专业技术人员。
订户遍及石油、石化、煤化、冶金、钢铁、电力、电子、纺织、印染、造纸、制药、机械、食品、饮料酿酒、交通、造船、矿业、环保、海水淡化等系统，自来水公司、污水处理厂、水处理设备工程公司，以及大专院校等。
参考资料来源：百度百科-给水排水杂志社
参考资料来源：工业水处理官网-杂志简介
