核酸检测是什么意思?
核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的核酸,来确定是否被新冠病毒感染。因此一旦检测为核酸“阳性”,即可证明患者体内有病毒存在。
新冠病毒感染人体之后,首先会在呼吸道系统中进行繁殖,因此可以通过检测痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判断人体是否感染病毒。所以说,核酸检测阳性可以作为新型冠状病毒感染确诊的金标准。
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核酸检测原理:
所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒,病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其它病原体的标志物。
新型冠状病毒出现后,我国科学家在极短的时间里完成了对新型冠状病毒全基因组序列的解析,并通过与其它物种的基因组序列对比,发现了新型冠状病毒中的特异核酸序列。
参考资料来源:人民健康网-核酸检测究竟是怎么回事
参考资料来源:百度百科-核酸检测法
核酸检测需要去正规的医院或者防疫中心进行检测。
检测步骤:
1、首先,核酸检测盒子,也就是现在用于新冠状病毒检测的方式,这个盒子中主要检测“法宝”采用咽拭子。用咽拭子擦拭咽后壁及双侧咽扁桃体处各5-10次,且不断旋转拭子。
2、医务人员进行留样,将拭子头浸入细胞保存液中,折断尾部后立即旋紧管盖子。
3、保存,将样本管放入密封袋中及时送检,而送检过程中需要严格的运输环境,2-8摄氏度保存。
4、操作核酸提取(反应管理),将灭活病毒后的样本进行核酸提取,用于后续检测。
5、荧光PCR核酸检测,也就是.上机器检测,将提取物进行荧光PCR扩曾反应,需要70--80分钟。
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1、新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了,只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。
2、通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分,可以尽早发现感染者,甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。
3、感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除,不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。
参考资料:人民健康网-核酸检测究竟是怎么回事
参考资料:中国经济网-如何进行新冠病毒核酸检测?带你揭秘全过程
对于新型冠状病毒的核酸检测,首先根据试剂盒说明书”样本要求“部分进行样本采集,常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。
获得患者样本后,需尽快进行检测,如无法立即检测需要转运的样本,应按照说明书的要求进行低温封装,并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后,对样本进行核酸提取,核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。
病毒RNA需要首先逆转录为cDNA,再进行扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪,通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小,可以判断患者样本中是否含有新型冠状病毒。
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核酸检测原理
所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒,病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其它病原体的标志物。新型冠状病毒出现后,我国科学家在极短的时间里完成了对新型冠状病毒全基因组序列的解析。
并通过与其它物种的基因组序列对比,发现了新型冠状病毒中的特异核酸序列。临床实验检测过程中,如果能在患者样本中检测到新型冠状病毒的特异核酸序列,应提示该患者可能被新型冠状病毒感染
参考资料来源:百度百科——核算检测法
2、所有病毒除朊病毒外都含有核酸,核算包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒,病毒中异性RNA序列是区分该病毒和其他病原体的标志物。所以核酸检测是确诊新冠肺炎的“金标准”,只有通过核酸检测为阳性才能确诊。
核酸检测是指通过咽拭纸的方法,采取咽部的分泌物,检测是否有新冠病毒的感染。如果患者多次核酸检测为阴性时,可除外新冠病毒的感染,如果患者多次核酸检测为阳性时,可确诊为新冠病毒的感染。
在一定理化因素作用下,核酸双螺旋等空间结构中碱基之间的氢键断裂,变成单链的现象称为变性。引起核酸变性的常见理化因素有加热、酸、碱、尿素和甲酰胺等。在变性过程中,核酸的空间构象被破坏,理化性质发生改变。由于双螺旋分子内部的碱基暴露,其A260值会大大增加。A260值的增加与解链程度有一定比例关系,这种关系称为增色效应。如果缓慢加热DNA溶液,并在不同温度测定其A260值,可得到“S”形DNA熔化曲线。从DNA熔化曲线可见DNA变性作用是在一个相当窄的温度内完成的。
核酸检测采用咽拭子检测,有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。
口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦,刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情,张口发出“啊——”的声音就可以了,检测过程并没有创伤风险,是非常安全的检测。
检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉,不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔,从下鼻道深入抵达鼻咽后壁,然后捻转棉签取样。棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。
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核酸检测相关知识:
核酸检测是检测病毒的方法,它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测,可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染,以及推测是否具有传染性。
季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份,从而判断被检测者是否属于感染者。
新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了,只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分,可以尽早发现感染者,甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。
感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除,不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。
参考资料来源:人民网-核酸检测究竟是怎么回事
1、清洁双手:在抗原检测之前,应当对双手进行严格消毒、清洁。然后检查试剂盒的包装是否完好、破损。
2、样本采集:清理鼻腔,头稍向后仰。手持鼻拭子的尾部从一侧鼻孔进入,慢慢向鼻腔深入,在鼻腔内部至少旋转4圈,然后在另一侧鼻腔重复这一操作。
3、样本提取:取样后立即将鼻拭子放入取样管内,用力旋转拭子使其充分与处理液混合。
4、检测:折断处理瓶的盖子,取出检测卡,垂直倒置处理瓶,滴三滴液体到样品孔中,等待十五分钟。检测卡C处显色而T处未显为阴性,若C处和T处均显色为阳性,T刻度线一条杠代表检测无效。
5、废物处理:要将检测物品装入医疗密封袋内,按医疗废物处置。
1、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存,RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。
2、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中,在规定的温度和时间下进行逆转录反应。
3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板。在扩增仪中,按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。
4、扩增产物定性分析;扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法,与分子量标准比较,判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。
5、结果判定和完成报告单:每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照,只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立,可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。
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检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR。因PCR反应模板仅为DNA,因此在进行PCR反应前,应将新型冠状病毒核酸逆转录为DNA。在PCR反应体系中,
包含一对特异性引物以及一个Taqman探针,该探针为一段特异性寡核苷酸序列,两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;
如反应体系存在靶序列,PCR反应时探针与模板结合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解,报告基团与淬灭基团分离,发出荧光。
每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数与病毒核酸浓度有关,病毒核酸浓度越高,Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。
参考资料: 百度百科——核酸检测法