无机阴离子-硫化物

主要有碘量法和钛盐比色法。具体如下：

第一法 碘量法

1　原理

食品中的强氧化物在稀硫酸中使碘化钾氧化，产生定量的碘，生成的碘以淀粉作指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液滴定得到强氧化物总量。加入过氧化氢酶分解去除试样中的过氧化氢，用硫代硫酸钠标准溶液滴定去除过氧化氢后的其他氧化物含量。2 次滴定结果之差可计算得到样品中过氧化氢的含量。

2　试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。

2.1　试剂

2.1.1　硫代硫酸钠：分析纯。

2.1.2　可溶性淀粉：分析纯。

2.1.3　碘化钾：分析纯。

2.1.4　硫酸：分析纯。

2.1.5　钼酸铵：分析纯。

2.1.6　过氧化氢酶（单位活力大于200,000 U/mL）：置于-20℃保存。

2.1.7　亚铁氰化钾：分析纯。

2.1.8　乙酸锌：分析纯。

2.1.9　冰乙酸：分析纯。

2.1.10　活性炭。

2.2　试剂配制

2.2.1　淀粉指示剂（10 g/L）：称取可溶性淀粉0.50 g，加少许水，调成糊状，倒入50 mL沸水中调匀，煮沸。临用时现配。

2.2.2　碘化钾溶液（100 g/L）：称取10.00 g碘化钾，加水溶解，定容至100 mL，贮于棕色瓶中。临用时现配。

2.2.3　10%稀硫酸（质量浓度）：量取60 mL硫酸，缓缓注入约700 mL水中，冷却，稀释至1000 mL。

2.2.4　3%钼酸铵溶液：称取3.00 g钼酸铵，加100 mL水溶解。

2.2.5　0.1%过氧化氢酶溶液：称0.10 g过氧化氢酶，用100 mL蒸馏水分多次将其溶解，冷藏可保存两个月。

2.2.6　亚铁氰化钾溶液：称取106.0 g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000 mL。

2.2.7　乙酸锌溶液：称取220.0 g乙酸锌，加30mL冰乙酸，用水溶解，稀释至1000 mL。

2.2.8　活性炭：将100 g活性炭加至750 mL 1 mol/L盐酸中，回流1 h-2 h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（Fe3+）为止，然后置于110 ℃烘箱中烘干。

检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将20 g/L亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。

2.3　标准溶液配制

2.3.1　0.1 mol/L硫代硫酸钠标准储备液：按GB/T 601规定的方法配制和标定。

2.3.2　0.0020 mol/L硫代硫酸钠标准使用液：临用时用标准储备液稀释。

3　仪器和设备

3.1　电子天平：感量为0.01 g。

3.2　高速捣碎机。

4　分析步骤

4.1　试样制备

4.1.1　固体样品

称取粉碎均匀的试样10 g（精确到0.01 g），加适量水溶解，转移入100 mL容量瓶中，对蛋白质、脂肪含量较高的样品可加入乙酸锌溶液5 mL，亚铁氰化钾溶液5 mL，加水定容至刻度，摇匀。浸泡30 min，用滤纸过滤，滤液作为试样液备用。

4.1.2　液体样品

称取25 g（精确到0.01g）试样于100 mL容量瓶中，对蛋白质、脂肪含量较高的样品可加入乙酸锌溶液5 mL，亚铁氰化钾溶液5 mL，加水定容至刻度，摇匀，用滤纸过滤，滤液作为试样液备用。

4.1.3　如样品滤液有颜色，加入1 g活性炭，振摇1 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液待用。

4.2　测定

分别吸取滤液25.0 mL，置于A、B两个250 mL碘量瓶中，A瓶中加入0.1%过氧化氢酶溶液0.5 mL，混匀，放置10 min（放置过程中摇动数次）。在A、B两瓶中各加入10%硫酸5.0 mL、碘化钾溶液5.0 mL、3%钼酸铵3滴，混匀，置暗处放置10 min，各加水50 mL，分别用硫代硫酸钠标准溶液滴定，待滴至微黄色时，加淀粉指示剂0.5 mL，继续滴至蓝色消失，分别记录A、B两瓶消耗硫代硫酸钠标准溶液的毫升数。

5　分析结果的表述

试样中过氧化氢的含量按式（1）进行计算：

…………………..（1）

式中：

X——样品中过氧化氢的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

VA——A瓶中消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；

VB ——B瓶中消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；

c——硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

m——试样质量，单位为克（g）；

B——样品稀释倍数；

17.01——与1.00 mL硫代硫酸钠标准溶液[c(Na2S2O3)=1.000 mol/L]相当的过氧化氢的质量，单位为毫克（mg）。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

6　精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

7　其他

本方法定量限为3 mg/kg。

第二法 钛盐比色法

8　原理

过氧化氢在酸性溶液中，与钛离子生成稳定的橙色络合物。在430 nm下，吸光度与样品中过氧化氢含量成正比，用比色法测定样品中过氧化氢的含量。

9　试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。

9.1　试剂

9.1.1　高锰酸钾：分析纯。

9.1.2　30% H2O2溶液：分析纯。

9.1.3　硫酸：分析纯。

9.1.4　二氧化钛：分析纯。

9.1.5　硫酸铵：分析纯。

9.1.6　盐酸：分析纯。

9.2　试剂配制

9.2.1　钛溶液：称取1.00 g二氧化钛（TiO2）、4.00 g硫酸铵于250 mL锥形瓶，加入100 mL浓硫酸，上面放置一小漏斗，置于可控温电热套中150 ℃保温15 h~16 h，冷却后以400 mL水稀释，最后用滤纸过滤，清液备用。

9.2.2　1 mol/L盐酸：量取90 mL盐酸，加入1000 mL水中。

9.2.3　硫酸（1+4）：量取10 mL硫酸，加入40 mL水中。

9.3　标准溶液配制

9.3.1　高锰酸钾标准溶液[c(KMnO4)=0.100 mol/L]：按GB/T 601规定的方法配制和标定。

9.3.2　过氧化氢标准储备液：吸取30% H2O2溶液1 mL 于100 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。

吸取20.00 mL上述溶液于250 mL 锥形瓶中，加入10%稀硫酸（3.2.3）25 mL，用高锰酸钾标准溶液[c(KMnO4)=0.100 mol/L]滴定至微红色。

过氧化氢标准储备液的浓度按式（2）进行计算：

………………….. （2）

式中：

X：过氧化氢标准储备液浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V：滴定所用高锰酸钾标准溶液[c(KMnO4)=0.100 mol/L]的体积，单位为毫升（mL）；

c：高锰酸钾 [c(KMnO4)=0.100 mol/L]标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

17.01：每毫升高锰酸钾[c(KMnO4)=0.100 mol/L]标准溶液相当于过氧化氢的质量，单位为毫克（mg）。

9.3.3　过氧化氢标准使用液：根据10.3.2的标定结果将过氧化氢标准储备液稀释成20 μg/mL。

10　仪器和设备

10.1　电子天平：感量为0.01 g。

10.2　高速捣碎机。

10.3　分光光度计 ：配5 cm比色皿。

11　分析步骤

11.1　试样制备

同5.1。

11.2　标准曲线的制作

吸取0.00 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.50 mL、5.00 mL、7.50 mL、10.0 mL过氧化氢标准使用液（相当于0 μg、5 μg、10 μg、20 μg、50 μg、100 μg、150 μg、200 μg过氧化氢），分别置于25 mL带塞比色管中。各加入钛溶液5.0 mL，用水定容至25 mL，摇匀，放置10 min。用5 cm比色皿，以空白管调节零点，于波长430 nm处测吸光度。以标准系列的过氧化氢浓度（μg/mL）对吸光度绘制标准曲线。

11.3　测定

吸取10.00 mL试样液于25 mL带塞比色管中，以下按标准曲线绘制步骤操作（从“各加入钛溶液5.0 mL……于波长430 nm处测吸光度”），同时做试剂空白。

如果经过活性炭吸附后试样液仍有颜色干扰，应扣除试样液的本底色，即用5.0 mL稀硫酸（1+4）代替钛溶液，其他按上述方法操作。

12　分析结果的表述

试样中过氧化氢的含量按式（3）进行计算：

…………………..（3）

式中：

X——样品中过氧化氢含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

c——试样测定液中过氧化氢的质量，单位为微克（μg）；

V1——试样处理液总体积，单位为毫升（mL）；

V2——测定用样液体积，单位为毫升（mL）；

B——样品稀释倍数；

m——试样质量，单位为克（g）。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

13　精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

14　其他

本方法定量限为1.6 mg/kg，检出限为0.5 mg/kg。

1、明确亚硝酸盐的测定与控制成品质量的关系。

2、明确与掌握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。

二、原理：

样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与萘基盐酸二氨乙烯偶联成紫红色的重氮染料，产生的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，可以比色测定。

三、试剂与仪器

1、亚铁氰化钾溶液：称取106克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至1000毫升。

2、乙酸锌溶液：称取220克乙酸锌[Zn(CH2C00)2·2H20]，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀释至1000毫升。

3、饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100毫升热水中，冷却后备用。

4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中，避光保存。

5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。

6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。

7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。

8，小型绞肉机。

9、分光光度计。

四、操作方法：

1、样品处理：称取5.0克经绞碎混匀的样品，置于50毫升烧杯中，加工2.5毫升饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约30毫升将样品全部洗入500毫升容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5毫升乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5小时，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤弃去初滤液30毫升，滤液备用。

2、测定

吸取40毫升上述滤液于50毫升比色管中，另吸取0.00、0.20、0．40、0．60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50毫升亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、5、7、10、12.5微克亚硝酸钠)，分别置于50毫升比色管中，于标准与样品管中分别加入2毫升0.4％对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5分钟后各加入1毫升0.2％盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2厘米比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。

计算： X=(A×1000)/(m×40/500×1000×1000)

X：样品中亚硝酸盐的含量，g／kg；

m：样品质量，g；

A：测定用样液中亚硝酸盐的含量，ug．

火腿肠中亚硝酸盐含量的测定试验方法如下：

一、测定原理

样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料，染料的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，其最大吸收波长为538nm，测定其吸光度后，可与标准比较定量。

二、实训操作

1．仪器设备

小型绞肉机或组织捣碎机或研钵；可见分光光度计；天平(感量为0.1mg和lmg)；，50ml烧杯；500ml容量瓶；小玻棒；比色管；比色架。

2．试剂

①亚铁氰化钾溶液(106g／L)：称取106.Og亚铁氰化钾用水溶解，并稀释至1000ml。

②乙酸锌溶液(220g／L)：称取220.0g乙酸锌，先加30ml冰醋酸溶解，用水稀释至1000ml。

③饱和硼砂溶液(50g／L)：称取5.0g硼酸钠，溶于100ml热水中，冷却后备用。

④氨缓冲溶液(pH9.6—9.7)：量取30ml盐酸，加100ml水，混匀后加65ml氨水，再加水稀释至1000ml，混匀。调节pH至9.6～9.7。

⑤缓冲液的稀释液：量取50ml氨缓冲溶液，加水稀释至500ml混匀。

⑥盐酸(0.1mol／L)：量取5ml盐酸，用水稀释至600ml。

⑦对氨基苯磺酸溶液(4g／L)：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100ml 20％(v／v)盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

⑧盐酸萘乙二胺溶液(2g／L)：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100ml水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

⑨亚硝酸钠标准溶液(200µg/mL)：准确称取0.1000g于1lO～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

⑩亚硝酸钠标准使用液(5.0µg／mL)：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00ml，置于200ml容量瓶中，加水稀释至刻度。

3．样品预处理

(1)提取 火腿肠一捣碎_取匀样0.5g一50ml。烧杯一加入饱和硼砂液12.5ml。—搅拌均匀一用约70℃的水大约300ml。将试样洗入500mL容量瓶一沸水浴加热15min一冷水冷却至室温。

(2)提取液净化 上述提取液→加亚铁氰化钾和乙酸锌各5mL→定容→放置0.5h→撇去脂肪层→过滤(弃去不溶物)→弃去初滤液约30mL→滤液待测。

4．成分分析

(1)标准曲线绘制 取10个50mL比色管一比色架一吸取40mL样品处理液至其中一个50mL比色管中一另吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2．50mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、4、5、7．5、10、12µg亚硝酸钠)一分别置于其余的比色管中→在所有的比色管中分别加入2mL 0.4％对氨基苯磺酸溶液混

匀→静置3-5min→于各管中加入lmL 0.2％盐酸萘乙二胺溶液→加水至刻度→混匀-静置15min→用2cm比色杯，以零管调节零点→于波长538nm处测吸光度A→绘制标准曲线一同时做试剂空白。

(2)样品测定选择合适的稀释倍数→吸取40mL上述滤液于50mL容量瓶中→按绘制标准曲线的步骤测量在波长为538nm下进行测定A一记录→从标准曲线查出稀释样品中的亚硝酸钠的量。

医药上用作收敛剂和弱防腐剂，亦用于醋酸乙烯合成的催化剂。

乙乙酸锌，又名醋酸锌，分子式为C4H6O4Zn。有光泽的六面体鳞片或片状晶体，有乙酸气味。溶于水和乙醇。常温下容易以两个结晶水的形式存在，在100℃失去结晶水

称取4.7369克分析纯氯化铝(AlCl3.6H2O)或0.5292克分析纯金属铝片于250毫升烧杯中,加入5毫升1：1HCl（盐酸）,溶解后移入1000毫升容量瓶中,用水稀释至刻度摇匀.此溶液1毫升约含铝0.1毫克,其准确浓度可用8-羟基喹啉重量法校正.醋酸铵-醋酸缓冲溶液(PH=6) 将30克分析纯醋酸铵溶液溶于水中,加入1毫升分析纯的冰醋酸,用水稀释至100毫升.二甲苯酚橙指示剂 取0.3克二甲苯酚橙指示剂与20克分析纯的氯化钠在瓷研钵中研细混匀后保存于广口瓶中.0.1％对硝基酚指示剂（水溶液）1：1氨水2、操作步骤用移液管吸取分离二氧化硅后的滤液25-50毫升于锥形瓶中,用移液管或滴定管加入0.03MEDTA标准溶液(EDTA的用量视试液中氧化铝含量的多少来决定.1毫升0.03M试液=1.5294Al2O3毫克,一般过量3-10毫升),加热至60-70℃,加入1滴0.1％对硝基酚指示剂,用1：1NH4OH中和至浅黄色,再逐滴加入1：1HCl至黄色刚退去,加入5毫升NH4Ac-Hac缓冲溶液,加热煮沸2-3分钟,冷却后加入少量二甲苯酚橙指示剂,以0.02MZn(Ac)2标准溶液滴定至溶液呈微红色为终点.记下所消耗的Zn(Ac)2标准溶液毫长数V2.取同量EDTA溶液按上述操作步骤作一空白试验,所消耗的Zn(Ac)2标准溶液毫升数为V1.试样中的氧化铝百分含量按下式计算：

式中V1一一同量EDTA所消耗的Zn(Ac)2毫升数；V2一一回滴过量EDTA所消耗的Zn(Ac)2毫升数；T一一Zn(Ac)2对Al2O3的滴定度,即每毫升Zn(Ac)2相当于Al2O3的克数；F一一试液稀释倍数；G一一称取样品质量；0.6380一一Fe2O3与TiO2换算成相当于Al2O3的系数(Al2O3/Fe2O或Al2O3/TiO2=0.6380).