多肽如何溶解

根据以往客户对于多肽如何保存使用等等的常见问题，我们在这里进行了汇总整理，希望对各位有所帮助

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我该如何处理和保存多肽？

冻干粉形式的多肽，经密封包装可在常温条件下稳定运输，溶解状态的多肽不宜长期保存。

昂拓莱司多肽保存指南：需要长期保存的多肽，应以冻干粉形式存放在含有干燥剂的密封容器内，置于-20°C保存，-80°C效果更好，可以最大限度地避免多肽降解。这种储存方式可以使多肽可保存数年，避免了被细菌降解和氧化，也可以避免二级结构的形成。

打开包装： 在打开包装和称重前，请先将多肽在干燥器中平衡至室温。因多肽往往具有吸湿性，未经平衡到室温的多肽在打开盖子后易凝结，从而降低了多肽产品的稳定性。

称重： 迅速称取您所需的多肽，并将剩余多肽继续储存在-20°C或更低温度。与其他多肽相比，含有半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和谷氨酸N -末端的多肽保存期更短。

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如何溶解多肽？

昂拓莱司生产的多肽的溶解性很大程度上取决于多肽的极性。酸性的蛋白溶解于碱性溶液，而碱性蛋白可溶解于酸性溶液，含有大量不带电荷的极性氨基酸残基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有机溶剂中，如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇，然后加水（蒸馏水）稀释。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解，因为DMSO可能造成侧链氧化。

多肽溶解测试：在多肽溶解之前先取小部分进行多肽溶解测试，您需要测试几种不同的溶剂，直到找到最适当的一种。超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。（注意: 超声处理会引起溶液发热和多肽降解。）

将每个酸性氨基酸赋值为－1，包括天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）、以及羧基末端-COOH。每个碱性氨基酸赋值为＋1，包括精氨酸（R）、赖氨酸（K）、组氨酸（H）以及氨基末端-NH2。然后计算整个多肽的电荷数。

如果整段肽所带电荷是阳性的，说明该肽是碱性的。可先尝试用蒸馏水来溶解；如果不溶于水，接着尝试用少量10%-25%醋酸溶解，如果仍然失败的话，添加一些TFA（10-50微升）来增溶，然后用水稀释至理想浓度。

如果整段肽所带电荷是阴性的，说明该肽是酸性的。酸性的多肽可以尝试用PBS（PH 7.4）来溶解，如果不溶的话，添加少量的碱性溶剂，如0.1 M的碳酸氢铵，然后加水稀释至理想浓度。含有游离半胱氨酸的多肽应溶于脱气的酸性缓冲液中，因为当PH值大于7时，巯基会被迅速氧化成二硫化物。

如果整段肽电荷是零，说明肽是中性的。中性肽通常溶于有机溶剂。首先，昂拓莱司建议您尝试添加少量乙腈、甲醇或异丙醇。对于高度疏水的多肽，可使用少量的二甲基亚砜溶解，然后用水稀释至理想浓度。对于含有自由半胱氨酸的肽，需使用DMF而不是DMSO。对于有聚集倾向的肽，可添加6M盐酸胍或8M尿素，然后进行必要的稀释。

为了防止或尽量减少多肽降解，请将多肽以冻干粉形式保存在-20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小样存放，以避免反复冻融。一份样品融冻后未用完，应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦，所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。

碱性氨基酸: K, R, H,N-terminus

酸性氨基酸: D, E,C-terminus

极性中性氨基酸: F, I,L, M, V, W, Y

非极性疏水氨基酸: G, A,S, T, C, N, Q, P, 乙酰基，酰胺基

举例说明：

RKDEFILGASRHD:(+5) + (-4) = +1 认为是碱性多肽

EKDEFILGASEHR:(+4) + (-5) = -1 认为是酸性多肽

AKDEFILGASEHR:(+4) + (-4) = 0 认为是中性多肽

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一个肽段是否可溶能预测吗？

昂拓莱司无法通过研究多肽的结构来预测其在水中的溶解度。然而，赖氨酸的ε-氨基和精氨酸的胍通常有助于预测溶解度，尤其是短肽。与此相反，含有天门冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往是不易溶于水的，但易溶于稀氨水或碱性缓冲液。

04

如何选择适合自己研究的多肽纯度？

昂拓莱司不推荐将粗品肽使用于生物实验。粗肽可能含有大量的非肽类杂质，如残留的有机溶剂、清除剂、TFA和其他不完整肽。TFA不能被完全消除，通常交付的肽以TFA盐的形式存在。如果残留的TFA影响您的实验，我们推荐其他盐形式，如醋酸盐和盐酸盐等。这些盐通常比常规TFA盐贵20-30%以上。这是由于在转化过程中出现更多的肽损失和需要更多的原材料。

昂拓莱司建议对各种项目采用以下级别的肽纯度：

>70% 肽纯度

肽微阵列

作为制备抗体的抗原

层析法

酶联免疫吸附试验检测抗血清滴度

>80% 肽纯度

免疫印迹法（非定量）

酶底物肽（非定量）

封闭肽（非定量）

亲和纯化

磷酸化检测

蛋白电泳的应用和免疫细胞化学

>95% 肽纯度

标准酶联免疫吸附试验和RIA（定量）

受体配体相互作用（定量）

体内、体外

生物学测定

酶的研究和阻断实验（定量）

NMR研究

质谱分析

其他定量检测

>98% 肽纯度

SAR研究

临床试验

APIs(药物活性成分)

工业品

X-ray晶体研究

其他敏感的实验：酶与底物、受体与配体相互作用、阻断和竞争实验

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什么是多肽的纯度？

多肽的纯度是指HPLC方法在214nm处检测到的目标多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长)，紫外分光光度计检测不到水和残留的盐不。可发现其他的杂质包括：缺失序列（缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列），截断序列（加帽过程中产生的序列）脱保护不完全序列（产生于整个合成过程或最后的裂解过程）。

多肽纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会产生少量的TFA，如：游离的氨基末端和其他侧链如Arg、Lys、His都可生成少量TFA杂质。昂拓莱司通常交付的多肽多含有微量TFA和残留水。即使处于冻干状态，水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着。

纯化前的多肽中包含的杂质包括多肽和非多肽物质, 纯化后的多肽中包含的杂质除了TFA盐，大多数为序列被修改的多肽。

缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列

为避免缺失序列的产生而进行的加帽操作，截断序列即产生于加帽过程中

产生于整个合成过程或最后的裂解过程

保护基重新附着在多肽的其他位置

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什么是肽净含量？

肽净含量不同于多肽纯度。肽净含量是指与非肽物质（主要为抗衡离子和水）相比的多肽量。可通过氨基酸分析来确定肽净含量。通常，亲水性多肽即使在严格的冻干状态下，也会吸收微量的水。因纯化和冻干工艺，会导致不同批次的肽净含量有所不同。

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如何合成多肽？

不同于天然蛋白质的合成，人工合成的方向是从C到N端。昂拓莱司的多肽合成是基于PeptideSyn技术平台的Fmoc或t-Boc法的多肽合成。具体合成由下列几个循环组成：①去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用piperidine去除氨基的保护基团。②激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。③循环：这两步反应反复循环直到合成完成。接着合成的肽从树脂切割和去保护。最后被沉淀、洗脱、冷冻干燥。

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我应该用什么盐形式？

肽通常以TFA盐的形式传递。如果残留的TFA对您的实验有问题，我们建议其他盐形式，如醋酸盐和盐酸盐。这些盐形式通常比普通的TFA盐贵20-30%，因为在盐转化过程中发生肽损失，并且需要更多的原材料。

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如何对合成的多肽进行质检？

公司对客户提供的所有材料均严格保密。昂拓莱司是在发送产品时，同时免费提供HPLC和MS检测结果。公司所有多肽均采用反相色谱法纯化。以质谱法测定肽的分子量来确定产品是否正确，MS检测结果还可显示大部份的主要杂质。如果必要，还可提供肽净含量检测，如氨基酸分析或元素分析。这些方法可以证实多肽的氨基酸组成，他们均可作为多肽确认的补充方法。所有交付的肽均达到了客户要求的纯度。没有达到纯度要求的那些多肽均被丢弃。当然如果客户需要，也可以发送给他们。

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公司对合成的多肽提供分装服务吗？

根据要求，昂拓莱司可以将您的部分或全部订单，免费分装成小份。由于少量分装可以避免多次反复冻融，减少容器的开盖和闭合的次数，减少处理不当或细菌污染的机会，让您的多肽更加稳定。

欢迎各位提问关注，还有什么不清楚的有疑问的，可以随时联系我们！

多肽合成方法：

酰基叠氮物法

早在1902年，Theodor Curtius就将酰基叠氮物法引入到肽化学中，因此它是最古老的缩合方法之一。在碱性水溶液中，除了与酰基叠氨缩合的游离氨基酸和肽以外，氨基酸酯可用于有机溶剂中。与其他许多缩合方法不同的是，它不需要增加辅助碱或另一等当量的氨基组分来捕获腙酸。

长期以来，一直认为叠氮物法是唯一不发生消旋的缩合方法，随着可选择性裂解的氨基酸保护基引入，该方法经历了一次大规模的复兴。该方法的起始原料分别是晶体状的氨基酸酰肼或肽酰肼64,通过肼解相应的酯很容易得到。在－10℃的盐酸中，用等当量的亚硝酸钠使酰肼发生亚硝化而转化为叠氮化物65,依次洗涤、干燥，然后与相应的氨基组分反应。有些叠氮化物可用冰水稀释而沉淀出来。 二苯磷酰基叠氮化物（DPPA）也可以用于酰基叠氮化物的合成。Honzl-Rudinger方法采用亚硝酸叔丁作为亚硝化试剂，并且使叠氮缩合反应可在有机溶剂中进行。因酰基叠氮化物的热不稳定性，缩合反应需在低温下进行。当温度较高时，Curtius重排，即酰基叠氮转化为异氰酸酯的反应成为一个主要的副反应，最终导致生成副产物脲。由于反应温度低（如4℃）而导致反应速率相当慢，使得肽缩合反应通常需要几天才能完全。  对于较长的N端保护的肽链，酯基的肼解一般比较困难，因此，使用正交的N保护肼衍生物是一种选择。在肼基的选择性脱除后，按倒接（backing-off）策略组合的肽片段可以用于叠氮缩合。

如前所述，虽然叠氮法一直被认为是消旋化倾向最小的缩合方法，但在反应中，过量的碱会诱发相当大的消旋。因此，在缩合反应期间要避免与碱接触，例如，氨基组分的铵盐应采用N，N－二异丙胺或N－烷基吗啉代替三乙胺来中和。

虽然有上述局限性，但该方法仍很重要，尤其对于片段缩合而言，因为该方法具有较低的异构化倾向，适用于羟基未保护丝氨酸或苏氨酸组分时，Nˊ保护的本行酰肼还具有多种用途。

酸酐法

在多肽合成中，最初考虑应用酸酐要追溯到1881年Theodor Curtius对苯甲酰基氨基乙酸合成的早期研究。从氨基乙酸银与苯甲酰氯的反应中，除获得苯甲酰氨基乙酸外，还得到了BZ-Glyn-OH(n=2-6)。早期曾认为，当用苯甲酰氯处理时，N－苯甲酰基氨基酸或N－苯甲酰基肽与苯甲酸形成了活性中间体不对称酸酐。  大约在70年后，Theodor Wieland利用这些发现将混合酸酐法用于现代多肽合成。目前，除该方法外，对称酸酐以及由氨基酸的羧基和氨基甲酸在分子内形成的N－羧基内酸酐（NCA,Leuchs anhydrides）也用肽缩合。最后应该提到，不对称酸酐常常参与生化反应中的酰化反应。

混合酸酐法

有机羧酸和无机酸皆可用于混合酸酐的形成。然而，仅有几个得到了广泛的实际应用，多数情况下，采用氯甲酸烷基酯。过去频繁使用的氯甲酸乙酯，目前主要被氯甲酸异丁酯所替代。

由羧基组分和氯甲酸酯起始形成的混合酸酐，其氨解反应的区域选择性依赖依赖于两个互相竞争的羰基的亲电性和（或）空间位阻。在由N保护的氨基酸羧酸盐（羧基组分）和氯甲酸烷基酯（活化组分，例如源于氯甲酸烷基酯）形成混合酸酐时，亲核试剂胺主要进攻氨基酸组分的羧基，形成预期的肽衍生物，并且释放出游离酸形式的活性成分。当应用氯甲酸烷基酯（R1＝异丁基、乙基等）时，游离的单烷基碳酸不稳定，立即分解为二氧化碳和相应的醇。然而，对于亲核进攻的区域选择性，也有一些相反的报道，产物为氨基甲酸酯和原来的N保护氨基酸组分。  为了形成混合酸酐，将N保护的氨基酸或肽分别溶于二氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、乙酸乙酯或DMF中，用等当量的三级碱（N－甲基哌啶、N－甲基吗啉、N－乙基吗啉等）处理。然后，在－15℃－－5℃，剧烈搅拌的同时加入氯甲酸烷基酯以形成不对称酸酐（活化）。经短时间活化后，加入亲核性氨基酸组分。如果作为铵盐使用（需要更多的碱），必须避免碱的过量使用。如果严格按照以上的反应条件，混合酸酐法很容易进行，是最有效的缩合方法之一。

对称酸酐法

Nα－酰基氨基酸的对称酸酐是用于肽键形成的高活性中间体。与混合酸酐法相反，它与胺亲核试剂的反应没有模棱两可的区域选择性。但肽缩合产率最高，为50%（以羧基组分计）。

虽然由对称酸酐氨解形成的游离Nα－酰基氨基酸可以和目标肽一起，通过饱和碳酸氢钠溶液萃取回收，但在最初，这种方法的实用价值极低。对称酸酐可以用Nα－保护氨基酸与光气，或方便的碳二亚胺反应制得。两当量的Nα－保护氨基酸与－当量的碳二亚胺反应有利于对称酸酐的形成，对称酸酐可以分离出来，也可不经纯化而直接用于后面的缩合反应。基于Nα－烷氧羰基氨基酸的对称酸酐对水解稳定，可采用类似上述纯化混合酸酐的方法进行纯化。

由于Boc-保护氨基酸的商品化和合理的价格，在肽链的逐步延长中，使用对称酸酐法日益受到重视。虽然可以买到晶状的对称酸酐，但原位制备仍然是一种不错的选择。

碳二亚胺法

碳二亚胺类化合物可用于氨基和羧基的缩合。在该类化合物中N，Nˊ－二环己基碳二亚胺（DCC）相对便宜，而且可溶于肽合成常用的溶剂。在肽键形成期间，碳二亚胺转变为相应的脲衍生物，N，Nˊ－二环己基脲可以从反应液中沉淀出来。显然，碳二亚胺活化后的活性中间体氨解和水解速率不同，使肽合成能在含水介质进行。经几个课题组的大量研究，确立了以碳二亚胺为缩合剂的肽缩合反应机理，羧酸根离子加成到质子化的碳二亚胺，形成高活性的O－酰基脲；虽然还没有分离出这个中间体，但通过非常类似的稳定化合物推断了它的存在。O－酰基脲与氨基组分反应，产生被保护的肽和脲衍生物。或者，与质子化形式处于处于平衡状态的O－酰基异脲,被第二个羧酸酯亲核进攻，产生对称的氨基酸酐和N，Nˊ－二取代脲。前者与氨基酸反应得到肽衍生物和游离氨基酸。在碱催化下，使用DCC的副反应使酰基从异脲氧原子向氮原子转移，产生N－酰基脲71,它不再发生进一步的氨解。不仅过量的碱可催化O－N的酰基转移，而且碱性的氨基组分或碳二亚胺也可催化该副反应。

另外，极性溶剂有利于这一反应途径。

加盐酸的作用是使蛋白质的肽键断裂，从而形成氨基酸。一般来蛋白质水解加盐酸可生成L型氨基酸，蛋白质水解加碱可生成D型氨基酸。

蛋白质在碱的作用下，水解后氨基酸会消旋，但色氨酸稳定。酸法水解由于后续的酸液对环境污染，水解产物会有异味；碱法水解则会使L型氨基酸变成D型，且两种水解方法都不存在专一性，因此酶法水解成为趋势。

蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16.3%，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.8kg。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新，其中包括必需氨基酸（赖氨酸，色氨酸，苯丙氨酸，甲硫氨酸，苏氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，缬氨酸）与非必需氨基酸（甘氨酸亲水性丙氨酸 色氨酸 酪氨酸天冬氨酸组氨酸 天冬酰胺谷氨酸 谷氨酰胺 精氨酸丝氨酸 半胱氨酸 脯氨酸）。

根据水解程度

1、完全水解：彻底水解得到的水解产物为各种氨基酸的混合物。

2、部分水解：不完全水解得到的水解产物是各种大小不等的肽段和单个氨基酸。

水解酶

蛋白酶按水解底物的部位可分为内肽酶以及外肽酶，前者水解蛋白质中间部分的肽键，后者则自蛋白质的氨基或羧基末端逐步降解氨基酸残基。

在使用多肽进行的研发中,究竟应该选择多少的纯度,是不是选用的多肽纯度越高越好?

一般来说同样序列,同样数量的多肽会因为其纯度的不同而价格各异，纯度越高，单位质量的多肽价格也越高。

我公司可以提供不同的纯度级别供客户选择，从粗品到>98%纯度。根据客户需要我们可以提供纯度>98%的超纯多肽。

粗品肽不推荐用于生物实验。粗肽可能含有大量的非肽类杂质，如残留的有机溶剂、清除剂、TFA和其他不完整肽。TFA不能被完全消除，通常交付的肽以TFA盐的形式存在。如果残留的TFA影响您的实验，我们推荐其他盐形式，如醋酸盐和盐酸盐等。这些盐通常比常规TFA盐贵20-30%以上。这是由于在转化过程中出现更多的肽损失和需要更多的原材料。

我们建议对各种项目采用以下级别的肽纯度：

穿琥宁与果糖二磷酸钠注射液存在配伍禁忌

果糖注射液属于新一代不依赖胰岛素的高能量营养输液,非常适用于糖尿病人。资料表明果糖注射液与哌拉西林钠、头孢氨苄+舒巴坦、头孢唑林钠、头孢哌酮钠、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、磷霉素钠、盐酸林可霉素、盐酸克林霉素、硫酸奈替米星、阿昔洛韦、加替沙星、盐酸左氧氟沙星、洛贝林、苯巴比妥钠、盐酸氯丙嗪、盐酸利多卡因、维生素C、维生素B6、三磷腺苷二钠、辅酶A、西咪替丁、盐酸法莫替丁、肝利欣、硝酸甘油、单硝酸异山梨醇酯、硝普钠、肝素钠、氯化钾、葡萄糖酸钙、碳酸氢钠等多种药物配伍，推测其配伍禁忌类似于葡萄糖注射液。

蛋白质在酸、碱或酶的作用下发生水解反应，中间产物是多肽，最后得到多种α-氨基酸，它是溶于水的

如果考虑hcl对dna的作用，它会作用于dna的氢键，使双链打开，打开以后还是大分子，不溶于水的供碃垛度艹道讹权番护

然后静置，分层，就分开了

其实高中分离dna的实验里面，主要用地是2mol/l的氯化钠溶液，利用蛋白质的盐析。单独的hcl不大好说