六种苯酚类化合物的高效液相色谱法测定
方法提要
在酸性条件下，用GDX-502固相萃取柱吸附水中酚类化合物，乙腈解析柱中有机酚，高效液相色谱-紫外检测器检测。
方法适用于饮用水、地下水及湖库水中苯酚、对硝基酚、间甲酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚、五氯酚6种酚类的测定。对水中6种酚通常可检测到10～50ng/L水平。
仪器
高效液相色谱仪带紫外检测器，恒流梯度泵系统。
色谱柱WatersSymmetryC8，4.6mm×250mm，粒径5μm或性质相似的色谱柱。
GDX-502固相萃取小柱将使用过的SPE小柱填充物去掉并清洗干净，湿法加入约为0.5g纯化溶胀后的GDX-502树脂，打开活塞放出甲醇，直到液面刚好达到树脂床顶部。用10mL乙腈淋洗树脂，再用10mL水淋洗树脂，每次淋洗保持液面不低于树脂床。
针头过滤器孔径0.45μm，直径13mm，有机系。
固相萃取装置12管固相萃取装置。
真空泵。
采样瓶1L具磨口玻璃塞的棕色玻璃细口瓶。
氮吹仪。
微量注射器10μL、50μL、100μL、1000μL等气密性微量注射器。
K.D浓缩瓶25mL，带1mL定量管，须标定容积后使用。
试剂
空白试剂水去离子水蒸馏再经Millipore处理。
高效液相色谱流动相为水(含1%乙酸)和乙腈的混合溶液。
碳酸氢钠溶液c(NaHCO3)=0.05mol/L。
硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)。
乙腈，甲醇HPLC级。
丙酮(C3H6O)农残级。
乙酸。
盐酸。
标准储备溶液苯酚、对硝基酚、间甲酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚、五氯酚六种的混标，购自国家标准物质研究中心。保存在-18℃冰箱中。
GDX-502树脂使用前用丙酮浸泡数日，数次更换新溶剂到丙酮无色。再用乙腈回流提取6h以上。纯化后的树脂密封保存在甲醇中备用。
替代物标准2-氟苯酚和2，4，6-三溴苯酚混标。
样品的采集与保存
1)水样采集。必须采集在玻璃容器中，在采样点采样及盖好瓶塞时，样品瓶要完全注满，不留空气。若水中有残余氯存在，要在每升水中加入80mg硫代硫酸钠除氯。
2)水样保存。避光、4℃下中保存。采样后7d内完成提取。40d内完成分析。
分析步骤
1)水样预处理。用孔径0.45μm的玻璃纤维滤膜，去除水中机械杂质。根据水中酚类化合物含量，取水样50～1000mL，加入2-氟苯酚和2，4，6-三溴苯酚等替代物标准，用6mol/LHCl调至pH2。水样以10mL/min的流速流经已活化的GDX-502固相萃取柱。当水样完全流过柱子后，用0.05mol/L碳酸氢钠溶液10mL淋洗柱子。用N2或空气将柱中水分充分抽干。用4mL每次1mL乙腈淋洗小柱，前两次淋洗液需在柱中平衡10min，后两次平衡2min，合并淋洗液，最终用乙腈定容为1.00mL。0.45μm有机相滤膜过滤，HPLC分析。
2)校准曲线。
3)高效液相色谱分析条件。
紫外检测器:双波长检测，检测波长280nm和290nm。柱温35℃。
流动相组成:A泵，99%水+(1+99)乙酸B泵，100%乙腈。
流动相流量:1mL/min，恒流。梯度洗脱，洗脱程序，见表82.41。
表82.41 洗脱程序
4)色谱图的考察。见图82.13。
定性与定量分析
1)定性分析。以样品保留时间和标样保留时间相比较来定性。根据标准色谱图各组分的保留时间，确定出被测样品中目标物数目和名称。对有检出的样品需用其他方法确证，如GC-MS等技术。
图82.13 六种标准酚类样品在不同检测波长下的液相色谱图(2μg/mL)
2) 定量分析。每个工作日必须测定一种或几种浓度的标准溶液来检验校准曲线或响应因子。如若某一化合物的响应值与预期值间的偏差大于 10%，则必须用新的标准对该化合物绘制新的校准曲线或求出新的响应因子。使用紫外检测器时，6 种酚类的最大吸收波长不同，为提高分析灵敏度，苯酚、间甲酚采用 280nm 波长定量对硝基酚、2，4 -二氯酚、2，4，6-三氯酚、五氯酚采用 290nm 波长定量。计算公式参见式 (82.16) 。
方法性能指标
1) 精密度、检出限和线性范围。按实验方法，配制浓度为 0.5μg / mL 酚类混合标准样品，按选定的工作条件分析，重复检测 7 次，计算方法的精密度。检出限的测量是以相对于基线噪音 3 倍时组分峰高所对应的浓度。各组分的精密度、检测下限和线性范围见表82.42。
表82.42 方法精密度、检出限及线性范围
2) 准确度。分别将 50μL 浓度为 2μg / mL 的混合标准样品加入 0.25L 和 1.0L 试剂空白水中，用 502 树脂固相萃取柱吸附富集，洗脱后定容 1.0mL，HPLC 测定，计算加标回收率。结果见表82.43。
表82.43 方法的准确度
3) 基体加标回收率。从北京不同地区取护城河水过滤后，分别取 1L 水加入表82.44中不同量的标准样品，及未加入标准样品的 1L 水，经水样预处理，在 HPLC 上检测，得到加标回收率。
表82.44 地表污水加标回收率
注: 2-氟苯酚、2，4，6-三溴苯酚为替代物，回收率均符合控制限要求。
通常，氯仿与异戊基发酵的比例为24：1。 苯酚，氯仿和异戊醇的比例也可以按25：24：1的比例使用。
提取DNA时，为了均匀混合，必须将容器摇动几次，并且在混合溶液中容易产生气泡，并且气泡会阻止相互作用。 异戊醇的添加降低了分子的表面张力，因此减少了萃取过程中泡沫的产生。
扩展资料
酚:氯仿:异戊醇试剂是由水饱和酚、氯仿和异戊醇按125:24:1 的体积比混合而成的，主要用于RNA的提取等试验。苯酚使蛋白质变性，同时抑制了 RNase 的降解作用。
氯仿抽提加速有机相与液相分层，去除核酸溶液中的迹量酚。异戊醇减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。使用酚：氯仿：异戊醇抽提离心后的上层为含 RNA 的水相、中间为变性蛋白与 DNA，下层为有机溶剂相。静置后产品有分层现象，使用时将产品摇匀后用移液器吸取即可。
注意事项：酚:氯仿:异戊醇试剂有较强的腐蚀性，应尽量避免皮肤接触或吸入体内。如发现变为红色或棕色，表明已发生氧化，不能继续使用。
参考资料来源：百度百科-苯酚
参考资料来源：百度百科-氯仿
参考资料来源：百度百科-异戊醇
离心萃取机工作原理目前印染废水处理方法主要有混凝沉淀法、吸附法、萃取法、膜分离法、高级氧化法和生化法等。在经过大量数据研究得出，使用萃取法进行印染废水处理效果较好。针对印染废水的处理，天一萃取采用离心萃取机，结合复合式萃取剂进行实验，详细介绍离心萃取机在印染废水处理中的应用。
离心萃取机工作原理萃取过程：
首先将两相溶液按一定比例分别从两个进料管口进入转鼓和壳体之间形成的混合区内，借助转鼓的旋转，通过涡轮.盘和叶轮使两相快速混合和分散，两相溶液得到充分的传质，完成混合传质过程。经过混合的两相液体在涡流盘的作用下进入转鼓，在离心力的作用下，完成两相分离过程。
萃取后的负载有机相需要进行反萃取，以碱液溶液为反萃剂对负载有机相进行反萃，反萃后的再生萃取剂可反复利用多次而不影响萃取效果。
离心萃取机工作原理N,N-二甲基甲酰胺，简称DMF,是一种无色、透明的液体，极性较强，可于水、醚、酮、脂、不饱和烃芳香烃等混溶，有“万有溶剂”之称，被广泛应用于石油化工、有机合成、无机化工、农.药、制.药等领域。DMF可以通过呼吸、皮肤接触损坏人体健康，几次损害眼睛，人体长期接触或吸.入会阻碍血机并造成肝.脏阻碍。在水中会导致生物化学耗氧量和氮含量增加。废水pH值调至0.5左右，萃取后废水COD值降至1000mg/L以下，H酸含量低于0.1%，处理后的废水颜色近无色，可以直接进入下一工段的处理。采用10%的碱液（NaOH溶液）进行反萃，反萃后有机相中H酸残留低于0.5%，可以循环使用。宁夏某化.工厂生产的H酸废水。
离心萃取机工作原理应用举例：含酚废水处理工艺流程设计：萃取阶段：含酚废水进入离心萃取机，同时，萃取剂也按比例进入离心萃取机，经过2-3萃取脱酚后，废水排出排出离心萃取机。反萃阶段：含苯酚萃取剂(负载有机相)进入反萃取机，同时，液碱按比例进入反萃取机对含酚萃取剂进行2-3台反萃取、碱洗，进过碱洗后的萃取剂可循环使用。反萃后产生的酚钠液排出反萃取机进行酚钠回收再利用。
离心萃取机工作原理在福板形成的隔舱区内，混合液很快与转鼓同步回转，在离心力的作用下，比重大的重相液在向上流动过程中逐步远离转鼓中心而靠向转鼓壁比重小的轻相液体逐步远离转鼓壁而靠向中心，澄清后的两相液体终分别通过各自堰板进入收集室并由引管分别引出机外，完成两相分离过程。随着化工行业的不断发展，企业生产过程中产生的废水量也在不断增加。其中焦化厂生产时会产生大量含酚废水，此类废水具有毒性，生化性差，且成分比较复杂，如果直接进行排放，会对环境和人体造成危害，因此针对焦化厂含酚废水处理是目前废水处理的重点之一。目前含酚废水的处理方法主要用生物法、化学法、物理法等，而常用的方法是溶剂萃取法。溶剂萃取法处理含酚废水具有回收率高、溶剂可重复利用、成本低等优点。
1、苯酚类化合物洗脱按流动相A和流动相B之间的体积比的不同分成七个洗脱阶段，亲和力依次从小到大排序对样品中的苯酚进行梯度洗脱。
2、记录色谱图，随后经分析计算得出样品中苯酚的吸收峰面积进行洗脱。
苯酚的浓度为：
0.1/0.1=1（克/升）
答：苯酚的浓度为1克每升。
苯酚常温下微溶于水，易溶于有机溶剂；当温度高于65℃时，能跟水以任意比例互溶。
1、计算：n=m/M , c=n/v , p（密度）=m/v (先计算出5%的苯酚要其质量为多少)
2、称量或量取：固体试剂用托盘天平或电子天平称量，液体试剂用量筒。
3、溶解：应在烧杯中溶解，待冷却后转入容量瓶中。苯酚先放在60℃水浴锅溶解，使其成为液体状态，在用移液管取出需要的克数，定容至需要的容量瓶就可以了。
4、转移：由于容量瓶的颈较细，为了避免液体洒在外面，用玻璃棒引流。
5、洗涤：用少量蒸馏水洗涤2到3次，洗涤液全部转入到容量瓶中。
6、定容：向容量瓶中加入蒸馏水，在距离刻度2到3cm时，改用胶头滴管加之刻度线。
扩展资料：
化学性质
可吸收空气中水分并液化。有特殊臭味，极稀的溶液有甜味。腐蚀性极强。化学反应能力强。与醛、酮反应生成酚醛树脂、双酚A，与醋酐；水杨酸反应生成醋酸苯酯、水杨酸酯。还可进行卤代、加氢、氧化、烷基化、羧基化、酯化、醚化等反应。
苯酚在通常温度下是固体，与钠不能顺利发生反应，如果采用加热熔化苯酚，再加入金属钠的方法进行实验，苯酚易被还原，在加热时苯酚颜色发生变化而影响实验效果。
参考资料：百度百科-苯酚
先计算苯酚含量。
30*50/100=15
再计算0.67比例下的原液量。
设配液重为X，则：
15/（X+15）=0.67%，
X=2223.8095≈2223.81ml。
由于30ml溶液里已有15ml原液，所以，实际所需原液为2223.81-15=2208.81ml。
检测一下：
2208.81+30=2238.81，
15/2238.81=0.0067=0.67%。
正确。
所以，要把30毫升50%的苯酚溶液配制为0.67%的比例，需加原液2208.81ml。
常温下，苯酚在水中有一定的溶解度，但是不太大。65度以上，苯酚可以和水以任意比例混溶。
由于苯酚的熔点不高，形成溶液时熔点又会有所降低。
如果在苯酚钠的水溶液中通入一定量的二氧化碳，苯酚钠会变成苯酚，溶液分成两层：
上层是苯酚的水溶液，溶质是苯酚，溶剂是水。
下层是水的苯酚溶液，溶质是水，溶剂是苯酚。
因此可以用分液的办法将两层液体分离开来。
下层从分液漏斗的下面流出，上层从分液漏斗的上面倒出。
