卵清蛋白（OVA）和BSA表面氨基数目是多少
卵清蛋白（OVA）和BSA表面氨基数目是多少
我曾经做过小分子和蛋白质的偶联，有一些自己总结的综述，你可以参考以下：
人工抗原合成常用的载体
载体表面应首先应具有化学活性基团，这些基团可以直接与抗生素(antibiotic)或农药分子偶联，这是化学偶联制备抗原的前提；其次，载体应具备一定的容量，可以偶联足够的分子；载体还应该是惰性的，不应干扰偶联分子的功能；而且载体应具有足够的稳定性，且应该是廉价易得的。
常用来作为合成人工抗原的载体蛋白质有牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。这些蛋白质分子中的α和ε-氨基（等电点8和10）、苯酚基、巯基（等电点为9）、咪唑基（等电点为7）、羧基（等电点2～4，大部分来自天冬氨酸或谷氨酸的β-和γ-羧基）等在等电点pH条件下，一部分成为质子，另一部分未质子化的亲核基团则具有反应活性，可与半抗原中的对应基团结合。当然，这些基团的反应性也取决于蛋白质各种氨基酸残基的微环境。牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HAS）分子中含有大量的赖氨酸，故有许多自由氨基存在，且在不同pH和离子强度下能保持较大的溶解度。此外，这些蛋白质在用有机溶剂（如吡啶、二甲基甲酰胺）溶解时，其活性基团仍呈可溶状态，因此，这两种蛋白质是最常用的载体蛋白质[30]。近年来，有研究报道用人工合成的多聚肽(最常用的是多聚赖氨酸)作载体，表现出能增加半抗原的免疫原性，从而使产生征对半抗原的特异性抗体可能性增加，被广泛应用[31，32]。
1.2.2人工抗原合成方法
小分子半抗原与载体蛋白偶联效果会受到偶联物的浓度及其相对比例、偶联剂的有效浓度及其相对量、缓冲液成分及其纯度和离子强度、pH以及半抗原的稳定性、可溶性和理化特性等因素的影响。通常是在条件温和的水溶液中将半抗原与载体蛋白共价结合，不宜在高温、低温、强碱、强酸条件下进行。一般是由半抗原上的活性基团决定偶联合成的方法，常用的方法如下：
1.2.2.1分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶联
1）混合酸酐法（mixed anhydride method）：也称氯甲酸异丁酯法。半抗原上的羧基在正丁胺存在下与氯甲酸异丁酯反应，形成混合酸酐的中间体，再与蛋白质的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物
2）碳二亚胺法（CDI）：碳二亚胺(EDC)使羟基和氨基间脱水形成酰胺键，半抗原上的羧基先与EDC反应生成一个中间物，然后再与蛋白质上的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物（见图1.5）。EDC被称作零长度交联剂之一，因为它作为酰胺键的形成介质并没有形成手臂分子。
此连接方法十分简便，只需将载体蛋白质和抗原按一定比例混合在适当的溶液中，然后加入水溶性碳化二亚胺，搅拌1～2h，置室温24h，再经透析即可。如果半抗原分子中不含羧基，可通过某些化学反应引入羧基。在引入羧基后，也可用上述方法进行偶联。
1.2.2.2含有氨基或可还原硝基半抗原的偶联
1）戊二醛法：双功能试剂戊二醛的两个醛基分别与半抗原和蛋白质上的氨基形成schiff键(-N=C<，在半抗原和蛋白质间引入一个5碳桥。这一反应条件温和，可在4～40℃及pH6.0～8.0内进行，操作亦简便，因此应用广泛。戊二醛受到光照、温度和碱性的影响，可能发生自我聚合，减弱其交联作用，因此最好使用新鲜的戊二醛。
2）重氮化法：用于活性基团是芳香胺基的半抗原，芳香胺基与NaNO2和HCl反应得到一个重氮盐，它可直接接到蛋白质酪氨酸羧基的邻位上，形成一个偶氮化合物（见图1.6）。
1.3.2.3含羟基半抗原的偶联
1）琥珀酸酐法：半抗原的羟基与琥珀酸酐在无水吡啶中反应得到一个琥珀酸半酯(带有羧基的中间体)，再经碳二亚胺法或混合酸酐法与蛋白质氨基结合，在半抗原与蛋白质载体间插入一个琥珀酰基（图1.7）。
2）羰基二咪唑法：N，N’-羰基二咪唑是引入羰基的高活性试剂，在肽合成中首次表明了是形成极好的酰胺键试剂[33]。含羟基的分子同羰基二咪唑反应，形成中间体咪唑基甲酸酯，它能和N-亲核试剂反应，得到N-烷基化的甲酸酯键，通常蛋白质通过N-端(α-氨基)和赖氨酸侧链的(ε-氨基)和分子形成不带电的类似尿烷的衍生物，具有极好的化学稳定性。
1.2.3影响人工抗原质量的因素
人工抗原免疫原性的好坏，与多种因素有关。对不同的物质，影响免疫原性的因素并不完全相同，常常需要在得到抗体后对免疫偶合物的具体合成方法进行重新调整。但总的说来，影响人工抗原质量的因素主要有：
1) 偶联比
偶联比过去人们认为，联接到蛋白质分子上的半抗原数目要尽可能多。但实验证明，过多的半抗原并不能得到预期的结果，这是因为载体上覆盖的半抗原分子过多时，可能不利于载体与淋巴细胞表面结合，不能使载体引起免疫反应。实际上，每个载体分子连接上一个半抗原分子就足以产生抗体。有人认为，以BSA为例，连接到蛋白分子上的半抗原数以5～20为宜。而荣康泰等用不同的载体制备对氧磷的人工抗原时，却发现各种载体的分子量不论是否接近，最佳结合比都不尽相同，并建议为了取得最佳免疫效果，应逐个确定各种载体的最佳结合比。
2) 偶联桥
有研究者认为，一定长度的手臂的介入，有助于半抗原暴露在外面，利于所产生抗体专一性的增强，如吴颂如等［34］发现，通常愈远离载体蛋白的基团，其特征反应愈明显。但也有一些研究者发现，手臂结构对免疫检测经常有不利的影响，有时产生的抗体对手臂结构亲和力特别强，对待测小分子亲和力却很弱，因此造成对特异性抗体检测的干扰。Sionf等［35］认为可以采取两种方法来避免因偶联桥而造成的不足：一是半抗原上相同位点结合蛋白质，但免疫原和包被抗原用不同的偶联桥；二是免疫原和包被抗原用相同的偶联桥，但与不同半抗原位点结合。Frieia［36］研究农药酶免疫分析多年，他认为最好的偶联桥是3～6个直链的碳原子结构。
3）半抗原的分子空间结构
用来作半抗原的分子最好有分支结构，直链分子难以产生抗体。此外，有些抗生素(antibiotic)或农药有多个可供蛋白质偶联的位点，但据研究报道，不同位点与蛋白质结合制备的人工抗原产生的抗体效价及亲合力都有差别，这可能是因为不同位点结合导致半抗原呈现的空间结构不一样的原因。如合成灭草松和吡虫啉人工抗原时，当利用半抗原不同位点与载体结合时产生的抗体效价和亲合力明显不一样[37、38]。因此，如果一个分子内有多个不同的结合位点时，最好尽可能利用不同位点都合成出人工抗原，然后，通过比较，筛选出最好的人工抗原用于制备抗体作为检测。
1.2.4人工抗原的质量评定
1.2.4.1浓度测定
人工抗原的绝对含量常以蛋白质的相对浓度表示（如每ml抗原溶液中含有蛋白质多少mg）。因此测定人工抗原的浓度与测定人工抗原溶液中蛋白质的相对含量（mg/ml）是一致的（这里也反映出人工抗原越纯，检出的浓度值愈准确）。常用的方法有紫外吸收法、Folin-酚法、双缩脲法、微量凯式定量法、染色结合法和荧光法等。这里就不一一介绍了。
1.2.4.2纯度鉴定和结构分析
鉴定农药人工抗原最常用的方法是紫外光谱扫描法，如果人工抗原的紫外吸收图谱不同于原载体蛋白和半抗原的紫外扫描图谱，则可初步证明人工抗原合成成功。
半抗原与载体分子反应后是否真正的连接在一起，如果发生连接，它们的连接基团又在哪里。这些问题可以通过红外吸收光谱图或质谱分析得到解决。
利用吸附与分配层析和电泳技术可鉴定人工抗原的偶联的纯度。前者适应范围广，但鉴别的灵敏度较低。后者是用于大分子大分子酶标记物和某些半抗原偶联物的纯度鉴定。如果电泳图谱上只出现一条电泳带，则表明人工抗原达到电泳纯，否则说明人工抗原中含有有利的未偶联的物质。
看到你这个问题我也以为两者有不同，查了不少的资料，结果都说是一样的：
清蛋白又称白蛋白。是一类不被50％饱和度的硫酸铵溶液沉淀的球状蛋白质。存在于动物组织、体液和某些植物的种子中。其分子量较低，溶于水，易结晶。在中性溶液中加热即沉淀或凝固。其重要代表是血清蛋白、乳清蛋白、卵清蛋白、麦清蛋白、豆清蛋白及有毒的蓖麻蛋白。人血清（或血浆）清蛋白占血清蛋白质的55～63％，是血清中少数不含糖的蛋白质之一；分子量67500道尔顿，有584个氨基酸残基和高净电荷（等电点4.9）；与水、Ca2+、Na+、K+、脂肪酸及胆红素都有较好的结合能力；
牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一种球蛋白，包含607个氨基酸残基，分子量为66.446kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用。
英文同义词：
nhsaBSA-CAC-BSAALBUMIN, PIGalbumenpowderSERUM ALBUMINACETYLATED BSABSA ACETYLATEDBovine albuminBSA, METHYLATED
中文同义词：
蛋白粉；牛白蛋白；卵蛋白粉；血清蛋白；血清白蛋白；牛血蛋白质；复合氨基酸；牛血清蛋白；牛血清白蛋白；血清白蛋白（牛） CAS号： 9048-46-8 英文名称： Bovine albumin 中文名称： 牛血清白蛋白 CBNumber: CB5107573 分子式： N/A 英文别名： Bovine serum albumin
氢氧化铝其实是免疫佐剂，目的是增强机体免疫应答，使动物产生的抗体效价更高。
卵清蛋白对于所注射的动物来说属于异己物质，自然会针对其产生免疫反应，而且是体液免疫，即产生抗体并结合之。具体是什么情况因为我没做过这个试验，不能尽述。
yí dǎo sù kàng tǐ
2 英文参考InsAb
insulin antibody
3 概述胰岛素抗抗体的出现有两种情况，一种出现于接受外源性胰岛素治疗的病人，主要和胰岛素制剂的纯度有关系，一种出现于从未接受胰岛素治疗的病人，称为胰岛素自身抗体。
4 胰岛素抗体的医学检查4.1 检查名称胰岛素抗体
4.2 分类
激素类测定 >胰腺内分泌功能检查
4.3 胰岛素抗体的测定原理4.3.1 （1）酶联免疫吸附法以聚苯乙烯反应板为载体，用胰岛素卵清蛋白交联物为包被抗原，加待测血清后，如待测血清中有抗胰岛素抗抗抗体（antiinsulin antibody，AIAb），则与包被抗原结合，再与随后加入的酶标记葡萄球菌A蛋白反应，在酶底物作用下显色，显色强度可反映抗胰岛素抗抗抗体水平。
4.3.2 （2）免疫酶斑点法用硝酸纤维素膜为载体，胰岛素卵清蛋白交联物为包被抗原，如待测血清中有抗胰岛素抗抗抗体，则与包被抗原结合，再与HRPSPA反应，在酶底物作用下显色。如检样中无抗胰岛素抗抗抗体，则包被抗原处不呈色。
4.4 试剂4.4.1 （1）酶联免疫吸附法①胰岛素卵清蛋白交联物：取普通猪胰岛素注射液（40u/ml＝1.6mg/ml，市售商品）5ml加3ml pH8.6，0.06mol/L巴比妥缓冲液（内含卵清蛋白160mg），混匀后，滴加0.25%戊二醛0.24ml，室温搅拌1h。分装，－20℃保存，用作包被抗原。
②豚鼠抗胰岛毒抗体：按上法制备胰岛素牛血清白蛋白交联物，加等量福氏完全佐剂充分乳化，交替注射豚鼠（体重400～500g/只）的背部，两后肢肌肉内等处，每只豚鼠每次注射胰岛素量约20u，10天注射1次，免疫4次后，抽心血观察血清效价，一般免疫5～6次后用不加佐剂的胰岛素一片血清白蛋白作加强注射3天后，抽血，分离血清，－20℃保存备用，作为阳性对照。
③辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白（HRPSPA），最适稀释度预试选定。
④包被液、稀释液、洗涤液、底物溶液同一般酶联免疫吸附法。
4.4.2 （2）免疫酶斑点法①胰岛素卵清蛋白交联物、豚鼠抗胰岛素抗抗抗体制备参见酶联免疫吸附法。
②HRPSPA，最适稀释度预试选定。
③包被液、稀释液、洗涤液同一般酶联免疫吸附法。
④底物溶液：3，3＇二氨基联苯胺四盐酸盐（DAB）5mg，用0.2ml二甲基亚砜溶解后，补加pH7.4，0.01mol/L PBS10ml，30%H2O2 0.05ml，使用前新鲜配制。
4.5 操作方法4.5.1 （1）酶联免疫吸附法将胰岛素卵清蛋白用包被液稀释至20μg/ml，包被聚苯乙烯反应板微孔，每孔100μl，4℃过夜。洗涤液洗3次，每次3min，用pH7.4，0.01mol/L PBS（内含15%小牛血清）封闭，43℃ 1h。同上法洗后加待测血清（1∶100）或阴性、阳性对照，每孔100μl，43℃ 1h（37℃ 2h）。同上法洗后加最适稀释度的HRPSPA，每孔100μl，45℃ 1h（37℃ 2h）。同上法洗后加底物（OPDH2O2）溶液，每孔100μl，37℃ 10min显色。用2mol/L H4SO4终止反应。
酶联免疫检测仪检测492nm波长吸光度值。
4.5.2 （2）免疫酶斑点法将NC膜划成5mm×5mm的小方格，浸于pH7.4，0.01mol/L PBS中30min，滤纸吸干。取2μl胰岛素卵清蛋白交联物点样于小方格中央，室温自然干燥。用pH7.4，0.01mol/L PBS（内含卵清蛋白10.0g/L）封闭，45℃ 1h，滤纸吸干。加待测血清2μl于抗原包被处，45℃ 30min后，用pH7.4，0.01mol/L PBS洗3次，每次3min，滤纸吸干。将膜置于最适浓度HRPSPA中，45℃ 30min，同上法洗后滤纸吸干。浸于新配底物中5～10min，显色后流水冲洗，终止反应。
4.6 正常值阴性。
4.7 化验结果临床意义胰岛素抗抗体对糖尿病和低血糖的诊断、鉴别诊断及治疗具有非常重要的意义。
4.7.1 （1）1型糖尿病的早期发现正常人群如在血中发现胰岛素抗抗体则很容易罹患1型糖尿病。胰岛素自身抗体可能系β细胞破坏所产生，因此胰岛素自身抗体的检测可作为自身免疫性β细胞损伤的标志，可用于早期发现和预防1型糖尿病。
4.7.2 （2）诊断胰岛素抵抗，指导糖尿病治疗血液中存在胰岛素抗抗体是产生胰岛素抵抗的重要原因，糖尿病患者在使用胰岛素治疗的过程中可因胰岛素抗抗体的产生而出现胰岛素抵抗，表现为胰岛素用量逐日增加但血糖控制并不理想。此时应检测胰岛素抗抗体，若出现阳性或滴度增高可作为胰岛素抵抗的客观依据。换用单组分胰岛素、高纯度胰岛素及停用胰岛素、口服降糖药或应用糖皮质激素皆有助于降低胰岛素抗抗体的浓度，改善胰岛素抵抗。
4.7.3 （3）胰岛素自身免疫综合征自Hirata等于1970年首次报告后，国内外报告逐年增多。胰岛素自身免疫综合征（insulin autoimmune syndrome，IAS）的特征为严重低血糖、高胰岛素血症、胰岛素抗抗体（IAA）阳性及从未接受外源性胰岛素治疗。IAS低血糖发作呈自限性，82%不经治疗1年内自行缓解，但发作时多较严重且诊断困难。除对症治疗外，应用肾上腺皮质激素可能有一定价值。遗传易感性在IAS发生中可能起重要作用。
4.8 附注胰岛素依赖性糖尿病抗胰岛细胞抗抗胰岛细胞抗体阳性率为20%～40%，活动期阳性率可达60%～70%；非胰岛素依赖性糖尿病阳性率仅为6.2%。因此，检测抗胰岛细胞抗体可区分2型糖尿病。
4.9 相关疾病
半抗原与载体蛋白的耦联物称之为人工抗原。载体不仅是简单地增加半抗原的分子质量，更重要的是利用其强的免疫原性诱导机体产生免疫应答，对半抗原发生载体效应的作用。蛋白质结构越复杂，免疫原性越好。常用的载体蛋白有牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）、兔血清白蛋白（RSA）、人血清白蛋白（HSA）、人γ球蛋白（γ－GA）、人血纤维蛋白、钥孔血蓝蛋白（KLH）、甲状腺球蛋白（thyroglobulin）、猪血清白蛋白（PSA）等。
半抗原含有的活性基团不同，半抗原与载体蛋白耦联的方法也不同。通常，含羧基的半抗原采用碳二亚胺（EDC）法、混合酸酐（MA）法和Woodward试剂法；含羟基的半抗原采用琥珀酸酐法；含羟基的半抗原采用戊二醛法、一氯醋酸钠法和偶氮苯甲酸法；含酚基的半抗原采用重氮化法；含氨基的半抗原采用Mannich反应、重氮化法和丙烯酸法、二异氰酸酯法、卤代硝基苯法、亚胺酸酯法；含酮基的半抗原采用氨基氧乙酸法；含巯基的半抗原采用SAMSA（S－乙酰基巯基琥珀酸酐）法等。耦联后的人工抗原往往需要进一步纯化。透析是常用的方法，还可采用凝胶柱层析的方法分离。半抗原与载体蛋白的分子结合比对抗体特异性和效价有一定的关系。一般认为人工免疫抗原结合比高，可以增加免疫刺激的强度和特异性。
目前，绝大多数农药人工抗原是通过将单一农药半抗原耦联到载体蛋白分子上的方法获得的。所获得的抗原称之为单一决定簇人工抗原。王姝婷等通过对人工抗原的设计，将克百威、三唑磷、毒死蜱和甲基对硫磷半抗原耦联到一个载体蛋白分子上，制备出了多抗原决定簇的人工抗原，并获得了能同时识别上述4种农药的“宽谱特异性”（broadspecificity）多克隆抗体。这为农药人工抗原的制备提供了一种新的途径和策略。
