怎么从人的血液中提取白细胞

提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核，要在甘油或其他保护剂中进行SDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离CATB是一种抽提液，破坏细胞膜的~具体忘了~DNA不溶于异丙醇，异丙醇可以析出DNA，产生白色絮状沉淀，用枪头挑出就可以了以下是一些具体方法，希望有用基因组DNA提取方法 制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀。4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀，50℃水浴3h,5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀，冰浴，10min.。7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。2500rpm,离心10min。弃上清。8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。 外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法： 试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。4、2500rpm离心10min，弃上清。5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。6、3000rpm离心10min，弃上清。7、倒置离心管，去掉残液。8、得白细胞，－80?C冻存。试验要求：血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA： 试验试剂：Ligsisbuffer：133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。提取缓冲液（Extractionbuffer）：10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml，高压灭菌试验步骤： 1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。以4000rpm，离心5min。弃上清液。2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。以6000rpm，离心5min。3、彻底弃去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解细胞），混匀置于37℃，水溶1h。4、加入8μl的蛋白酶K，颠混，37℃过夜（或55℃，3h，但是37℃效果要好些）。5、每管加入450μl饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min，以5500rpm，离心15min。6、取上清，每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。7、取上清，每管加入500μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。8、取上清，每管加50μl的3M的NaAC＋，适量无水乙醇（预冷）至满，摇匀放入-20℃保存2h以上。9、以12000rpm，离心20min。去上清，加入70％乙醇500μl，以12000rpm，离心5min，去上清，50－60℃干燥。10、加入50μl灭菌去离子水，转弹，混匀。NaI提取法提取外周血白细胞基因组： 实验步骤： 1、取外周抗凝血（全血）100ul于eppendorf管中，12000rpm离心12min。2、弃上清，加双蒸水200ul溶解，摇匀20s。3、混匀后加6MNaI溶液200ul，摇匀20s。4、加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul，边加边摇，摇匀20s，12000rpm离心12min。5、取上层液350ul，加入另一新eppendorf管中，加0.6倍体积异丙醇，摇匀20s，室温放置15min，静置后的反应体系15000rpm离心12min，使沉淀紧贴eppendorf管壁。6、弃异丙醇，加70％乙醇1ml（不振动），以15000rpm离心12min。7、弃乙醇，敞开eppendorf管盖，烘干（37℃恒温箱）后，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。常用的外周血白细胞基因提取方法：试验原理： 苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。试验步骤：1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500rpm离心15min,倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用0.7mlDNA提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。2、将上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀，液体变粘稠。50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。3、反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至水相与酚相混匀成乳状液。5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿：异戊醇（24：1），上下转动混匀，5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复一次。4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA，转入另一1.5ml离心管中，加70%乙醇0.2ml，以5000rpm离心5min。洗涤DNA，弃上清，去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇，但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动，DNA完全溶解通常需12-24h。制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。真核细胞DNA的制备 一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。 根据材料来源不同，采取不同的材料处理方法，而后的DNA提取方法大体类似，但都应考虑以下两个原则： 1、防止和抑制DNase对DNA的降解。2、尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。试剂准备：1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8)1mMEDTA(pH8.0)。2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4)200mMNaCl5mMKCl。3、裂解缓冲液：250mMSDS使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。4、20%SDS5、2mg/ml蛋白酶K6、Tris饱和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿7、无水乙醇、75%乙醇试验步骤：材料处理： 1、新鲜或冰冻组织处理： 1)取组织块0.3-0.5cm3,剪碎，加TE0.5ml，转移到匀浆器中匀浆。2)将匀浆液转移到1.5ml离心管中。3)加20%SDS25ml，蛋白酶K(2mg/ml)25ml，混匀。4)60°C水浴1-3hr。2、培养细胞处理：1)将培养细胞悬浮后，用TBS洗涤一次。2)离心4000g×5min，去除上清液。3)加10倍体积的裂解缓冲液。4)50-55°C水浴1-2hr。DNA提取：1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀3min。2、离心5000g×10min，取上层水相到另一1.5ml离心管中。3、加等体积饱和酚，混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。4、加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重复此步骤数次。5、加等体积氯仿，轻轻混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。6、加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀。7、待絮状物出现后，离心5000g×5min，弃上清液。8、沉淀用75%乙醇洗涤，离心5000g×3min，弃上清液。9、室温下挥发乙醇，待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜。植物组织中DNA的提取试验原理： 脱氧核糖核酸（deoxribonucleicacid，DNA）是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细胞核中，盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA，即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。DNA不溶于0.14mol/L的NaCl溶液中，而RNA则能溶于0.14mol/L的NaCl溶液之中，利用这一性质就可以将二者从破碎细胞浆液中分开。制备过程中，细胞破碎的同时就有Dnase释放到提取液中，使DNA因被降解而影响得率，在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸盐和EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离，再加入阴离子去垢剂0.15％的SDS，经过2h搅拌，或用氯仿－异醇除去蛋白，通过离心使蛋白质沉淀而除去，得到的是含有核酸的上清液。然后用95％的预冷乙醇即可把DNA从除去蛋白质的提取液中沉淀出来。植物DNA的SDS提取法：试验试剂： 1、研磨缓冲液：称取59.63gNaCl，13.25g柠檬酸三钠，37.2gEDTA－Na分别溶解后合并为一，用0.2mol/L的NaOH调至pH7.0，并定容至1000ml。2、10×SSC溶液：称取87.66gNaCl和44.12g柠檬酸三钠，分别溶解，一起定容至1000ml。3、1×SSC溶液：用10×SSC溶液稀释10倍。4、0.1×SSC溶液：用1×SSC溶液稀释10倍。5、Rnase溶液：用0.14mol/LNaCl溶液配制成25mg/ml的酶液，用1mol/LHCl，pH至5.0，使用前经80℃水浴处理5min（以破坏可能存在的Dnase）。6、氯仿－异戊醇：按24ml氯仿和1ml异戊醇混合。7、5mol/L高氯酸钠溶液：称取NaClO4．H2O70.23g，先加入少量蒸馏水溶解再容至100ml。8、SDS（十二烷基硫酸钠）化学试剂的重结晶：将SDS放入无水酒精中达到饱和为止，然后在70～80℃的水浴中溶解，趁热过滤，冷却之后即将滤液放入冰箱，待结晶出现再置室温下凉干待用。9、1mol／LHCl。10、0.2mol/LNaOH。11、二苯胺乙醛试剂：1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中，添加1.5ml浓硫酸，装入棕色瓶，贮存暗处，使用时加0.1ml乙醛液〔浓乙醛：H2O＝1：50（V／V）〕。12、1.0mol/L高酸溶液（HClO4）。13、0.05mol/LNaOH。14、DNA标准液：取标准DNA25mg溶于少量0.05mol.L-1NaOH中，再用0.05mol/LNaOH定容至25ml，后用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中，加5.0ml1mol/LHClO4，混合冷却后用0.5mol/LHClO4定容至刻度，则得100μg/ml的标准溶液。实验步骤： 1、称取植物幼嫩组织10g剪碎置研钵中，加10ml预冷研磨缓冲液并加入0.1g左右的SDS，置冰浴上研磨成糊状。2、将匀浆无损转入25ml刻度试管中加入等体积的氯仿－异戊醇混合液，加上塞子，剧烈振荡30s，转入离心管，静置片刻以脱除组织蛋白质。以4000rpm离心5min。3、离心形成三层，小心地吸取上层清液至刻度试管中，弃去中间层的细胞碎片、变性蛋白质及下层的氯仿。4、将试管置72℃水浴中保温3min（不超过4min），以灭活组织的DNA酶，然后迅速取出试管置冰水浴中冷却到室温，加5mol/L高氯酸钠溶液〔提取液：高氯酸钠溶液＝4：1（V／V）〕，使溶液中高氯酸钠的最终浓度为1mol/L。5、再次加入等体积氯仿－异戊醇混合液至大试管中，振荡1min，静置后在室温下离心（4000rpm）5min，取上清液置小烧杯中。6、用滴管吸95％的预冷乙醇，慢慢地加入烧杯中上清液的表面上，直至乙醇的体积为上清液的两倍，用玻璃棒轻轻搅动。此时核酸迅速以纤维状沉淀缠绕在玻璃棒上。7、然后加入0.5ml左右的10×SSC，使最终浓度为1×SSC。8、重复第6步骤和第7步骤即得到DNA的粗制品。9、加入已处理的Rnase溶液，使其最后的作用浓度为50～70μg/ml，并在37℃水浴中保温30min，以除去RNA。10、加入等体积的氯仿－异戊醇混合液，在三角瓶中振荡1min，再除去残留蛋白质及所加Rnase蛋白，室温下以4000rpm离心5min，收集上层水溶液。11、再按6、7步骤处理即可得到纯化的DNA液。植物DNA的CTAB提取法：试验步骤： 1、称取新鲜叶片2-3g，剪碎放入研钵中，在液氮中研磨成粉末。2、将粉末转移到加有7ml经预热的15×CTAB提取缓冲液15ml离心管中，迅速混匀后置于65℃水浴中，温育30min。3、取出离心管,冷却至室温，加入氯仿/异戊醇(24:1)，充分混匀，室温下2300转离心20min。4、将上清转移至另一新的15ml离心管中，加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀，2300rpm离心20min。5、转移上清至另一新的15ml离心管中，加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液，轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000rpm离心10min，使DNA沉淀于管底。6、加入1.5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。7、待DNA完全溶解后，加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀，挑出DNA，置于15ml离心管中，用70%乙醇清洗30min。8、离心机甩5s，倒出70%乙醇，再用95%乙醇浸泡5min，倒出95%乙醇，在超净工作台上吹干。9、将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。 细菌DNA的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂： 抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl 10MLiCl2MLiCl DEPC-water（抑制RNA酶活性）3MNaAc(pH5.2) 96%乙醇70%乙醇试验步骤： 1、抽提缓冲液65℃预热。2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min。3、加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡，以12,000rpm，离心10min。4、取上清，加氯仿/异戊醇（24：1）振荡，以12,000rpm，离心10min。5、重复再作一次步骤4。6、加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C下沉淀。7、以2,000rpm，离心10min。8、弃上清，以70％乙醇条洗沉淀，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml水中。较为常用的细菌DNA提取方法：实验步骤：1、将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。2、取1.5ml培养物12000rpm离心2min。3、沉淀中加入567ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul10%SDS和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h.4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混匀，再加入80ulCTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min,将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇．真菌DNA提取总结的两种方法：第一种方法： 试验步骤：1、取真菌菌丝0.5g,在液氮中迅速研磨成粉。2、加入4mL提取液，快速振荡混匀。3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）。4、以4℃，1000rpm，离心5min。5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。以4℃，10,000rpm，离心5min。6、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30min。7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。8、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃下处理1h。9、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，离心5min。10、取上清，加入1/10倍体积的3MNaAc,2.5倍体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。11、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。DNA提取液：0.2MTris-HCl（pH7.5），0.5MNaCl，0.01MEDTA，1％SDS，3MNaAc。第二种方法：试验步骤： 1、真菌菌丝0.5-1g,在液氮中迅速研磨成粉。2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次。3、加入1mL5MKAc，冰浴20min。4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）。5、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min。6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。7、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃处理1h。8、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，离心5min。9、取上清，1/10V3MNaAc,2.5V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。10、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。 植物基因组提取(CATB法) 作者：时间：2008-05-13 14:26:27 来源: 生物谷 浏览评论 一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。 十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。 三、实验材料 水稻幼叶 四、主要配方 2% CTAB抽提缓冲溶液: CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌, 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇 （400ul） 氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。 五、实验步骤 1. DNA的提取 （1） 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。 （2）取少量叶片（约1g）置于研钵中，用液氮磨至粉状； （3） 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动； （4） 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌中，磨碎液的高度约占管的三分之二； （5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，40 min后取出； （6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min，使两者混合均匀； （7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 µl的异丙醇加入另一新的灭菌中； （8） 10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物； （9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上； （10）60 sec后，直立离心管，加入720 µl的75%乙醇及80 µl 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中； （11）放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解； （12）10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 µl 75%的乙醇，将DNA再洗 30 min； （13）10000 rpm离心30 sec后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）； （14）加入50 µl 0.5 × TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解； （15）置于-20℃保存、备用。 2. DNA质量检测 琼脂糖电泳检测，原理和方法见实验二。 六、 注意事项 （1）叶片磨得越细越好。 （2）移液器的使用。 （3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。

1、渗透法：以规定浓度的乙醇为溶剂，按“渗透法”操作。在大多数情况下，当收集的渗透液达到酊剂总量的3/4时，应停止渗透，压榨药渣，将液体与渗透液结合，在所需量的基础上加入适量的溶剂，静置一定时间，分离上清液和底液进行过滤。

2、浸没法：以规定浓度的乙醇为溶剂，按“冷浸没法”操作，将浸没液收集放置24小时，过滤，将浸没液中的乙醇按规定量加入过滤器。十滴水等。

3、溶出方法：将处方药直接加入规定浓度的乙醇中溶解至规定量。本方法适用于化学药品和中药有效部位的制备或复方樟脑酊等纯化酊剂的制备。

扩展资料

酒精常被作为化妆品的基础原料加入化妆品中，不过化妆品中添加的酒精都是经过特殊处理的专用酒精。有皮肤学专家认为，酒精是较好的消毒杀菌剂、清洁剂和去油污剂，对于油性肌肤和易生粉刺暗疮的皮肤十分有益，合理地使用酒精有利于皮肤健康。

酒精在化妆品中的作用。杀菌消炎，赋予产品清凉感，溶剂作用，溶解不易溶于其他溶剂的原料，溶解皮肤表面的油脂成分而起到清洁作用；收敛作用，收缩毛孔，让毛孔变小，使皮肤看起来更为细腻。

参考资料来源：百度百科-乙醇提取法

参考资料来源：人民网-酒精在化妆品中有什么作用？

你好，根据你描述的这种情况来看真理出现了一些斑点而这种情况也可以采取一些方法进行祛除的不用过度的担心。给你的建议就是,你可以适当的采取激光手术的方法去除也可以用一些养荣祛斑膏也都有一定的作用。

目录1 拼音2 英文参考3 国标编号4 CAS号5 中文名称6 英文名称7 乙醇的别名8 分子式9 外观与性状10 分子量11 蒸汽压12 闪点13 熔点14 沸点15 溶解性16 密度17 稳定性18 危险标记19 主要用途20 健康危害21 毒理学资料及环境行为22 乙醇中毒 22.1 毒理作用22.2 临床表现22.3 实验室检查22.4 诊断22.5 治疗22.6 预后22.7 预防 23 现场应急监测方法24 实验室监测方法25 环境标准26 泄漏应急处理27 防护措施28 急救措施29 乙醇药典标准 29.1 品名 29.1.1 中文名29.1.2 汉语拼音29.1.3 英文名 29.2 分子式与分子量29.3 性状 29.3.1 相对密度 29.4 鉴别29.5 检查 29.5.1 酸堿度29.5.2 溶液的澄清度与颜色29.5.3 吸光度29.5.4 挥发性杂质 29.5.4.1 色谱条件与系统适用性试验29.5.4.2 测定法 29.5.5 不挥发物 29.6 类别29.7 贮藏29.8 版本 30 乙醇说明书 30.1 乙醇的别名30.2 外文名30.3 适应症 31 参考资料附：* 乙醇相关药品说明书其它版本 1 拼音

yǐ chún

2 英文参考

ethanol [21世纪英汉汉英双向词典]

grain alcohol [朗道汉英字典]

3 国标编号

32061

4 CAS号

64175

5 中文名称

乙醇

6 英文名称

ethyl alcohol；ethanol

7 乙醇的别名

酒精

8 分子式

C2H6O；CH3CH2OH

9 外观与性状

无色液体，有酒香

10 分子量

46.07

11 蒸汽压

5.33kPa/19℃

12 闪点

12℃

13 熔点

114.1℃

14 沸点

78.3℃

15 溶解性

与水混溶，可混溶于醚、氯仿、甘油等多数有机溶剂

16 密度

相对密度（水1）0.79；相对密度（空气1）1.59

17 稳定性

稳定

18 危险标记

7（易燃液体）

19 主要用途

用于制酒工业、有机合成、消毒以用作溶剂

20 健康危害

侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。

健康危害：本品为中枢神经系统抑制剂。首先引起兴奋，随后抑制。

急性中毒：急性中毒多发生于口服。一般可分为兴奋、催眠、麻醉、窒息四阶段。患者进入第三或第四阶段，出现意识丧失、瞳孔扩大、呼吸不规律、休克、心力循环衰竭及呼吸停止。

慢性影响：在生产中长期接触高浓度本品可引起鼻、眼、粘膜 *** 症状，以及头痛、头晕、疲乏、易激动、震颤、恶心等。长期酗酒可引起多发性神经病、慢性胃炎、脂肪肝、肝硬化、心肌损害及器质性精神病等。皮肤长期接触可引起干燥、脱屑、皲裂和皮炎。

21 毒理学资料及环境行为

毒性：属微毒类。

急性毒性：LD507060mg/kg（兔经口）；7340mg/kg（兔经皮）；LC5037620mg/m3，10小时（大鼠吸入）；人吸入4.3mg/L×50分钟，头面部发热，四肢发凉，头痛；人吸入2.6mg/L×39分钟，头痛，无后作用。

*** 性：家兔经眼：500mg，重度 *** 。家兔经皮开放性 *** 试验：15mg/24小时，轻度 *** 。

亚急性和慢性毒性：大鼠经口10.2g/（kg·天），12周，体重下降，脂肪肝。

致突变性：微生物致突变：鼠伤寒沙门氏菌阴性。显性致死试验：小鼠经口1～1.5g/（kg·天）,2周,阳性。

生殖毒性：大鼠腹腔最低中毒浓度（TDL0）：7.5g/kg（孕9天），致畸阳性。

致癌性：小鼠经口最低中毒剂量（TDL0）：340mg/kg（57周，间断），致癌阳性。

危险特性：易燃，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物。遇明火、高热能引起燃烧爆炸。与氧化剂接触发生化学反应或引起燃烧。在火场中，受热的容器有爆炸危险。其蒸气比空气重，能在较低处扩散到相当远的地方，遇明火会引著回燃。

燃烧（分解）产物：一氧化碳、二氧化碳。

22 乙醇中毒

乙醇（酒精）分子式为C2H5OH是一种无色有特殊芳香气味，易燃易挥发的液体，亦与水和大多数有机溶剂混溶，广泛用于工业、医药和生活，是酒的主要成分。可由消化道、呼吸道和皮肤吸收。通常口服乙醇80%以上由上消化道迅速吸收，空腹饮酒则吸收更快，90%以上于饮酒后1.5h内吸收入血液循环，绝大部分在肝脏经过一系列酶的作用被氧化成乙酰辅酶A、二氧化碳、水，同时产生热量，仅小部分由肺和肾脏排出。乙醇氧化代谢较快，故毒性不具有蓄积性。不同个体对乙醇的耐受量有较大差异。长期饮酒者体内可诱导产生肝微粒体酶， 对乙醇的耐受性增强。急性中毒多由一次性过量饮酒引起，俗称醉酒。其他含有乙醇的日用品等也可因误服而引起急性中毒。长期酗酒可引起慢性酒精中毒。人中毒量个体差异很大，成人一般为75～80ml；致死量小儿为6～30ml，成人为250～500ml。[1]

22.1 毒理作用

酒精是脂溶性的物质，可迅速透过大脑中枢神经细胞膜，作用于细胞膜上的酶，使大脑皮质功能受抑制，表现为先兴奋后抑制，欣快兴奋是乙醇对大脑皮质高级中枢抑制从而解除了对边缘系统的抑制所致。当乙醇摄入量增大时，其中枢神经系统抑制作用增强，首先作用于大脑皮质，继而影响皮质下中枢，可引起延髓血管运动中枢和呼吸中枢麻痹。呼吸中枢麻痹是重症致死的主要原因。外周血管扩张、中枢神经系统抑制、体温调节紊乱，以及由于意识状态下降均导致患者体温下降。此外，还可影响肝内糖的代谢，使丙酮酸转化成乳酸增多，而糖异生减少而致低血糖。[1]

22.2 临床表现

急性乙醇中毒主要引起中枢神经系统先兴奋后抑制的临床表现。一般可分为两期[2] ：

兴奋期：呈兴奋状态、欣 *** 、悲喜不定、判断力障碍、语无伦次、颜面潮红、呕吐、步态不稳、活动不协调等，甚至精神错乱、躁狂。

兴奋期后渐人嗜睡状态，甚至昏迷。尿便失禁、体温下降、血压下降、心率减慢。皮肤湿冷、面色苍白、口唇发绀、瞳孔扩大或正常，呼吸缓慢而有鼾音，常可因吸入呕吐物引起吸人性肺炎，甚至因呼吸麻痹而死亡。

小儿中毒后很快进入昏睡中，可出现低血糖性惊厥，亦可出现高热、休克、急性肺水肿、肺炎、中毒性脑病、颅内压增高等表现。

并发症：成人乙醇重度中毒后可并发中毒性肺水肿、脑血管意外、频发室早、房颤等多种心律失常及肝功能损害。大量饮酒后还可出现急性乙醇中毒性肌病，肌痛、肌无力、肌肉肿胀、横纹肌溶解而导致急性肾衰。重度酒精中毒可并发脑水肿，此时颅内压增高，患者头痛、呕吐、意识障碍加深，尤其是眼底视 *** 水肿，为脑水肿的重要依据。严重的脑水肿能并发脑疝，使病情更加严重，而危及患者的生命。

慢性中毒：长期酗酒者，可有营养障碍、慢性胃炎、胃溃疡、肝硬化、心肌损害、多发神经病、Wernicker脑病等。

22.3 实验室检查

[3]

1.血清、呼出气、尿液乙醇浓度高，非酗酒者乙醇浓度大于32.6mmol/L就可昏迷。血乙醇浓度>86.8mmol/L，或昏迷超过12h者预后不良。

2.可出现低血糖、低血钾、低血镁、低血钙、轻度代谢性酸中毒、血清渗透压升高、肝功能异常、血胆固醇增高、血白细胞计数增高、核左移、血肌酸激酶增高及尿肌红蛋白阳性等。

3.心电图出现各种心律失常，STT改变。

22.4 诊断

乙醇中毒的诊断要点为[3] ：

1.中毒史：有一次服用过量乙醇或饮酒史，小儿有因发热酒精擦浴史等。患者的呼吸，呕吐物有强烈乙醇味。

2.中毒表现：中枢神经系统兴奋、共济失调或昏睡等上述中毒症状，重度昏迷者呈昏迷状态；并排除药物、化学性气体及其他原因所致的昏睡、昏迷。

3：实验室检查：测定可疑患者的呕出物或血中乙醇浓度有助于诊断。

4.有酸中毒时须与低血压等引起的代谢性酸中毒、糖尿病酮症酸中毒、其他醇类中毒所致乳酸性酸中毒等鉴别。昏迷患者要排除其他原因引起的昏迷。

22.5 治疗

乙醇中毒的治疗要点为[4] ：

一般酒醉可不必治疗。轻度中毒只需卧床休息，注意保暖，喝些浓茶和咖啡以醒酒。绿豆汤、梨、西瓜、荸荠生吃，亦有较好的解酒作用。口服大剂量乙醇者在30min内可催吐或洗胃，用水或1：2000～1：5000高锰酸钾溶液洗胃。洗胃液不可过多，2000～4000ml内即可，吸引器负压要小。洗胃过程中，出现频繁呕吐，可停止洗胃。可服硫酸钠20g导泻（忌用硫酸镁）。

1.对症支持治疗

保持气道通畅，防止误吸，保暖、纠正低体温状态，纠正酸中毒，保护重要脏器功能。

（1）对躁动不安的患者必要时加以约束，镇静剂的应用应该慎重，必要时可用安定5～10mg肌肉注射。忌用巴比妥类镇静剂及吗啡，以免抑制呼吸，而副醛、氯丙嗪和非那根均与酒精有协同作用，应慎用。如果患者呕吐次数较多，或出现干呕或呕吐胆汁，应及早应用镇吐剂，如胃复安10mg肌肉注射，以防止出现急性胃黏膜病变。未出现呕吐，禁止应用镇吐剂。

（2）呼吸抑制、严重昏迷者，可用可拉明、洛贝林，并吸入氧气。必要时配合人工呼吸行机械通气。呼吸衰竭以呼气末正压（PEEP）治疗为宜。PEEP不宜超过0.98kPa（lOcmH2O），以免增加心脏循环负担或发生纵隔气肿、皮下气肿或气胸等并发症。

（3）脑水肿者应限制入水量，首先应用20%甘露醇125～150ml快速静脉滴注，6～8h一次，因其对肾脏有一定的损害，特别是老年患者可与速尿注射液交替使用，也可以应用β七叶皂苷钠或甘油氯化钠静脉滴注。头部冰袋冷敷降低头部温度，有降低耗氧量保护脑细胞的作用。

（4）低血压、休克者，给予扩容，应用血管活性药物，用阿拉明、多巴胺、麻黄堿等。

（5）纠正酸中毒。

（6）对有感染的患者，合理使用抗生素。

（7）有条件应监测中心静脉压及肺动脉楔压，以了解患者有无血容量不足、肺水肿，便于及时对症治疗。

（8）有出血倾向者给予维生素K新鲜血浆。

2.药物治疗

（1）纳洛酮：近来应用纳洛酮疗法较多，纳洛酮对昏迷者有一定促醒作用，重度中毒患者应用后苏醒时间缩短，死亡率下降。纳洛酮0.4～0.8mg（小儿0.O1mg/kg）静脉注射，必要时每15～30min重复一次，直至患者清醒，呼吸平稳。重度中毒患者可将0.8～1.2mg纳洛酮加入10%葡萄糖液500ml中静脉滴注维持，同时每半小时静脉注射一次，剂量0.4mg。心功能障碍和高血压患者慎用。或哌甲酯10～20mg肌肉注射或静脉注射，l～3/d。乙胺硫脲1g加入10%葡萄糖液500ml缓慢静脉滴注，1/d，脑水肿急性期忌用。中药醒脑静（安宫牛黄注射液）2～4ml肌肉注射或静脉注射，1～2/d；或安宫牛黄丸鼻饲，2/d，每次1丸。其他如清开灵、生脉注射液亦有一定疗效。

（2）10%葡萄糖溶液500ml中加入普通胰岛素8～12U静滴；维生素B1、B6、烟酰胺各100mg肌肉注射，可加速乙醇在体内的氧化。根据病情可6～8h重复给药一次。还可静脉滴注5%～10%葡萄糖液加速尿40mg，有促进药物排出的作用。

（3）呼吸抑制呈表浅缓慢呼吸者，可给予苯甲酸钠咖啡因0.25～0.5g静脉或肌肉注射，或肌肉注射戊四氮0.1～0.2g，或利他林10～20mg，尼可刹米0.375g，每2h交替使用。

（4）果糖：加速乙醇浓度下降，5～10g/d。

（5）血液透析治疗可有效地清除体内乙醇，适用于深度昏迷者。

（6）对酒精中毒有脱水者，可静脉补液，维持电解质、酸堿平衡。给予大剂量维生素B1、维生素B6、维生素C、葡醛酸内酯，以及硫普罗宁保护肝脏。避免用吗啡以免抑制呼吸。出现上消化道血者，可口服泰胃美800mg或静脉注射法莫替丁20mg。

3.慢性中毒者应彻底戒酒，治疗神经损害。因常有低镁、低钾、低钙、低磷血症及各种维生素缺乏应及时予以补充。

22.6 预后

因饮酒过量所致中毒，常在5～6h内恢复。成人一次摄入5～6g/kg，儿童摄入3g/kg，同时血中浓度>4g/L，则易于发生死亡。如伴有误吸或有其他基础疾病者，死亡率会有所上升。[5]

22.7 预防

[5]

1.避免过量饮酒是预防的关键。

2.服用药酒要掌握用量，用酒精擦浴时应避免用量过多、浓度过大。

3.有心、肺、肝、肾疾病及上消化道溃疡病者，应禁止饮酒。

23 现场应急监测方法

气体检测管法；便携式气相色谱法

气体速测管（北京劳保所产品）

24 实验室监测方法

气相色谱法《空气和废气监测分析方法》国家环保局编

气相色谱法《固体废弃物试验与分析评价手册》中国环境监测总站等译

重铬酸钾法《化工企业空气中有害物质测定方法》，化学工业出版社

25 环境标准

前苏联 车间空气中有害物质的最高容许浓度 1000mg/m3 前苏联（1977） 大气质量标准 5.0mg/m3 嗅觉阈浓度 50ppm

26 泄漏应急处理

迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿消防防护服。不要直接接触泄漏物。尽可能切断泄漏源，防止进入下水道、排洪沟等限制性空间。小量泄漏：用砂土或其它不燃材料吸附或吸收。也可以用大量水冲洗，洗液稀释后放入废水系统。大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容；用泡沫覆盖，降低蒸气灾害。用防爆泵转移至槽车或专用收集器内。回收或运至废物处理场所处置。

27 防护措施

呼吸系统防护：一般不需要特殊防护，高浓度接触时可佩戴滤式防毒面罩（半面罩）。

眼睛防护：一般不需特殊防护。

身体防护：穿防静电工作服。

手防护：戴一般作业防护手套。

其它：工作现场严禁吸烟。

28 急救措施

皮肤接触：脱去被污染的衣着，用流动清水冲洗。

眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。

吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。就医。

食入：饮足量温水，催吐，就医。

灭火方法：尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。灭火剂：抗溶性泡沫、干粉、二氧化碳、砂土。

29 乙醇药典标准29.1 品名29.1.1 中文名

乙醇

29.1.2 汉语拼音

Yichun

29.1.3 英文名

Ethanol

29.2 分子式与分子量

C2H6O  46.07

29.3 性状

本品为无色澄清液体；微有特臭，味灼烈；易挥发，易燃烧，燃烧时显淡蓝色火焰；加热至约78℃即沸腾。

本品与水、甘油、三氯甲烷或乙醚能任意混溶。

29.3.1 相对密度

本品的相对密度（2010年版药典二部附录Ⅵ A）不大于0.8129，相当于含C2H6O不少于95.0%（ml/ml）。

29.4 鉴别

（1）取本品1ml，加水5ml与氢氧化钠试液1ml后，缓缓滴加碘试液2ml，即发生碘仿的臭气，并生成黄色沉淀。

（2）本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致（附录Ⅳ C）。

29.5 检查29.5.1 酸堿度

取本品20ml，加水20ml，摇匀，滴加酚酞指示液2滴，溶液应为无色；再加0.01mol/L氢氧化钠溶液1.0ml，溶液应显粉红色。

29.5.2 溶液的澄清度与颜色

本品应澄清无色。取本品适量，与同体积的水混合后，溶液应澄清；在10℃放置30分钟，溶液仍应澄清。

29.5.3 吸光度

取本品，以水为空白，照紫外－可见分光光度法（2010年版药典二部附录Ⅳ A）测定吸光度，在240nm的波长处不得过0.08250～260nm的波长范围内不得过0.06；270～340nm的波长范围内不得过0.02。

29.5.4 挥发性杂质

照气相色谱法测定（2010年版药典二部附录Ⅴ E）。

29.5.4.1 色谱条件与系统适用性试验

以6%氰丙基苯基94%二甲基聚硅氧烷为固定液；起始温度40℃，维持12分钟，以每分钟10℃的速率升温至240℃，维持10分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为280℃。对照溶液（b）中乙醛峰与甲醇峰之间的分离度应符合要求。

29.5.4.2 测定法

精密量取无水甲醇100μl，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（a）；精密量取无水甲醇50μl，乙醛50μl，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，精密量取100μl，置10ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（b）；精密量取乙缩醛150μl，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，精密量取100μl，置10ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（c）；精密量取苯100μl，置100ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，精密量取100μl，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（d）；取供试品作为供试品溶液（a）；精密量取4甲基2戊醇150μl，置500ml量瓶中，加供试品稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（b）。精密量取对照溶液（a）、（b）、（c）、（d）和供试品溶液（a）、（b）各1μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液（a）如出现杂质峰，甲醇峰面积不得大于对照溶液（a）主峰面积的0.5倍（0.02%）；含乙醛和乙缩醛的总量按公式（1）计算，总量不得过0.001%（以乙醛计）；含苯按公式（2）计算，不得过0.0002%；供试品溶液（b）中其他各杂质峰面积的总和不得大于4甲基2戊醇的峰面积（0.03%，以4甲基2戊醇计）。

乙醛和乙缩醛的总含量%[（0.001%×AE）/（ATAE）]+[（0.003%×CE）/（CTCE）]    公式（1）

式中 AE为供试品溶液（a）中乙醛的峰面积；

AT为对照溶液（b）中乙醛的峰面积；

CE为供试品溶液（a）中乙缩醛的峰面积；

CT为对照溶液（c）中乙缩醛的峰面积；

苯含量%（0.0002%BE）/（BTBE）×100%                                     公式（2）

式中 BE为供试品溶液中苯的峰面积；

BT为对照溶液中苯的峰面积。[6]

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29.5.5 不挥发物

取本品40ml，置105℃恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥2小时，遗留残渣不得过1mg。

29.6 类别

消毒防腐药、溶剂。

29.7 贮藏

遮光，密封保存。

29.8 版本

《中华人民共和国药典》2010年版

30 乙醇说明书30.1 乙醇的别名

醇酒精 ,乙醇

30.2 外文名

Alcohol

30.3 适应症