乙醇沉淀蛋白质有哪些注意事项

疯狂拉取DNA周围的水分子。DNA失水而抱团聚合，就是肉眼可见的沉淀，因而原理为疯狂拉取DNA周围的水分子。乙醇沉淀法，指一种在浓缩的水提取液中，加入一定量的乙醇，不溶于冷乙醇的成分如淀粉、树胶、粘液质、糖类、蛋白质等。

乙醇与氢氧化铜反应分为两步进行。

1、氢氧化铜加热分解反应，反应方程式如下。

Cu(OH)₂=CuO+H₂O

氢氧化铜加热发生分解反应，生成氧化铜和水。氧化铜为黑色固体。

2、分解反应生成的氧化铜接着与乙醇反应，反应方程式如下。

CuO+C₂H₆O=C₂H₄O+Cu+H₂O

氧化铜与乙醇发生氧化还原反应，生成乙醛和铜固体。

扩展资料：

氢氧化铜，分子式Cu(OH)₂，干粉末呈现蓝色或晶体，微毒，用作分析试剂，还用于医药、农药等。可作为催化剂、媒染剂、颜料、饲料添加剂、纸张染色剂、游泳池消毒剂等。同时还属于弱氧化剂。

氢氧化铜是一种蓝色絮状沉淀，难溶于水，受热分解，微显两性，溶于酸、氨水和氰化钠，易溶于碱性甘油溶液中，受热至60-80℃变暗，温度再高分解为黑色氧化铜和水。

乙醇在常温常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体，低毒性，纯液体不可直接饮用；具有特殊香味，并略带刺激；微甘，并伴有刺激的辛辣滋味。

乙醇具有还原性，可以被氧化（催化氧化）成为乙醛甚至进一步被氧化为乙酸。

参考资料来源：百度百科-乙醇

参考资料来源：百度百科-氢氧化铜

一、步骤

于最多体积450 μl 的DNA 样品中，加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。

加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇，充分混匀。

样品踩于冷环境中沉淀：-20℃ 过夜，或－70℃30 min, 或干冰中5 min 。

使用干冰进行乙醇沉淀

用锤子将干冰砸成粉末，再将管子插入粉末；或将干冰砸成小块，置于抗冻容器中，加入95% 乙醇捣成稀泥，插入管子。 注意：乙醇会洗去标签。

图一  离心之后离心管中分为两层

1:上县为水相，包含着DNA ，下层为有机相，包含蛋白质。通常存水相与有机相之间有一个中间层，可见一个白色带， 这是一些被抽提出来的蛋白质。在你吸取水相的时候，不要碰那个白色带。

高速离心样品15 – 30 min, 转速至少12000g, 如果没有冷冻离心机，将离心机置于4℃ 。

除去上清，上清可以倒入下水道中。

离心管倒置于纸巾上吸干。

预冷的70％乙醇洗涤沉淀。

按步骤6干燥或使用真空浓缩机。

用pH8.0 的TE (10mmol/L Tris· HCI, 0.1 mmol/L EDTA) 重悬DNA 。如果沉淀不能完全溶解，加入更多的TE, 将样品保存于4℃。

三、温馨提示

在处理大分子DNA （大于30 kb) 时要特别小心，由于DNA 样品不能抹荡，只能颠倒或转动混匀。去除表面的氯仿，代替用乙醇沉淀DNA 样品的是， DNA 溶液需要对大体积的冷TNE 溶液进行透析或用水饱和的乙醚抽提。

乙醇引起的变性与沉淀

先加入蛋白液溶解，加入NaCl（盐析）降低蛋白质溶解度，形成过饱和溶液，再加入乙醇现象会更明显些。

变性的蛋白质是不会再溶于稀酸或稀碱了，应为变性即意味着结构的永久改变。你的试验中乙醇的最终浓度是95%*1ml/3ml=32%，而且最后蛋白会再溶解。因此，这个实验不足以证明蛋白质变性。

变性原因

变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响，改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏，都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。

以上内容参考：百度百科-蛋白质变性