中国对不可降解塑料几几年开始打压的

影响丙肝治疗的因素主要有以下几点。WX搜索关注云医海外。

一病毒因素：包括病毒载量的高低，对于HCV RNA大于8×105 IU/ml者为高病毒载量；病毒的基因型，基因1型和4型的患者相对难治疗，基因2、3型相对容易治疗。

二药物因素及方案：

①.干扰素与利巴韦林两药联合使用，干扰素的主要作用机制为免疫调控和抗病毒，聚乙二醇干扰素抗病毒效果比普通干扰素明显增加。利巴韦林具有直接抗病毒的疗效，聚乙二醇干扰素与利巴韦林两者联合是目前治疗丙肝的最有效方案，联合治疗比单用长效干扰素具有更高的SVR率以及低复发率，因此，只要患者没有利巴韦林禁忌症，必须联合治疗；

②.治疗剂量要足量，佩乐能1.5ug/kg/w（派罗欣180ug/周），利巴韦林900-1200mg；

③.治疗应当足疗程，基因1型患者标准疗程为48周，基因2/3型的标准疗程为24周。根据RGT原则延长疗程，维持HCV RNA阴性时间44周(即HCV RNA转阴后维持抗病毒治疗44周)可以显著提高患者SVR，降低复发率。研究显示，在治疗16-24周RNA转阴的患者中，标准疗程组只有9%的患者达到SVR，而RGT组有76%的患者达到SVR。在我国，丙肝患者的基因型主要是相对好治疗的1b型和2 、3型，通过规范治疗，多数患者能够达到SVR，并且治疗结束后5年随访不复发，达到临床治愈！但工作中,我们体会到为了达到治愈丙肝，防止复发，在抗病毒过程中，疗程尽量延长数周时间，以使患者真正达到SVR，以免疾病复发重新治疗，而如重新第二个疗程治疗可能较第一次治疗需化更长的时间，重新承受干扰素等药物的不良反应，化费更多钱财，增加更大的心理负担；

④值得注意的是，既往治疗不应答或者复发的患者，再次使用干扰素联合利巴韦林治疗仍有效。研究表明，对于既往干扰素治疗无效或复发的患者，再次使用聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗，如患者第12周RNA转阴，HCV RNA转阴后维持抗病毒治疗44周,仍有56%的患者能够获得SVR,为了达到更高的SVR,须在HCV RNA阴转后维持抗病毒治疗更长疗程。须在HCV RNA转阴后维持抗病毒治疗44周。

三肝脏病变程度因素：

①对于代偿期肝硬化，如不经治疗会发展为失代偿型肝硬化。一旦患者发展成为失代偿性肝硬化，则抗病毒治疗疗效较差，并且存在很大风险，一般难以进行治疗。因此，对于代偿期肝硬化患者，也应该进行抗病毒治疗，延缓其肝硬化的进展，降低肝癌发生率；

②ALT升高者较ALT正常者抗病毒疗效相对较好；

 如脾亢引起的白细胞、血小板降低者，可以脾切除后待血常规正常后再进行抗病毒治疗。在抗病毒治疗过程中，应该严密监测不良事件的发生；

④其他：丙肝合并脂肪肝患者，抗病毒治疗疗效相对较差，在抗病毒治疗同时，患者应当提高依从性，配合治疗脂肪肝。

外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口（图1.8），当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的ＤＮＡ连接酶催化，这两种酶就是大肠杆菌ＤＮＡ连接酶和Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶。实际上在有克隆用途中，Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶都是首选的用酶。这是因为在下述反应条件下，它就能有效地将平端ＤＮＡ片段连接起来。

ＤＮＡ一端与另一端的连接可认为是双分子反应，在标准条件下，其反应速度完全由互相匹配的ＤＮＡ末端的浓度决定。不论末端位于同一ＤＮＡ分子（分子内连接）还是位于不同分子（分子间连接），都是如此。现考虑一种简单的情况，即连接混合物中只含有一种ＤＮＡ，也就是用可产生粘端的单个限制酶切割制备的磷酸化载体ＤＮＡ。在加作用的底物。如果反应中ＤＮＡ浓度低，则配对的两个末端同一ＤＮＡ分子的机会较大（因为ＤＮＡ分子的一个末端找到同一分子的另一末端的概率要高于找到不同ＤＮＡ分子的末端的概率）。这样，在ＤＮＡ浓度低时，质粒ＤＮＡ重新环化将卓有成效。如果连接反应中ＤＮＡ浓度有所增高，则在分子内连接反应发生以前，某一个ＤＮＡ分子的末端碰到另一ＤＮＡ分子末端的可能性也有所增大。因此在ＤＮＡ浓度高时，连接反的初产物将是质粒二聚体和更大一些的寡聚体。Dugaiczyk等(1975同时参见Bethesda Res,Lab.出版的Focus第2卷，第２、３期合刊）从理论上探讨了ＤＮＡ浓度对连接产物性质的影响。简而言之，环化的连接产物与多联体连接产物的比取决于两个参数：j和i。j是ＤＮＡ分子的一个末端在同一分子的另一末端附近的有效浓度，j的数值是根据如下一种假设作出的：沉吟液中的ＤＮＡ呈随机卷曲。这样，j与ＤＮＡ分子的长度成反比（因为ＤＮＡ越长，某一给定分子的两末端的越不可能相互作用），因此j对给定长度的ＤＮＡ分子来说是一个常数，与ＤＮＡ深度无关。j＝[3/(3πlb0)]3/2其中l是ＤＮＡ长度，以cm计，b是随机卷曲的ＤＮＡ区段的长度。b的值以缓冲液的离子强度为转移，而后者可影响ＤＮＡ的刚度。

i是溶液中所有互补末端的深度的测量值，对于具有自身互补粘端的双链dna而言，i=2NoMx10-3末端/ml这里Ｎo是阿佛伽德罗常数，Ｍ是ＤＮＡ的摩尔浓度（单位：mol/L)。理论上，当j=i时，给定ＤＮＡ分子的一个末端与同一分子的另一末端，以及与不同分子的末端相接触的可能性相等。因而在这样的条件下，在反应的初始阶段中，环状分子与多联体分子的生成速率相等。而当j>i时，有利于重新环化；当i>j，则有利于产生多联体。图1.9显示了ＤＮＡ区段的大小与连接反应混合物中j:i之比分别为0.5、1、2和5时所需ＤＮＡ浓度之间关系（Ｄugaiczyk等，1985）。现在考虑如下的连接反应混合物：其中除线状质粒之外，还含有带匹配末端的外源ＤＮＡ片段。对于一个给定的连接混合物而言，产生单体环状重组基因组的效率不仅受反应中末端的绝对浓度影响，而且还受质粒和外源ＤＮＡ末端的相对浓度的影响。当i是j的２－３倍（即末端的绝对浓度足以满足分子间连接的要求，而又不致引起大量寡聚体分子的形成时）外源ＤＮＡ末端浓度的２倍时，有效重组体的产量可达到最大。这些条什下，连接反应终产物的大约40％都是由单体质粒与外源ＤＮＡ所形成的嵌合体。当连接混合物中线性质粒的量恒定（j:i=3）而带匹配末端的外源ＤＮＡ的量递增时，这种嵌合体在连接反应之末的理论产量。

涉及带粘端的线状磷酸化质粒ＤＮＡ的连接反应应包含：

１）足量的载体ＤＮＡ，以满足j:i>1和j:i<3。对一个职pUC18一般大小的质粒，这意味着连接反应中应含有载体ＤＮＡ为20-60μg/ml。

２）末端浓度等于或稍高于载体ＤＮＡ的外源ＤＮＡ，如外源ＤＮＡ浓度比载体低得多，在效连接产物的数量会很低，这样就很难别小部分带重组抽粒的转化菌落。这种情况下，可考虑采用一些步骤来减少带非重组质粒的背景菌落。如用磷酸酶处理线状质粒ＤＮＡ或发迹克隆策略以便通过定向克隆的方法构建重组质粒。

(二）粘端连接

１）用适当的限制酶消化质粒和外源ＤＮＡ。如有必要，可用凝胶电泳分离片段并（或）用碱性磷酸酶处理质粒ＤＮＡ。通过酚：氯仿抽提和乙沉淀来纯化ＤＮＡ，然后用TE(pH7.6)溶液使其浓度为100/ml。

２）按如下所述设立连接反应混合物：

a．将0.1μl载体ＤＮＡ转移到无菌微量离心管中，加等摩尔量的外源ＤＮＡ。

b．加水至7.5μl，于45℃加温５分钟以使重新退炎的粘端解链，将混合物冷却到０℃。

c．加入：10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液 １μl

Ｔ４噬菌体ＮＤＡ连接酶 0.1Weiss单位

５mmol/L ATP 1μl

于16℃温育１－４小时

10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液

200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6)

50mmol/K MgCl2

50mmol/L二硫苏糖醇

500μg/ml牛血清白蛋白（组分Ｖ.Sigma产品）（可用可不用）

该缓训液应分装成小份，贮存于－20℃。

另外，再设立两个对照反应，其中含有（１）只有质粒载体；（２）只有外源ＤＮＡ片段。如果外源ＤＮＡ量不足，每个连接反应可用50-100ng质粒ＤＮＡ，并尽可能多加外源ＤＮＡ，同时保持连接反应体积不超过10μl。可用至少３种不同方法来测定Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶的活性。大多数制造厂商（除New England Biolabs公司外）现在都用Weiss等，１1968)对该酶进行标化。１个Weiss单位是指在37℃下20分钏内催化１mmol32P从焦磷酸根置换到[γ,β-32P]ATP所需酶时，１个Weiss单位相当于0.2个用外切核酸酶耐受试验来定义的单位（Modrich和Lehman,1970)或者60个粘端单位（如Ｎew England Biolabs公司所定义）。因此，0.015Ｗeiss单位的Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶在16℃下30分钟内可使50％的λ噬菌体HindⅢ片段（5μg）得以连接。在本书中，Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶一律用Weiss单位表示。\par 目前提供的Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶均为浓溶液（1-5单位/μl），可用20mmol/L Tris.Cl(pH7.6)、60mmol/L KCl、5mmol/L二硫苏糖醇、500μg/ml牛血清白蛋白、50％甘稀释成100单位/ml的浓度置存。处于这种浓度并在这种缓冲液中的Ｔ４噬体ＤＮＡ连接酶于-20℃保存３个月可保持稳定。

３）每个样品各取１－２μl转化大肠杆菌感受态细胞。

（三）平端ＤＮＡ连接

Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶不同于大肠杆菌ＤＮＡ连接酶，它可以催化平端ＤＮＡ片段的连接（Sgaramella和Khorana,1972Sgaramella和Ehrlich,1978），由于ＤＮＡ很容易成为平端，所以这是一个极为有用的酶学物性。有了这样的物性，才能使任何ＤＮＡ分子彼此相连。然而，相对而言，平端连接是低效反应，它要求以下４个条件：

１）低浓度（0.5mmol/L）的ATP(Ferretti和Sgaranekka,1981）。

２）不存在亚精胺一类的多胺。

３）极高浓度的连接酶（50Weiss单位．ml）。

４）高浓度的平端。

１．凝聚剂

在反应混合物中加入一些可促进大分子群聚作用并可导致ＤＮＡ分子凝聚成集体的物质，如聚乙二醇（Pheiffer和Zimmerman,1983Zimmerman和Pheiffer,1983ZimmermanT Ｈarrison,1985)或氯化六氨全高钴（Rusche和Howard-Flanders,1985）,可以使如何取得适当浓度的平端ＤＮＡ的总是迎刃而解。在连接反应中，这些物质具有两作用：

１）它们可使平端ＤＮＡ的连接速率加大１－３个数量级，因此可使连接反应在酶ＤＮＡ浓度不高的条件下进行。

２）它们可以改变连接产物的分布，分子内连接受到抑制，所形成的连接产物一律是分子间连接的产物。这样，即使在有利于自身环化（j:i=10）的ＤＮＡ浓度下，所有的ＤＮＡ产物也将是线状多聚体。\par 在设立含凝聚剂的连接反应时，下列资料可供参考。

（１）聚乙二醇（PEG8000）

１）用去离子水配制的ＰＥＧ8000贮存液（40％）分装成小份，冰冻保存，但加入连接反应混合物之前应将其融化并使其达到室温。在含15％PEG 8000的连接反应混合物中，对连接反刺激效应最为显著。除PEG 800和Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶以外，其他所有连接混合物的组分应于０℃混合，然后加适当体积的PEG 8000（处于室温），混匀，加酶后于20℃进行温育。

２）连接混合物中含0.5mmol/L ATP和5mmol/L MgCl2时对连接反应的刺激效应最为显著，甚至ATP浓度略有增加或ＭgCl2浓度略有降低，都会严重降低刺激的强度（Pheiffer和Zimmerman,1983）。

３）浓度为15％的PEG 8000可刺激带粘端的ＤＮＡ分子的连接效率提高至原来的10-100倍，反应的主产物是串联的多联体。

４）PEG 8000可刺激短至８个核苷酸的合成寡聚物的平端连接，在这一方面，它与氯化六氨合高钴有所不同。

（２）氯化六氨合高钴

１）氯化六氨合高钴可用水配成10mmol/L贮存液贮存于-20℃，它对连接反应的刺激具有高度的浓度信赖性。当连接反应混合物中盐深度为1.0-1.5μmol/L时，其刺激作用最大。氯化六氨合高钴可使平端连接的效率大约提高到原来的50W部，但只能使端连接的效率提高到原来的５倍（Rusche和Howard-Flanders,1985）。

２）在单价阳离子（30mmol/L KCl）存在下，它对平端连接仍有一定的刺激作用，但此时连接产物的分布有所改变。连接产物不再是清一色的分子间连接产物，相反，环状ＤＮＡ将点尽优势。

３）与ＰＥＧ 8000不同，氯化六氨合高钴不能显著提高合成寡核苷酸的连接速率。

（四）质粒载体中的快速克隆

质粒克隆中最慢的步骤是所需的外源ＤＮＡ片段和相应质粒ＤＮＡ区段的电泳纯化，下面的操作方案[由S.Michaelis(个人通讯）根据Struhl(1985)的方法修订而成]是从纯化的凝胶中回收琼脂糖块，熔化后直接进行质粒和外源ＤＮＡ的连接。这一方法寻平端连接和粘端连接都同样奏效，但需大量的连接酶，而且效率要比标准操作方案约低一个数量级。

１）用适当的限制酶消化外源ＤＮＡ，其量应足以产生约0.2μg的靶片段。反应体积应为20μl或更小。在另一管中，用相应的限制酶消化约0.5μg载体ＤＮＡ，总反应体积为20μl或更小。如载体ＤＮＡ带相同的端，应用磷酸处理如下：用限制酶消化完全后，加2.5μl 100mmol/L Tris.Cl(pH8.3)、10mmol/L ZnCl2,加0.25单位牛小肠碱性磷酸酶，于37℃温育30分钟。

２）通过琼脂糖凝胶电泳分离目标片段。务必用低熔点琼脂糖灌制凝胶，务必用含溴化乙锭（0.5μg/ml）的１xTAE作为电泳缓冲液而不是常规的0.5xTBE来配制凝胶并进行电泳。

３）在长波长紫外照射下检查凝胶，根据目标条带的相对荧光强度估计所含ＤＮＡ的量（见附录Ｅ）。用刀片切出目标条带，尽可能少琼脂糖的体积（通常40-50μl)。将切下凝胶片分别放入作好标记的各个微量离心管中。

４）于70℃加热10-15分钏，使琼脂糖熔化。

５）合并熔化的小份凝胶并放到加温至37℃的中一管中，共终体积应不超过10μl,外源ＤＮＡ与质粒载体的摩尔比应接近２：１。

用另外两个管设立两个对照连反应，一个只含质粒载体，另一个只含外源ＤＮＡ片段。

６）将３个管于37℃温育5-10分钟，然后每管加10μl用冰预次的２xT４噬体ＤＮＡ连接酶混合物，在琼脂糖凝固前，充他混匀各管内容物，于16℃温育12-16小时。

２xT４噬菌体ＤＮＡ连接酶混合物可制备如下：

1mol/L Tris.Cl(pH7.6) 1.0μl

100mmol/L氯化镁 1.0μl

200mmol/L三硫苏糖醇 1.0μl

10mmol/L ATP 1.0μl

水 5.5μl

Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶 １Ｗeiss单位

混匀后放置于冰浴上。

７）连接反应行将结束时，取出贮存于-70的３管各200μl的冻存大肠杆菌感受态细胞

８）于70℃中热10-15分钟重新溶化连接混合物中的琼脂糖。

９）立即从每管连接混全物中取出５μl加到200μl大肠杆菌感受态细胞中，小心摇晃，快速地混匀内容物。从剩下每管连接混合物中分别再取５μl重复以上步骤，将转化混合物在冰浴上放置30分钟。

10）完成转化方案的其余各步 分子克隆化是在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。克隆(clone,clon)一词源于希腊文Klon，原意为树木的枝条。在生物学中其名词含义系指一个细胞或个体以无性繁殖的方式产生一群细胞或一群个体，在不发生突变的情况下，具有完全相同的遗传性状，常称无性繁殖(细胞)系；其动词(clone,cloned,cloning)含义指在生物体外用重组技术将特定基因插入载体分子中，即分子克隆技术。将DNA片段(或基因)与载体DNA分子共价连接，然后引入寄主细胞，再筛选获得重组的克隆，按克隆的目的可分为DNA和cDNA克隆两类。cDNA克隆是以mRNA为原材料，经体外反转录合成互补的DNA(cDNA)，再与载体DNA分子连接引入寄主细胞。每一cDNA反映一种mRNA的结构，cDNA克隆的分布也反映了mRNA的分布。特点是：①有些生物，如RNA病毒没有DNA，只能用cDNA克隆；②cDNA克隆易筛选，因为cDNA库中不包含非结构基因的克隆，而且每一cDNA克隆只含一个mRNA的信息；③cDNA能在细菌中表达。cDNA仅代表某一发育阶段表达出来的遗传信息，只有基因文库才包含一个生物的完整遗传信息。分子克隆化-方法(1)DNA片段的制备：常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA。(2)载体DNA的选择：①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松驰型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段，适用于构建原核生物基因文库，cDNA库和次级克隆。②噬菌体DNA：常用的λ噬菌体的DNA是双链，长约49kb，约含50个基因，其中50%的基因对噬菌体的生长和裂解寄主菌是必需的，分布在噬菌体DNA两端。中间是非必需区，进行改造后组建一系列具有不同特点的载体分子。λ载体系统最适用于构建真核生物基因文库和cDNA库。M13噬菌体是一种独特的载体系统，它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌，但不裂解寄主菌。M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子，象质粒一样自主制复，制备方法同质粒。寄主菌可分泌含单链DNA的M13噬菌体，又能方便地制备单链DNA，用于DNA顺序分析、定点突变和核酸杂交。③拷斯(Cos)质粒：是一类带有噬菌体DNA粘性末端顺序的质粒DNA分子。是噬菌体－质粒混合物。此类载体分子容量大，可携带45kb的外源DNA片段。也能象一般质粒一样携带小片段DNA，直接转化寄主菌。这类载体常被用来构建高等生物基因文库。(3)DNA片段与载体连接：DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一，方法有：①粘性末端连接，DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端，用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端。在连接酶的作用下可恢复原样，有些限制性内切酶虽然识别不同顺序，却能产生相同末端。②平头末端连接，用物理方法制备的DNA往往是平头末端，有些酶也可产生平头末端。平头DNA片段可在某些DNA连接酶作用下连接起来，但连接效率不如粘性末端高；③同聚寡核苷酸末端连接。④人工接头分子连接，在平头DNA片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段，经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端。连接反应需注意载体DNA与DNA片段的比率。以λ或Cos质粒为载体时，形成线性多连体DNA分子，载体与DNA片段的比率高些为佳。以质粒为载体时，形成环状分子，比率常为1∶1。(4)引入寄主细胞：常用两种方法：①转化或转染，方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上，待DNA被吸收后铺在平板培养基上，再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子，通常重组分子的转化效率比非重组DNA低，原因是连接效率不高，有许多DNA分子无转化能力，而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大，转化困难。②转导，病毒类侵染宿主菌的过程称为转导，一般转导的效率比转化高。(5)克隆的选择：①直接筛选：有些载体带有可辨认的遗传标记，能有效地将重组分子与本底区分。例如：有些λ噬菌体携带外源基因后形成的噬菌斑就会从原来的混浊变为清亮；还有些载体分子携带外源基因后，形成的菌落或噬菌斑的颜色有明显变化，如蓝色变为无色；有些λ噬菌体能侵染甲菌而不能侵染乙菌，携带外源DNA片段后便能侵染乙菌，因此乙菌释放的噬菌体均为重组分子。②间接筛选：有引起载体分子带有一个或多个抗药性标记基因，当外源DNA插入到抗药基因区后，基因失活，抗性消失。如一质粒有A和B两个抗药性基因，当外源基因插入到B基因区后，便只抗A药而不抗B药。因此能在A药培养基上正常生长而不能在B药培养上生长的便是重组分子。③核酸杂交：广泛用于筛选含有特异DNA顺序的克隆。方法是将菌落或噬菌斑“印迹”到硝酸纤维膜等支持物上，变性后固定在原位，然后与标记的核酸探针进行杂交。阳性点的位置就是所需要的克隆。④免疫学方法：如果重组克隆能在宿主菌中表达，就可以用特异的蛋白质抗体为探针，进行原位杂交，选择特异的克隆。分子克隆化-重要意义分子克隆技术是70年代才发展起来的，它的出现和应用开辟了分子遗传学研究的新领域，打开了人类了解、识别、分离和改造基因，创造新物种的大门。它的成就对于工业、农牧业和医学产生深远影响，并将为解决世界面临的能源、食品和环保三大危机开拓一条新的出路。在医学方面，利用分子克隆技术已将胰岛素，人、牛和鸡的生长激素、人的干扰素、松驰素、促红细胞生长激素、乙型肝炎病毒抗原和口蹄疫病毒抗原的基因制成工程菌，利用发酵工业进行了大规模生产。还可提高微生物本身所产生的蛋白酶类和抗生素类药物的产量。在基因治疗方面。通过遗传工程看到癌细胞具有逆转为正常细胞的可能性，例如SV40病毒引起的小鼠肿瘤细胞，在温度高时可逆转为正常细胞。为治疗半乳糖血症，用带有大肠杆菌乳糖操纵子的λ噬菌体去感染半乳糖血症患者的离体培养细胞，发现这种细胞的半乳糖苷酶达到了正常水平，并确实能代谢半乳糖。在工业生产方面，以分子克隆技术为主体的基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，四者紧密联系、常综合利用。许多化学试剂如丙烯酸、己二酸、乙二醇、甲醇、环氧乙烷、乌头酸和水杨酸等都可能利用分子克隆技术得到产品。在环境保护方面，人们根据需要进行基因操作，将某种微生物的基因转入另一微生物，创造一些对有害物质降解能力更强的新菌种，以分解工业污水中的有毒物质。在食品工业方面，细菌可为人类生产有价值的蛋白质、氨基酸和糖等。在农业生产方面，植物遗传工程对提高农作物的产量、培育新的农作物品种提供了可能。有许多外源基因导入植物获得成功。

1、2010年 11月7 日 ，河南煤化集团召开了冲刺世界500强动员大会。

2、河南煤化集团召开冲刺世界企业500强动员大会，目的是进一步动员全体干部员工认清形势，坚定信心，抢抓机遇，决战决胜，确保超额完成全年71280 奋斗目标、 安全高效挺进世界企业500强 。

3、省国资委 肖新明主任 参加了河南煤化集团召开的冲刺世界500强动员大会。

4、河南煤化集团召开的冲刺世界500强动员大会，既是确保 超额完成全年各项既定目标 的动员会、部署会，也是号召全体干部员工一鼓作气、勇往直前，坚决安全高效地挺进世界企业500强的鼓劲会、誓师会。

5、河南煤化集团 有支撑，有优势，有决心 挺进世界企业500强。

6、河南煤化集团重组成立近两年来，我们在省委、省政府和省国资委的正确领导下，以 科学发展观 为统领，坚持 “四个重在” ，按照“三具两基一抓手” 的要求，圆满完成了各项工作。

7、回顾重组以来的发展历程，我们牢记 发展 是第一大要务。

8、河南煤化集团重组以来，认真践行 “发展不减速、项目不放缓、企业不裁员、员工不减薪、 安全不放松”的承诺，率先成为我省首家 资产总额 和 营业收入 双双超千亿、利税超百亿企业。

9、河南煤化的营业收入占到了河南省国企总额的 21.87% ，占河南省管工业企业总额的 40.87% ；利润占到了河南省国企总额的 30.04% ，占河南省管工业企业总额的 56.07% ；固定资产投资占到了河南省管工业企业总额的 53.62% 。

10、河南煤化集团坚持注重 科学发展 ，致力于企业做大做强，倾力打造 百年基业 。

11、河南煤化集团坚持“人企合一、顺势而行”的企业哲学，铸就先进企业文化，勇担社会重任，助推和谐企业建设。

12、集团重组以来累计上缴税费 144.5亿元 ，其中仅2010年前10个月就上缴税费 77.62亿元 。

13、河南煤化集团坚持以 科技 为先导，以 市场 为导向，以 改革 为动力，不断创新体制机制。

14、河南煤化集团将在河南建成国内最大的 高性能碳纤维 生产基地、亚洲最大的 聚甲醛 生产基地、全球最大的 煤制乙二醇 生产基地。

15、河南煤化集团创建了以“两调整、两提高”、“两创新、两带动”、“三化管理”为主要内容的“4+3”战略举措，坚持资源、资本一体化运营，企业融合倍增效益日渐凸显。

16、河南煤化集团今年营业收入将接近1400亿元，进入世界企业500强后30位 以内。

17、河南煤化集团今年的目标是不仅 营业收入 硬性指标进入世界企业500强，而且 利税总额、净利润 等效益指标，以及安全管理、节能减排、 和谐企业建设 等指标都要位居行业前列。

18、河南煤化集团今年的目标是真正成为一个 核心竞争力突出 、安全有保障、可持续性发展能力强、人与自然和谐发展的国际化大型企业集团。

19、陈雪枫董事长在动员会上指出，各化工企业干部员工 解放思想 的力度还需进一步加大， 开拓创新、攻坚克难 的作风还需进一步加强。

20、陈雪枫董事长在动员会上指出，生产运行调控是一个大系统， 进销存管理 也是一个大系统，而且是有效提升企业管理水平、实现良好经济效益的重要途径。

21、在进销存管理上，我们要坚持 紧跟市场 ，分析趋势，实施三个结合双向引领。

22、关心职工生活，就是最大限度解决职工群众最关心、最直接、 最现实 的热点、难点、重点问题。

23、各级党员领导干部一定要时刻牢记 “权为民所用、情为民所系、利为民所谋”的深刻内涵，深入到安全一线、生产一线去，紧密结合实际，高度重视，认真研究，切实建立关心职工、构建 和谐企业 的长效机制。

24、新形势下，在关心职工方面，我们一定要站在 科学 发展、 和谐 发展的高度。

25、2010年河南煤化集团在全国企业500强中前移8位，排名第60位，再次创造和刷新了河南企业在全国企业500强中最好成绩，也是唯一进入前 60 位的河南企业。

26、河南煤化集团坚持“煤炭开采高效化 、 资源利用循环化 、 碳排放减量化 、 生产废料无害化 ”的“四化”理念，积极倡导高碳资源低碳利用，实现企业与自然、企业与社会的和谐共赢。

27、在公司深入贯彻落实河南煤化集团冲刺世界企业500强动员大会上，陈国平董事长提出了 “大干50天，四季度再减亏 3000万元 ”的奋斗目标。

28、陈国平董事长指出：各单位要把组织学习好 陈雪枫董事长冲刺世界企业500强 的重要讲话精神，作为当前压倒一切的中心工作和首要任务。

29、各事业部、各职能部室在认真学习、深刻领会讲话精神的同时，要按照要求，对照本单位的工作职责，迅速制定相应的工作方案，把任务逐项分解，做到“三个到位”即工作量化到位、任务分解到位、 责任落实到位 ，切实把工作思路和工作举措统一到坚决进入世界企业500强的目标上来。

30、珍惜好的 形势 ，持续好的 态势 ，进一步坚定完成河南煤化集团下达生产经营任务的决心和信心。

31、要做好1-10月份的经济活动分析工作。10月份公司亏损2437万，比上月减亏 2061 万元，是近两年内减亏力度最大的一个月。

32、 11月7日、8日 煤化工装置按照当日市场价计算首次实现了盈利，创造了煤化工装置试开车以来经济效益的最好水平。

33、在新的组织架构下，各事业部不断推出管理新举措，化肥事业部集中开展 “安全文明生产周” 活动、甲醇事业部正在开展 “五到位” 活动，双氧水事业部通过 “三到位”联合巡检管理法 等，保证了生产连创新高。

34、安环部实行的 安全隐患买卖制 ，调动了广大职工排查隐患的主动性和积极性，10月份，经确定的一般隐患44项、较大隐患10项，预计奖励金额6200元。

35、公司建立了“1+3” 内部市场化管理方法，初步得到了河南煤化集团的认可，该管理经验将在河南煤化集团化工企业进行推广。“1”即 以经济效益为中心 ，“3”即 主业单位内部市场化 ，辅业单位完全市场化， 管理部室绩效化 。

36、公司的创收单位除了四个事业部外，还有三个创收实体即物流公司、工程技术服务中心和 检修公司 。

37、按照河南煤化集团的要求，濮阳地区化工产品的销售要做到“四统一”即统一办公、统一人员、 统一定价 、统一机制，集中精力开发外部市场，集中精力把价格卖上去。

38、河南煤化集团不断加大对化工板块的关注力度和支持力度，马上将在化工板块开展以 “增产量，降成本，保效益” 为主要内容的劳动竞赛活动。

39、在安全工作上，思想上要牢固树立“从零开始，向零奋斗”、“事故可防、可控、可治” 的先进理念。

40、过去我们搞对标只是成本、产量等方面的对标，河南煤化集团提出了要向 理念、作风、制度、 流程 全方位地进行对标。

41、强化内部管理，向 精细化管理 要效益。首先开展好 对标 管理，其次要加强 制度化 建设，第三是 内部市场化 管理。

42、科学论证， 超前谋划 ，切实做好公司的“十二五”发展规划。

43、《员工奖惩暂行规定》规定，员工处分期间指作出处分决定之日起至解除处分之日止的时间区间。分别为：警告 6个月 ；记过、记大过、降级 降职12个月 ；撤职、留用察看24个月。

44、中原大化公司员工违反公司规章制度的，依照 《员工奖惩暂行规定》处理。

45、职工签订劳动合同之前须阅读 《员工奖惩暂行规定》 。

46、组织处理包括 通报批评 、取消荣誉 政治 待遇、 调离岗位 、 责令辞职 、职务禁入和免职等。

47、留用察看期间停发工资，按当地 最低工资标准 发放生活费。

48、一般经济损失指直接经济损失在 2万元 以下且影响较小的。

49、每位员工必须牢固树立 我的形象即企业形象 的意识，时刻注意规范约束自身行为，为河南煤业化工集团的企业形象增光添彩。

50、上班 不迟到 、不早退、 不旷工 ，有事按程序 请假销假 ；提前到岗做好准备，以饱满的热情和 良好的精神 状态投入到工作中。

51、增强保密意识，自觉遵守保密守则和保密纪律，工作中 不该说、不该问、不该看、 不该记的，绝对不说、不问、不看、不记。

52、河南煤化集团廉政理念是 荡浊扬清 干净健康 。

53、濮阳市当前开展的活动是 “一创双优”活动。

54、“一创双优”内容：一创指的是“创新思想观念”“双优”指优化干部 作风、优化发展环境。

55、河南煤化集团提出决战四自季度，冲刺世界企业 500 强。

56、河南煤化集团提出的“4+3”战略举措的具体内容是 两调整 、两提高、两创新 、两带动”，“三化”管理主要内容。

57、陈国平董事长在公司召开的深入落实河南煤化集团冲刺世界企业500强会议精神动员大会上提出的工作“三个到位”的具体内容；一是 工作 量化到位。二是任务分解到位，三是 责任落实 到位。

58、陈雪枫在冲刺世界企业500强的动员大会上讲话指出：河南煤化集团作为河南 第一 国企，冲刺世界企业500强是 时代 的选择、发展的 使命 、社会的 重托 。

59、陈雪枫提出的五项要求是：一是 精心组织经济运行 ；二是 切实抓好进销存管理 ；三是 坚决保持安全生产良好局面 ；四是 狠抓企业经营管控 ；五是 切实关心员工生活 。

60、2010年中国进入世界500强的企业共 54 家，入榜企业数量再次刷新，中国在世界经济中所占地位越来越重要。

61、党的十七届五中全会的主要议题是 审议通过了《中共中央关于制定国民经济和社会发展第十二个五年规划的建议》 。

62、河南煤化集团第三季度推荐的学习书为 《对工作负责就是对自己负责》，作者为宿春礼。

63、《对工作负责就是对自己负责》一书旨在帮助读者重视培养自己的 责任感 和 敬业精神 ，深刻体会 工作 的价值和 生命 的涵义。

64、河南煤化集团企业标识以河南的英文 HENAN 、煤炭的英文 Coal 、化工的英文 chemical 的首字母，缩写而成为“HNCC”为主要设计元素。

65、企业标识色彩为 科技蓝 ，代表 科技与创新 。

66、濮阳市开展的“一创双优”活动提出建设 富裕和谐美丽 新濮阳。

67、河南煤化集团明确提出建立人才与战略、 人才与产业 、 人才与市场、人才与发展 “四匹配”的人力资源原则。以打造 战略、管理、技术三支核心团队为目标，积极推进技术、管理“H”型双通道建设，全面启动培养600名复合型战略管理人才，3000名职业管理人才、1万多科技人才、8万名高等级技术能人才的“6318”青年成才工程

68、我公司在安全管理上推行领导干部 走动式 管理办法，改变了以往听汇报、定制度的管理模式。

69、河南煤化集团必然会成为一个 高尚、卓越、受尊敬 的企业。

70、加快转变 发展方式 ，推动产业结构优化升级，这是关系国民经济全局紧迫而重大的 战略任务 。

二、选择

1、“三化管理”是企业管理的根本。三化指 BCD

A、目标化 B、市场化 C、制度化 D、规范化

2、员工受警告处分的，扣减其当年薪酬总额的B 。

A、10 B、5 C、15 D、20℅

3、员工有下列情形之一的，经评选或研究决定可给于“通报表彰”奖励。ABCD

A、工作积极、忠于职守、遵纪守法、文明礼貌、模范执行各项规章制度者；B、工作努力、业务纯熟，能圆满完成重大或特殊任务者；C、见义勇为，敢于抵制各种违规违纪等不良行为者；在平安建设、治安防控、消防管理等方面成绩突出者；对损害公司利益和声誉等各种违纪行为勇于举报者；D、积极维护企业利益和荣誉，保护公共财产，减少或避免损失500万元以内者；

4、员工有 ABCD 情形之一者，企业可按规定单方面解除劳动合同。

A、打架斗殴、恐吓、盗窃、参与黄、赌、毒等违法行为或有其他严重危害正常工作秩序的行为者；B、出行违章、违纪现象一年内累计达3次以上者；或擅自离岗、脱岗、误岗引发事故者；C、连续旷工时间超过15天，或者一年以内累计旷工时间超过三十天者；D、在受处分期间发生违反劳动纪律和工作纪律行为，情节较重者。

5、受到降级处分的是指降低 A 个职级。

A、一B、二 C、三 D、四

6、对国有企业领导人员而言，下列不属于损害国有资产权益行为的是 C。

A、违反规定决定企业重组改制事项

B、违反规定进行工程招标投标

C、用企业资产以个人或者他人名义在国（境）外购买上市公司股票

D、授意、指使、强令财会人员做假帐

7、用C 防治腐败。

A、教育的思路和改革的办法 B、建设的思路和发展的办法

C、发展的思路和改革的办法 D、发展的思路和稳定的办法

8、避免重大人身伤亡事故发生者经评选或研究可给予： A

A、杰出贡献奖 B、特殊贡献奖 C、劳动模范

9、《国有企业领导人员廉洁从业若干规定》所称履行国有资产出资人职责的机构，包括ACD 。

A、作为国有资产出资人代表的各级国有资产监督管理部门

B、大型企业的总公司

C、尚未实行政资分开代行出资人职责的政府主管部门

D、授权经营的母公司

10、大力弘扬爱国主义、集体主义、社会主义思想，以增强诚信意识为重点，加强 ABCD 建设，发挥道德模范榜样作用，引导人民自觉履行法定义务、社会责任、家庭责任。

A、社会公德 B、职业道德 C、家庭美德 D、个人品德

11、任何可燃物的燃烧都要经历C 、着火、燃烧等阶段。

A.蒸发 B.熔化 C.氧化分解 D.还原反应

12、同种物质受热燃烧，最易进行的状态是 A。

A.气相 B.液相 C.固相D.混合相

13、对液体可燃物起始燃烧过程的描述正确的是 D 。

A.着火一燃烧一气化B.燃烧一气化一着火

C.气化一燃烧一着火D.气化一着火一燃烧

14、以下不会引发火灾事故的是A。

A.电磁辐射B.冲击摩擦C.静电火花D.高温表面

15、以下有关危险化学品爆炸的说法有误的是B 。

A.粉尘爆炸一般会产生一氧化碳

B.堆积的可燃性粉尘比粉尘雾更容易爆炸且爆炸危害更大

C.粉尘爆炸的燃烧速度、爆炸压力都比混合气体爆炸小

D.蒸汽云爆炸要求泄漏物在点燃前形成一个足够大的云团

16、氧气瓶直接受热发生爆炸属于B。

A.爆轰B.物理性爆炸 C.化学性爆炸 D.殉爆

17、安全色中的 C表示提示、安全状态及通行的规定。

A. 黄色 B. 蓝色 C. 绿色 D.白色

18、2010年国发23号文是指对《C 》的简称。

A. 国务院关于进一步加强安全生产工作的决定

B. 国务院关于进一步加强食品安全的决定

C. 国务院关于进一步加强安全生产工作的通知

D. 国务院关于进一步加强淘汰落后产能的决定

19、新修订的《河南省安全生产条例》自2010年C起开始实施。

A.8月1日 B. 9月1日 C. 10月1日 D. 11月1日

20、国家安全生产监督管理总局2010年4月26日局长办公会议审议了《 D》，自2010年7月1日起施行。

A. 特殊工种安全技术培训考核管理规定

B. 特殊工种安全技术培训考核管理办法

C. 特种作业人员安全技术培训考核管理办法

D. 特种作业人员安全技术培训考核管理规定

21、特种作业操作证有效期为 A年。

A.6 B.5 C.4 D.3

22、离开特种作业岗位D个月以上的特种作业人员，应当重新进行实际操作考试。 A.3 B.4 C.5 D.6

23、安全设施分为预防事故设施、 A、减少与消除事故影响设施3类。 A.控制事故设施 B.报警设施 C.防护罩 D.防爆设施

24、以下哪些属于控制设施B

A.灭火设施 B. 泄压和止逆设施 C.检测报警设施 D.应急救援设施

25、8.劳动防护用品必须具有“三证”，不属于“三证”的是。C

A．安全鉴定证 B．生产许可证 C． 检验合格证D．产品合格证

三、判断：

1、直接责任者，是指在其职责范围内，对直接主管的工作不履行或者不正确履行职责，对造成的损失或者后果负直接领导责任的党员领导干部。 （×）

2、党和国家工作人员或者其他从事公务的人员，在经济往来中违反有关规定收受财物或者各种名义的回扣、手续费，归个人所有的，以受贿论。（√）

3、党员受到开除党籍处分，四年内不得重新入党。 （×）

4、在物资采购管理活动中，发现购进的物资质量不符合规定标准或要求，不及时采取措施，以致延误索赔期的，对有关责任人给予警告、记过、记大过处分；情节较重的，给予降级（降职）、撤职处分；情节严重的，给留用察看、解除劳动合同处分。（√）

5、在生产经营活动中，违反国家和企业生产安全相关规定或违章指挥，构成重大、特别重大生产安全事故、环境污染事故的，对直接责任者给予撤职处分。 （×）

6、违反国家信访法律法规，组织、串联、煽动集体上访或者滥访、闹访、缠访，影响社会、企业和谐稳定，给予警告、记过、记大过处分；情节较重的，给予给予降级（降职）、撤职处分；情节严重的，给予留用察看、解除劳动合同处分。 （√）

7、党的纪律是党的各级组织和党员干部必须遵守的行为准则，是维护党的团结统一、完成党的任务的保证。 （×）

8、成本理念是发掘潜力 提升价值。 （×）

9、实施党纪处分，应当按照规定程序经党组织集体讨论决定，不允许任何个人或者少数人决定和批准。（√）

10、党员受到留党察看处分后,其党内职务自然撤销。 （√）

四、问答题：

1、陈雪枫董事长在谈到化工板块下一步的发展方向时，着重强调的四点是什么？

答：一是由化工事业部负责，组织专人密切关注市场变化，切实做好市场信息的收集反馈工作，科学高效地指导基层单位组织好生产运行。二是由化工事业部牵头，各化工企业积极配合，认真组织国内、甚至国际上的顶级专家，集中精力，尽快研究解决设备的安稳长满优问题，保证开足马力生产，缓解亏损局面。三是要加快乙二醇、碳纤维、1,4-丁二醇等新建项目建设步伐，改善煤化工产业发展局面。这些高端煤化工项目如能早开一天，煤化工亏损经营的局面将会早一天缓解，这是我们的希望所在。四是要加快研究甲醇出路问题。

2、河南煤化集团在进销存管理上，要坚持紧跟市场，分析趋势，实施三个结合双向引领，三结合双向引领指的是？

答：首先进销存工作要与生产、仓储结合，引领生产、仓储，要根据未来市场变化规律和态势，合理组织安排生产、仓储计划，切实做到淡季蓄能力、旺季增效益。其次进销存工作要与客户、科研及生产相结合，创造需求，引领市场。总之，我们要实现进得更活，销得更畅，存得更优。

3、陈国平董事长提出，为确保“大干50天，四季度再减亏3000万”奋斗目标的顺利实现，必须切实做好哪几项工作？

答：（一）转变观念，加强干部作风建设，以过硬的作风保证各项工作任务的完成。（二）认真研究，科学谋划，进一步做好“进、销、存”工作。（三）严格管理，优化操作，全力以赴组织好装置的安稳长满优运行。（四）铁的手腕，铁的纪律，坚决持续安全生产的良好局面。（五）强化内部管理，向精细化管理要效益。（六）辅业单位消除减少亏损点。（七）以人为本，关注民生，切实做好关心职工生活。

4、各级管理人员要大力弘扬并带头执行的“六坚持，六反对”指的是什么？

答：“六坚持，六反对”即坚持天天算帐，反对糊涂经营；坚持可防可控，反对强调客观；坚持敢闯敢干，反对缩手缩脚；坚持深入基层，反对高高在上；坚持真抓实干，反对敷衍了事；坚持清正廉洁，反对违规违纪。

5、为进一步做好安全工作，陈国平董事长特别强调了四点，分别是什么？

答：首先思想上要牢固树立“从零开始，向零奋斗”、“事故可防、可控、可治”的先进理念；其次按照“系统抓，抓系统”的原则，生产、工艺、安全等系统进一步加强隐患排查和安全检查工作；第三进一步强化员工“手指口述”、“岗位描述”等培训工作，规范岗位人员操作行为，增强作业人员自主保安意识、操作技能、风险识别和自我防护能力，为做好安全工作提供保证。第四继续坚持走动式管理、安全隐患买卖等好的管理方法，进一步修订、完善安全生产管理制度，梳理安全生产流程，着力构建新组织架构下的安全生产长效机制，着力打造本质安全型企业。

6、敬业爱岗、遵章守纪的具体内容是什么？

答：具体内容是：（1）严格遵守国家法律、法规和各级政府的有关政策；自觉遵守行业规则；遵守企业的各项规章制度；（2）热爱企业，爱护企业的荣誉，时刻牢记自己是河南煤业化工集团的一员，一言一行代表河南煤业化工集团的形象。自觉维护企业利益，勇于同损害企业形象的言论和行为作斗争；（3）热爱本职工作，认真执行工作标准、岗位职责和工作程序。

7、员工奖惩工作的基本原则是什么？

答：基本原则是：（1）公开、公平、公正；（2）实事求是、依法依规；（3）精神奖励与物质奖励相结合；（4）惩前毖后、治病救人。

8、请结合公司实际，谈一谈你认为“十二五”期间，应怎样规划我们公司的发展方向？

收获的知识才是真正的知识

学习答题的基础，掌握了才是

看答案不是好的出路

满意采纳奥

有疑问请追问~