PD-1与PD-L1有什么区别
什么是PD-L1、PD-1免疫疗法?
PD-1全称程序性死亡受体1，英文名字为Programmed Death 1，是一种重要的免疫抑制分子，为CD28超家族成员。以PD-1为靶点的免疫调节在抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植存活等方面均有重要的意义。其配体PD-L1也可作为靶点，相应的抗体也可以起到相同的作用。
PD-L1抑制剂工作原理
PD-L1全称程序性死亡受体-配体1，英文名字 Programmed Cell Death-Ligand 1，是大小为40kDa的第一型跨膜蛋白。正常情形下免疫系统会对聚集在淋巴结或脾脏的外来抗原产生反应，促进具有抗原特异性的T细胞增生。而细胞程序化死亡受体-1(PD-1)与细胞程式死亡-配体1(PD-L1)结合，可以传导抑制性的信号，减低T细胞的增生。
PD-L1/PD-1抑制剂工作原理
PD-1的代表药有:
默沙东的Keytruda(商品名：Pembrolizumab)是在美国第一个上市的PD-1抑制剂，作为二线疗法治疗晚期黑色素瘤。目前在乳腺癌、淋巴癌、肺癌、肉瘤、肾细胞癌、黑色素瘤、结直肠癌、膀胱癌、血癌、前列腺癌和骨髓癌等领域都在进行肿瘤免疫疗法的研究。
PD-L1/PD-1药物Keytruda
百时美施贵宝的PD-1抑制剂Opdivo(药物名：Nibolumab)，它于2014年获得FDA首次批准Opdivo进行治疗黑色素瘤患者人群。
PD-L1/PD-1药物Opdivo
PD-L1的代表药有：
Tecentriq(药物名：Atezolizumab)是第一个PD-L1抑制剂，也是第一个获批用于治疗该肿瘤的免疫治疗药物，它由罗氏研发
PD-L1/PD-1药物Tecentriq
Imfinzi是由阿斯利康公司研发的一种PD-L1抑制剂，在2017年首次获得FDA批准用于局部晚期或转移性膀胱癌。
PD-L1/PD-1药物Imfinzi
日前PD-1抑制剂（Opdivo、Keytruda）已经宣布于内地上市，这对很多患者而言无疑是最大的喜讯。但紧接而来的是，面对庞大的癌患人群基数，内地医院（或药房）是否能及时供应？这是一个急需解决的问题。且免疫治疗药物何时纳入医保等问题也是目前癌患群体比较关注的问题，可病不等人。
世界级海港城-香港，拥有着得天独厚的地理位置，资本主义制度下的环境，与国际接轨的医疗水平，香港综合肿瘤中心就是依赖如此优势，为更多有需求的患者提供与国际接轨的最新治疗方案及药物，在肺癌、大肠癌、乳癌等重大疾病治疗上有着成熟的临床实力，2015年香港综合肿瘤中心与维港健康达成战略合作关系，通过维港健康可直接预约中心的肿瘤科专科医生，在医生诊断下患者是否适用PD-1/PD-L1免疫治疗更可直接获知，更可直接用药。
香港综合肿瘤中心作为亚洲第一家及香港唯一一家日间综合肿瘤诊治中心，提供优质和完善的一站式、跨专业癌症诊断与治疗服务，确保每一位患者均可以得到综合的专业意见和最适切的治疗方案。最新PD-L1抑制剂Tecentriq被批准适用于尿路上皮癌，据最新临床研究，在肝癌的二线联合治疗中添加Tecentriq，有积极进展。
对于大多数晚期实体瘤而言，生存期延长超过2.5～6个月才能被认为是有临床意义。PD-1抗体和PD-L1抗体在敏感人群可以轻而易举地达到上述要求，发掘预测疗效的标志物和设计合理的联合免疫治疗将是近期肿瘤免疫治疗的研究重点。由于PD-1抗体和PD-L1抗体作用机制的细微区别，以PD-L1抗体为基础的联合治疗可能具有更大的市场潜力。
药明奥测的PD-L1试剂盒（克隆号：WD160）已递交了注册申请，2022年5月宣布进入优先/创新通道，主要是因为以下三点原因，1）奥测PD-L1抗体及配套二抗都为自主研发，能完全实现国产替代。2）宫颈癌适应症国内尚无伴随诊断试剂盒，属于中国首创。3）在试剂盒开发和临床试验过程中，药明奥测与合作药企之间保持了良好的配合，完全遵循了原研伴随诊断试剂共同开发的法规要求。预计首个获批的适应症⌄为宫颈癌，另外，非小细胞肺癌和食管鳞癌适应症也在布局中。
programmed cell death-1,PD-1
程序性死亡受体-配体1
programmed cell death-Ligand 1,PD-L1
所以，PD-L1就是CD274，所以是一样的。
2.慢病毒Cas9-Blast与pCMV-dR8.91和pCMV-VSV-G质粒共转染到HEK293T细胞中，然后收割病毒滴定后储存。该步的目的是对慢病毒Cas9-Blast进行包装，得到能够将目的序列稳定插入到宿主细胞中的病毒颗粒该病毒颗粒用于感染宿主细胞B16F10。
3.将慢病毒Cas9-Blast感染B16F10后使用杀稻瘟菌素进行筛选，得到稳定的带有Cas9的细胞，即B16F10-Cas9
4.目的：为了获得高Cas9活性的克隆
B16F10-Cas细胞以单细胞分选入96孔板并用慢病毒感染，驱动Cd274和荧光探针特异性的gRNA的表达。感染10天后，将每个单独的克隆用γIFN刺激，并使用抗-CD274抗体通过FACS测定PD-L1的表达。通过测量转导的（mCherry）群体中PD-L1阴性细胞的百分比来评估Cas9编辑效率。
5.（1）对T细胞介导的细胞毒性具有抗性的阳性对照：B16F10-Cas B2m缺陷（B2m缺失导致MHCⅠ类分子折叠异常从而对免疫检查点抑制剂耐药）
（2）对T细胞介导的细胞毒性敏感的阳性对照：B16F10-Cas-cd274缺失（cd274编码PD-L1，它的缺失导致免疫检查点破坏，无法产生免疫耐受，导致细胞对T细胞介导的细胞毒性敏感）
6.将（1）和（2）分别与亲本B16F10-Cas细胞共培养，得到的产物与与体外活化的OT-I或Pmel-1CD8 T细胞共培养。为了用OT-I T细胞进行筛选，在与T细胞共培养之前，用Ova（SIINFEKL）肽在37℃下脉冲B16F10细胞2小时。为了被Pmel-1T细胞最佳杀伤，在与T细胞共培养之前，用IFNγ预处理B16F10细胞24小时以增强表面MHCI类表达（在不存在IFNγ时非常低）。筛选1-3天后，将肿瘤细胞从平板上分离，并且在对DAPI-CD45-CD3-群体进行门控后通过FACS测定B2m-/-（GFP+）和Cd274-/-（mCherry+）细胞的百分比。通过比较选择前和之后阳性对照细胞与亲代细胞的比例来计算倍数富集和消耗。
6得到的结果图为：纵坐标表示Cd274-/-缺陷型细胞的mCherry+荧光强度，横坐标表示B2m-/-缺陷型细胞的GFP荧光强度。从A中可以看到在T细胞筛选之前和之后Cd274-/-缺陷型细胞的荧光强度减弱，而B2m-/-缺陷型细胞的荧光强调度没有明显变化，这说明了在T细胞处理Cd274-/-缺陷型细胞和B2m-/-缺陷型细胞之后，Cd274-/-缺陷型细胞大部分被T细胞杀死，而B2m-/-缺陷型细胞对T细胞杀伤具有抗性。
7.CRISPR Brie慢病毒和质粒psPAX2和pCMV-VSV-G共转染到HEK293T细胞中并收割病毒储存于-80℃。 目的是 对CRISPR Brie慢病毒进行包装，得到将目的序列稳定插入到宿主细胞中的病毒颗粒该病毒颗粒用于感染宿主细胞B16F10-Cas细胞中。
8.将7中收割的病毒感染靶细胞B16F10-Cas，并用嘌呤霉素筛选被CRISPR Brie慢病毒稳定感染的细胞系，测定滴度后计算sRNA的感染率。
9.Pmel-1筛选：B16F10-Cas9（克隆4）细胞用MOI为0.06的“Brie”慢病毒感染，在Pmel-1筛选之前，B16F10细胞铺板，①用于基因组分离提取，②对照组：与OT-1T细胞共培养（未使用OVA脉冲），③实验组：与Pmel-1共培养。与T细胞共培养之后移去T细胞后再生的细胞表示对T细胞具有抗性的细胞，将再生的细胞挂下，使用gRNA试剂盒PCR扩增，然后对gRNA 的表现度进行Illumina测序。
10.OT-I筛选：B16F10铺板：①用于基因组分离提取，②对照组：与OT-1T细胞共培养（未使用SIINFEKL脉冲），③实验组：与OT-IT细胞共培养（使用SIINFEKL脉冲）。与T细胞共培养之后移去T细胞后再生的细胞表示对T细胞具有抗性的细胞，将再生的细胞挂下，使用gRNA试剂盒PCR扩增，然后对gRNA 的表现度进行Illumina测序。
