无水乙醇沉淀蛋白质的原理是什么，无水乙醇可以沉淀糖蛋白么

是为了除去沉淀物之中的水分。由于水提醇沉法沉淀物多为多糖、蛋白质等大分子复合物，具有较强的吸水性。沉淀物单凭烘干无法除去其中的水分，会使沉淀产物含有较多的水分，影响产物性状（是产物呈胶状，而非粉末状固体）以及纯度是产物无法进行精确的定量分析。醇沉后用无水乙醇洗涤，除去一部分水分；再用可溶于水的丙酮洗涤，确保水分除净；最后用无水乙醚洗涤沉淀物，除去残存的乙醇、丙酮和溶于其中的水分。这样就可以得到较纯的多糖或蛋白质了。

乙醇沉淀是利用大部分水溶性物质不溶于乙醇的原理。无水乙醇做洗涤剂除掉其他有机杂质，达到纯化的目的。无水乙醇洗涤的过程也是脱水干燥的过程，所得多糖多呈粉末状，利于后续使用和保存。再有无水乙醇易挥发，干燥过程的损失少。

无水乙醇：又称无水酒精，指浓度大于99％(质量)的乙醇。主要作为溶剂，用于化妆品、制药等工业。是无色澄清液体。有灼烧味。易流动。极易从空气中吸收水分，能与水和氯仿、乙醚等多种有机溶剂以任意比例互溶。

1 热水浸提法

其步骤为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥

2 微波辅助提取法

3超声波辅助法与常规提取法相比,具有提取时间短、产率高、无需加热等优点[17].

4 索氏提取法：（索氏提取器中,石油醚）

5 醇提法：（乙醇）

醇提法方法简单,易于操作,但提取率较低,乙醇使用量大,不宜大规模提取使用.

6 其它方法：

多糖的提取方法还有稀碱液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等.但由于稀酸、稀碱条件下,易使多糖发生糖苷键的断裂,部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少,因而很多试验中避免采用稀碱液浸提法和稀酸液浸提法.

二、多糖的纯化

多糖中杂质除去方法 粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质,必须分别除去.

1 除蛋白质常用的方法有

1) 沙维积法（Sevag法）：

2) 三氟三氯乙烷法

3) 三氯醋酸法

4) 酶解法：在样品溶液中加入蛋白质水解酶,如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶等,使样品中的蛋白质降解.通常将其与Sevag法综合使用除蛋白质效果较好.

5 )盐酸法：取样品浓缩液,用2mol/L盐酸调节其PH至3,放置过夜,在3000r/min条件下离心,弃去沉淀,即脱去蛋白质.

6) 其它方法：可以加入5%ZnSO4溶液和饱和Ba(OH)2溶液,振荡后离心去蛋白.此法除蛋白不够彻底,可结合Sevag法使用.还可在提取液中加入50%的TCA溶液至沉淀完全,在4000r/min的条件下离心10min,收集上清液,即为除蛋白液.

还有人使用4:1的氯仿-乙醇溶液除蛋白,将混合液清摇,再静置,取上清液.此过程需重复多次方可除尽蛋白.

除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验,观察在280mm处是否有吸收,如果无吸收则表明蛋白质已经除尽.

2 除色素

1)活性炭

2)弱碱性树脂:对于植物来源的多糖,可能含有酚型化合物而颜色较深,这类色素大多呈负性离子,不能用活性炭吸收剂脱色,可用弱碱性树脂DEAE纤维素或DuoliteA－7来吸附色素.

3)氧化脱色:若糖和色素时结合的,易被DEAE纤维素吸附,不能被水洗脱,这类色素可进行氧化脱色：以浓氨水或NaOH液调至PH8.0左右,50℃以下滴加H2O2至浅黄色,保温2小时.

4)乙醚和无水乙醇洗涤：依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇洗涤多糖,即可得到较为纯净的多糖.此法较为简单,便于操作,多糖损失也较小.

5）用4:1的氯仿-正丁醇除色素.操作简单,多糖有一定损失.

6）发酵来源的多糖颜色一般较浅,色素含量较少,一般可不除色素.

3 除低聚糖等小分子杂质

1）采用逆向流水透析法.即准备好一桶蒸馏水,用一根导管将水通入透析袋的烧杯底部,另用一根导管将水引出,根据水量控制流速,使水缓慢流动48小时.这样得到的就是多糖的半精品.

2）利用溶液浓度扩散效应,将分子量小的物质如无机盐、低聚糖等从透析袋渗透到袋外的蒸馏水中,不断换水即可保持浓度差,从而除尽小分子杂质.具体的做法是根据多糖溶液的体积截取相应长度的透析袋,用透析夹夹住一端,灌入多糖液,离液面2－3cm处夹紧透析袋,置于一大烧杯中,注入蒸馏水至完全浸没透析袋后,用磁力搅拌器慢速搅拌,每12小时换一次水,重复3－4次.