食品中总黄酮的测定为什么要用无水乙醇提取然后用百分之五十的乙醇定容

物料通过乙醇提取，然后上浓缩器浓缩。

把浓缩好的药液用水沉淀。实际上，不同的植物提取黄铜，工艺是不同的。举个例子：

以前做实验提取银杏叶总黄酮，用的工艺如下：

银杏叶加乙醇回流提取3次，合并提取液后浓缩。用硅藻土添加后索氏提取器，乙酸乙酯部位反复经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱得到粗品。

1、 熔剂法

热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、

2、微波提取法

微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单[2]。 2.2 超声波提取法

用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。

3、 超临界流体萃取法

超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大 规模的生产。

4、 酶法提取

酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物，黄酮类物质的提取率为91%，提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取，黄酮得率分别是1.43%，0.94% 和0.79%，和传统的方法相比，游离酶法的总黄酮得率提高了81%。

5、双水相提取法

双水相提取技术是瑞典Per Albersson首先发现并研究 的一种技术，双水相萃取法属于液- 液萃取，当物质进入双 水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力的作用，溶 液环境的影响，其在上、下相中的浓度不同，即各成分在两 相间选择性分配，从而达到萃取的目的。由于双水相体系分 相快、使用温度低、容易操作、无污染、提取率高，因此成 为黄酮化合物富集分离的一种有效方法。张春秀等[24]取一 定量的银杏叶浸提液，加到PEG1500/ 磷酸盐体系双水相 系统中，则黄酮类化合物进入上相PEG，从而将黄酮类化合 物分离，提取率可达98.2%。

6、 半仿生提取法

半仿生提取法是将整体药物研究法与分子药物研究法相结合，模拟口服给药后药物经胃肠道转运的环境，为经消化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。这种提取方法的特点是可以提取和保留更多的有效成分，能缩短生产周期、降低成本。

7、膜分离法

膜分离法主要有超滤、微滤、纳滤和反渗透等，其中超滤法是膜分离的代表，它是唯一能用于分子分离的过滤方法，是以多孔性半透膜为分离介质，依靠薄膜两侧压力差作为推动力来分离溶液中不同分子量的物质。由于大多数黄酮类化合物的分子量在1000 以下，而非有效成分如大多数的多糖、蛋白质等分子量多在50000 以上，因而使用超滤能有效去除蛋白质、多肽、大分子色素、淀粉等，达到除菌、除热原、提高药液澄明度以及提高有效成分含量等目的。这种方法操作简便、不需要加热、不损坏黄酮类化合物，提取效果好、超滤装置可反复使用。于涛等[26]研究了银杏叶中黄酮类化合物的提取过程及工艺，使用超滤技术对粗提的产品进行精制，对影响超滤的工艺条件进行了考察，超滤后产品中黄酮质量分数达到33.99%。

8、 热压流体萃取法

热压流体萃取法是一种快速、环保、便宜、有效地萃取生物活性物质的方法。Chaorui Chen等[27]采用热压流体萃取法从巴西蜂胶中提取了7种黄酮类化合物，结果表明，通过热压水萃取的样品中当存在表面活性剂时萃取物的固体含量更高，当使用热压脂溶萃取时，7种黄酮类化合物的含量在脂溶萃取中超过了水溶萃取。KairHartonen等[28]用热压水萃取法从白杨中萃取了黄酮类化合物，考察了萃取时间、温度和压力等因素的影响，并与超声波萃取、高速逆流色谱做了比较，结果表明用热压水萃取法在150℃萃取35min效 果最好。

2.9 高压液相提取法

Ying Zhang等[29]通过高压液相萃取法从鱼腥草中萃取了黄酮类化合物，研究了乙醇浓度、流速、温度和压强等因素的影响，并与热浸法和超声波辅助萃取法进行对比，发现高压液相萃取法提取效果较好，当使用50% 乙醇，溶剂流速为1.8mL/min，温度为70℃，压强为8MPa 时，黄酮类化合物的得率和浓度可以达到3.152% 和23.962%

关于黄酮类化合物的提取方法。

（1）溶剂法

乙醇和甲醇是最常用的黄酮化合物提取溶剂。利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行萃取可达到精制纯化的目的。

（2）碱提酸沉法

酚羟基黄酮碱性水或碱性稀醇（如50%的乙醇）浸出浸出液经酸化黄酮类化合物沉淀析出，或用有机溶剂萃取。

芦丁、橙皮苷、黄芩苷均可用此法提取。

常用的碱性水溶液为稀氢氧化钠溶液和石灰水。

注意：

①碱浓度不宜过高，以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物母核。

②加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成（钅羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。

③当分子中有邻二酚羟基时，应加硼酸保护。

黄酮类化合物的提取，主要是根据被提取物的性质、伴存的杂质以及要用部位等来选择适合的提取溶剂。大多数游离的黄酮类化合物宜用极性较小的溶剂，如用氯仿，乙醚，乙酸乙酯等提取，而对多甲基黄酮，甚至可用苯进行提取。黄酮苷类以及极性较大的游离黄酮，一般可用乙酸乙酯，丙酮等。

具体选择还要看楼主所要提取物质的具体结构和性质！