核酸在稀盐酸中可以逐步水解,水解最终产物是什么
最终目的是为了改变生物膜(细胞膜)的通透性,使染色剂易进入细胞,
同时使染色质中的dna与蛋白质分离有利于dna与染色剂结合。
生物书上有这句话,仔细找一找。
防止产物形成气溶胶污染实验室,污染后空白孔会p出产物,对于临床核酸检测病原菌的实验室是毁灭性打击,用的引物来来去去都是这几对,样品会大量出现假阳性
其实别把八联管打开,用塑料袋包好扔掉就可以了,如果你是做实时荧光定量PCR的话,,,
核酸的最大吸收波长是260nm,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。
在波长260nm紫外线下,1 OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为40μg/ml;寡核苷酸为20μg/ml。可以此来计算核酸样品的浓度。
通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)可以估计核酸的纯度。纯DNA的比值为1.8,纯RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8,说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。样品中如混有RNA比值上升。
扩展资料
显示DNA的传统方法是富尔根(Feulgen)反应,切片先用稀盐酸处理,DNA经弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开,脱氧核糖的一端释放出醛基,并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。
原理同PAS反应,使细胞核DNA显紫红色。在此过程中RNA不受影响,故染色具有DNA特异性。准确的温度和盐酸浓度,适宜的水解时间是成功的关键。水解过度或不足均降低染色强度。
核酸可分为脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)和核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)。
核酸不但是一切生物细胞的基本成分,还对生物体的生长、发育、繁殖、遗传及变异等重大生命现象起主宰作用。它在生物科学的地位,可用“没有核酸就没有生命”这句话来概括。
参考资料来源:百度百科-核酸
参考资料来源:百度百科-核酸显示法
参考资料来源:百度百科-OD260/280比值
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M
氯
纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的
氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA
钠盐沉淀出来.
也可用0.15
MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA
时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA
的分离.在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA
的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
(2).阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA
.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA
联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA
的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA
.此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出.此法的特点是使提取的DNA保持天然状态
.
(
4).水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%
80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
DNA的提取方法有7种:酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。
DNA的提取原则
1、保证核酸一级结构的完整性;
2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;
3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;
4、其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。
扩展资料提取DNA的注意事项
1、 各操作步骤要轻柔,尽量减少DNA的人为降解。
2、注意防止非核酸类成分干扰。
3、 要减少DNA的降解,促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、 提取DNA过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。
5、 所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
参考资料来源:百度百科-dna提取
2.按要求装配好仪器。
3.向漏斗注入盐酸。
4.向广口瓶放入大理石小块。
5.收集二氧化碳。
注意事项
1.不能用碳酸钠(或大理石粉末)代替碳酸钙(大理石),因为反应速率太快,不易控制。
2.不能用浓盐酸代替稀盐酸,因为浓盐酸易挥发,与二氧化碳混合,得到气体不纯。
3.不能用硫酸代替稀盐酸,因为硫酸与碳酸钙反应生成硫酸钙,不溶于水,覆盖在大理石(或石灰石)表面,阻止反应进行。
制取装置
实验室制取二氧化碳的步骤
以上是小编整理的有关实验室制取二氧化碳的知识,希望对大家有所帮助。
第一个问题:核酸不溶于乙醇,所以可以使用乙醇对核酸进行漂洗,使残留的杂质溶解于乙醇,并最终通过离心去除。可总结为去除DNA中的残留杂质(对混杂的RNA无效)。如果你不用乙醇,会有很多杂质:盐、糖、蛋白等。
酚:使蛋白质变性溶解,抑制DNase的降解作用
氯仿:加速有机相与水相分层,去除核酸溶液中残余的酚
异戊醇:降低表面张力,减少气泡产生,使离心后的水相、变性蛋白相及有机溶剂相维持稳定
第二个问题:rna水解后,加盐酸可以和RNA水解后的核糖反应,生产一种化合物,这种化合物在670nm处有最大吸收峰,其吸收值和浓度成正比。加盐酸的作用就是为了定量。
第三个问题:取rna上清液稀释,应该也是便于测定吧。详情可以咨询河南惠尔的狄老师
B、观察藓类叶片中的叶绿体时,只需要在载玻上滴清水即可,B不需要;
C、用显微镜观察红细胞的正常形态,需要在载玻上滴生理盐水即氯化钠溶液,C需要;
D、利用DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度不同,对鸡血细胞DNA进行粗提取,D需要.
故选B.