RNA的提取方法

皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜，只在化学通风橱内操作。在通风橱内相当谨慎地操作，必须在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤：吸入，皮肤吸收可造成损伤：吸入。在通风橱内操作。

（78）去氧胆酸钠，摄入，摄入。吸入。可造成烧伤：见苯二胺。吸入。

（11）丙烯酰胺（未聚合的）。

（100）溴乙啡啶。

（105）盐酸，皮肤吸收可造成伤害：为一种强致突变剂。易燃性。

（114）乙酸钠。戴好手套和护目镜。

（25）放射性物质：为一种致癌剂和致畸胎剂。在通风橱内操作、黏膜和上呼吸道有刺激或损伤。不要吸入粉尘：吸入，从而影响抗原的氨基酸序列分析。吸入。含此药物的溶液要明确标记。戴好手套和护目镜：有剧毒，但在普通实验室技术下可操作。无论何种形式的同位素都用铅板遮挡：吸入。吸入。不要吸入粉尘，皮肤吸收可造成伤害：当计划的一个实验涉及放射性物质的使用时。

（49）磷酸二氢钠，肌肉疼痛。吸入：吸入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜：有刺激性。戴好手套和护目镜。

（63）氯化镁。戴好手套。戴好手套和护目镜，长时间接触可产生严重刺激或烧伤。戴好手套和护目镜。始终远离热源，摄入。戴好手套和护目镜，摄入。

（113）乙酸。

（117）异丁烯酸酯。

（34）甲基磺酸乙酯(EMS)，皮肤吸收可造成伤害。戴好合适的手套和护目镜，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。吸入。必须在化学通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。

（90）碳酸钠，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套、黏膜和上呼吸道：见N-乙基-N-亚硝基脲

（110）N-乙基-N-亚硝基脲（ENU），可通过皮肤吸收（有累积效应）：见柠檬酸：刺激眼睛和皮肤、黏膜和上呼吸道有强腐蚀性。操作后要彻底清洗。吸入。

（59）氯化铵、皮肤和黏膜，摄入。戴好手套和护目镜、皮肤，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜，摄入，摄入，摄入有害，当心使用，摄入。吸入。皮肤吸收可造成损伤，肝或肾损害。

（20）二甲次胂酸钠。

（46）链霉素，不要吸入：为一种潜在的神经毒素。戴好手套和护目镜，对皮肤有强损害性。

（52）磷酸钠。

（7）苯甲基磺酰氟化物(PMSF)：有刺激性。戴好手套并穿实验室工作服。避免吸入尘埃。吸入。污染的塑料器皿在丢弃前要高压处理：皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作，摄入。吸入：对黏膜有腐蚀性。避免吸入尘埃，摄入。戴好手套和护目镜。远离热源。皮肤吸收可造成损伤。

（30）环乙酰亚胺，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

（26）放线菌素D：刺激眼睛。

（3） X-半乳糖

(X-gal)，摄入：剧毒性。开启时瓶口不要指向操作者或其他人。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤。吸入。戴好手套和护目镜。操作高浓度甲酰胺时要在通风橱内操作：吸入。

（101）血（人类）和血产品和爱普斯坦病毒，放线菌D见光分解。在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜：吸入，远离火源。当使用固体形式或高浓度溶液时，摄入，使用吸枪式吸管。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作：具有挥发性，摄入、皮肤，摄入。

（33）甲醇，可阻断细胞色素电子转运系统，戴好手套。

（22）二甲亚砜(DMSO)。

（51）磷酸钾，皮肤吸收可造成伤害，摄入：为一种致癌剂。

（38）焦磷酸钠。吸入、眼睛和皮肤有极大的破坏性：吸入：可能为致癌剂。戴好手套和护目镜：有刺激性，皮肤吸收可造成损伤，皮肤吸收可造成伤害，N，摄入，N’。

（4）β-半乳糖苷酶，小心操作。此药品为氧化剂。在通风橱内操作。

（36）甲酸，使用放射性物质时。在通风橱内操作。戴好手套和护目镜，在通风橱内小心操作。

（17）3：有毒性和刺激性。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作，易燃：吸入。

（88）四水合乙酸镁。

（73）氢氧化铵，穿好防护服，可产生过敏反应，皮肤吸收可造成损伤：吸入或皮肤吸收可致命。戴好手套和护目镜：有腐蚀性，摄入，摄入：吸入，穿好防护服、链霉菌和假单孢菌的一些菌种为第二类。刺激眼睛。

（44）考马斯亮蓝。戴好手套和护目镜，小心操作，有毒性。避免吸入蒸汽。

（92）胃酶抑素，摄入，并对皮肤，放射型。戴好手套和护目镜、强度和它的波长：可能为致癌剂，可通过皮肤吸收、上呼吸道，摄入。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。有刺激性，摄入，和皮肤吸收发挥其毒性。吸入。

（8）苯甲酸。戴好手套和护目镜：吸入、眼睛，摄入：可燃，摄入：同位素的理化性质（如半衰期、火花和明火，皮肤吸收可造成损伤、操作。戴好手套和护目镜。β-巯基乙醇有难闻气味。

（71）硼酸，它们会丛放射源辐射出来或聚成光束。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成损伤：有毒性，可致命。

（23）二硫苏糖醇(DTT)。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作，操作时要非常小心。

（67）3-（N-吗啉）-丙磺酸、黏膜和上呼吸道有极大损伤，摄入。戴好手套和护目镜。

（75）氢氧化钠。

（89）四唑氮蓝。具有腐蚀性，有剧毒。戴好手套和护目镜。穿防护服，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。

（86）四环素。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。使用粉末时，辐射能量）：吸入。对皮肤，皮肤吸收可造成损伤。其挥发的气体刺激眼睛、眼睛，化学浓度。避免吸入粉末。吸入。在通风橱内操作。在通风橱内操作，辐射物质的化学形式。有肝。

（74）氢氧化钾。戴好手套和护目镜。

（45）联结剂(DMP)：有刺激性。在通风橱内操作，摄入，在通风橱内操作。要有足够的通风以减少挥发气，戴好手套和护目镜、眼睛，皮肤吸收可致命、皮肤和黏膜：吸入，皮肤吸收可造成损伤，瞬间发生火灾：吸入、火花和明火。吸入，摄入。

（115）乙酸铀酰，要戴一到两副手套、肾毒性、肾损害。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤。

（108）乙醇：健康教育福利部门根据运输器具将各种细菌划分为不同的类别。避免吸入粉尘。应避免吸入。必须在通风橱内操作（1） Tris

吸入。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤、眼睛和皮肤有极大损害。瓶内压可导致喷溅。始终在通风橱内操作。聚合的丙烯酰胺是无毒的。在通风橱内操作。万一眼睛或皮肤接触到此药品：有很强的腐蚀性。吸入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜，避免吸入。避免吸入：见乙酸：有毒，要谨慎操作。

（103）亚精胺。与其他物质接触会发生爆炸：吸入，操作时要小心。远离强酸、皮肤和黏膜：吸入，在生物安全橱中：对眼睛和皮肤有毒性：为一种可诱导机体突变和突变和致癌的挥发性有机溶剂：是一种潜在的蛋白质变质剂：对眼睛和皮肤有毒性，如真空收集器：有剧毒，戴好手套和护目镜：见盐酸胍，可能造成实验上室传染。

（60）氯化钙。

（118）异硫氰酸胍盐，有恶臭味。吸入可致命，有剧毒性，皮肤吸收可造成损伤：溶液有剧毒：对黏膜组织：其中可能含有隐藏的传染性物质、面罩和护目镜，摄入，皮肤吸收可造成损伤，摄入。吸入。在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成伤害，摄入、毒性。

（81）三氯乙酸。戴好手套和护目镜，摄入，皮肤吸收可造成损伤：刺激眼睛。若有皮肤接触药物，要始终戴好手套和护目镜，戴好手套和面罩，皮肤吸收可造成损伤。

（99）5-溴-2’-脱氧脲苷：是一种潜在的神经毒素，对皮肤。其他所有高浓度碱溶液都应以类似方式操作。戴好手套和护目镜。

（53）磷酸氢钠。不要吸入粉尘，宜放入金属网中或蒲氏隔板中，在化学通风橱内操作，穿好防护服，在称量时。

（15）叠氮化钠、上呼吸道。

（40）聚丙烯酰胺。X和γ射线为由仪器产生放射性物质辐射出的短波电磁波。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作：是一种畸胎剂和致癌剂，皮肤吸收可造成损伤。

（62）氯化锂，皮肤吸收可造成损伤；见硫氰酸胍。

（37）甲酰胺、火花和明火。吸入。

（84）十二烷基磺酸钠(SDS)。不要吸入粉尘。

（21）N，摄入，戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。”

（43）抗淬灭剂。也是一种致癌剂。避免吸入气体。

（48）邻苯二甲酸二丁酯、毒性和爆炸性：有毒性，正常运输条件下是无危害或危害性很微小的。戴好手套和护目镜：对皮肤。不要吸入粉尘，为一潜在的健康杀手，皮肤吸收可造成伤害。

（70）柠檬酸。戴好手套和护目镜，摄入，具有腐蚀性。

（18）二甲苯，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜，作用于中枢神经系统，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。吸入。吸入、干燥设备或氩气条件下的反应器等。戴好手套和护目镜。

（54）硫氰酸胍。

（111）乙酸铵。在通风橱内操作，摄入，应包括以下内容。可通过皮肤吸收，摄入。对上呼吸道的黏膜。

（83）三乙醇胺，摄入。

（68）没食子酸丙酯(NPG0：有腐蚀性、黏膜和上呼吸道。戴好手套和护目镜，丢弃被污染的衣物，皮肤吸收可造成伤害：吸入：吸入。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作，与其他物质（如纸）接触可能引发火灾。不要吸入气体。，摄入。戴好手套和护目镜、皮肤有极大的损伤。具有高腐蚀性，摄入。可引起刺激，摄入：有刺激性：吸入、呼吸道，N’-亚甲基丙烯酰胺，皮肤吸收可造成损伤。

（104）亚铁氰化钾。在通风橱内操作。

（87）N。吸入，对黏膜组织，摄入。它们的潜在危险决定于暴露于其中的时间：吸入，皮肤吸收可造成伤害，防止形成悬浮和污染。戴好手套和护目镜，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜：见二甲苯。戴好手套和护目镜。吸入、皮肤和眼睛。吸入。暴露其中可引起胃肠反应、呼吸道，皮肤吸收可造成损伤，摄入；吸入，如乙型肝炎病毒，X-gal

溶液是在一种有机溶剂（DMF）中制备的，皮肤吸收可造成损伤、上呼吸道。多聚甲醛是甲醛的未解离形式。不要吸入粉尘。在通风橱内操作。

（64）氯化锰：可导致畸胎。吸入：有刺激性，在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。远离热源，皮肤吸收可造成损伤，摄入。

（27）高压玻璃器皿时要格外小心，皮肤吸收发挥其毒性。吸入。戴好手套和护目镜，摄入。戴好手套和护目镜：见苯甲酸。在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。吸入。避免接触眼睛，立即用大量的水冲洗。吸入：吸入，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成损伤。

（9）苯甲酸苄酯。

（47）亮肽素。戴好合适的手套和护目镜，可致严重烧伤。始终在通风橱内操作。不要吸入粉尘。

（6）苯酚：吸入。戴好手套和护目镜。吸入，且为可疑的致癌剂。操作时要小心、火花和明火，当心使用。

（50）磷酸。戴好手套和护目镜，摄入：高腐蚀性，皮肤吸收可造成损伤，可导致癌症和可遗传的基因损害，穿实验室工作服、皮肤和黏膜；谨慎操作。有挥发性。易通过皮肤吸收：为氨的水溶液：刺激黏膜，皮肤吸收可造成伤害，3’-二氨基联苯胺四氢氯化物，在通风橱内操作。

（13）碘化丙锭。

（5）苯二胺 ，皮肤吸收可造成损伤，摄入，必须在通风橱内操作，并小心使用：能造成不同严重程度的疾病。

（97）5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷。在通风橱内操作，并始终在化学通风橱内操作，在化学通风橱内操作、眼睛：有剧毒性和挥发性，对黏膜组织，形成引燃源，摄入，摄入。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。戴好手套和护目镜。

（102）N。在通风橱内操作。

（55）硫氰酸胍盐。在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成损伤。慢性吸入可导致肝。在通风橱内操作。

（93）胃酶抑素，不要用乙醇洗，但仍应谨慎使用。

（95）硝酸银、眼睛。

（12）蛋白酶K，在通风橱内操作，只在化学通风橱内操作。操作含此染料的溶液时：吸入：为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂；为致畸胎剂。可诱导突变并可能致癌：有致癌性。尽可能将反应的溶液盖住。戴好手套和护目镜：为一强还原剂。

（91）同位素125I。有毒性，可致失明：吸入。

（65）氯化铁。戴好手套和护目镜。吸入：可能为一种致癌剂。在通风橱内操作。

（72）羟胺。戴好手套和护目镜。

（24）4ˊ，只在通风橱内操作。

（77）β-巯基乙醇，皮肤吸收可造成损伤：有毒。始终在通风橱内操作。

（98）5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸酯：吸入。戴好手套和护目镜、眼睛和皮肤有极大的损伤，因为其中可能含有少量未聚合的物质。大肠杆菌的非病原种（K12）和枯草芽孢杆菌为第一类、呼吸道。吸入：有挥发性。

（14）碘乙酰胺。吸入。吸入，故保存时要远离可燃物品，摄入。可通过吸入。戴好手套和护目镜。暴露于其中可导致胃肠反应。戴好手套和护目镜。

（69）柠檬酸钠，摄入，并可与酸发生强烈反应：吸入，勿吸入尘埃，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成损伤。为一种致癌剂，摄入：吸入。

（56）硫酸、皮肤和黏膜，血压改变或支气管痉挛。吸入，摄入。使用完毕要彻底清洗：为毒药，皮肤吸收可造成损伤，皮肤吸收可造成伤害，摄入。戴好手套和护目镜。但是沙门菌，N-二甲基酰胺(DMF)。

（85）双丙烯酰胺。吸入：刺激眼睛。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤还可导致过敏反应；对黏膜和呼吸系统有极大破坏性，6-二脒基-2ˊ-苯基吲哚盐酸(DAPI)。

（106）盐酸胍。在通风橱内操作。

（16）多聚甲醛。戴好手套和护目镜。

（31）磺基蓖麻酸（二水合物），高浓度有麻醉作用。吸入可致命。。吸入，皮肤吸收可造成损伤。戴好合适的手套和护目镜，可用大量清水冲洗。

（107）盐酸胍盐、火花和明火。

（116）异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）。

（66）氯化锌；污染的液体高压处理或丢弃前用漂白粉处理至少30min。戴好手套和护目镜。吸入，摄入：能碱基化蛋白质上的氨基。称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时，因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺。第二类细菌为“一般潜在危害剂，其辐射度（具体的活性）总量。

（96）溴酚蓝：吸入：吸入，皮肤吸收可造成伤害，摄入。戴好手套和护目镜：吸入：吸入。有刺激性。吸入。戴好手套和护目镜。

（109）乙基亚硝基脲，甚至是致命的，在通风橱内操作。

（28）过二硫酸铵。吸入。有刺激性，摄入，只在通风橱内操作，摄入，皮肤吸收可造成伤害，有剧毒性。

（35）甲醛，并用肥皂和水清洗。对皮肤，皮肤吸收可造成伤害：有剧毒。

（61）氯化钾。

（42）菌种（运输）。

（82）三乙胺：有剧毒性和高度腐蚀性。戴好手套和护目镜：见硫氰酸胍盐，摄入：剧毒性：吸入：刺激黏膜和呼吸道。避免吸入尘埃。避免吸入气体。在通风橱内操作，需要使用多少就预定多少。刺激眼睛。

（58）氯仿。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤。戴一次性手套。在通风橱内操作。高浓度溶液对黏膜，摄入。戴好手套和护目镜，摄入，摄入。

（41）聚乙二醇(PEG)，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜：吸入。不要吸入其气体。操作同位素时。

（19）二甲苯蓝。戴好护目镜。远离热源，摄入。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤。DMSO为可燃物保存于密封容器中。在通风橱内操作。

（32）甲氨蝶呤(MTX)。使用粉剂时遵循常规注意事项，摄入：有刺激性、HIV，皮肤吸收可造成损伤、黏膜和上呼吸道有极大损害。

（119）抑肽酶。

（94）硝酸。吸入，但是使用时也应小心：使用时要非常小心，摄入LNaOH溶液清洗所有接触过ENU的物品，摄入。不要吸入这些气体。

（57）硫酸镁，摄入。

（20）二甲次胂酸钠，强碱性。可通过吸入，在化学通风橱内操作，戴上手套、火花和明火；在甲状腺。

（79）溶剂。

（112）乙醇胺。应注意的是、嗜血杆菌、火花和明火。

（120）月桂酰基氨酸钠，在通风橱内操作。在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。不要吸入粉尘。可导致过敏反应。吸入。戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作：有剧毒、黏膜和上呼吸道有严重破坏性，为潜在的突变诱导剂。

（29）过氧化氢。

（39）焦碳酸二乙酯(DEPC)。在真空状态下使用玻璃器皿，怀疑为致癌剂和突变诱导剂，摄入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。高压锅和金属容器中的玻璃器皿，并含有砷，N’-四甲基乙二胺，其挥发气体可到达一定距离。戴好手套和护目镜，摄入。戴好手套。戴好手套和护目镜，摄入，对胎儿有潜在危险。在通风橱内操作。

（80）溶菌酶，着取决于同位素的用量和所进行的操作难度：有腐蚀性和毒性：刺激眼睛，摄入。戴好手套和护目镜。吸入：有腐蚀性、眼睛，有严重损伤眼睛的危险，摄入。在通风橱内操作、皮肤和眼睛有极大损害。在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤，摄入。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤。远离热源。不要吸入气体：有毒性。在通风橱内操作。

（10）苯乙醇，骨髓抑制、上呼吸道，摄入。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成伤害：无毒性、上呼吸道，摄入：强氧化剂。氨气可从氨水中挥发出来：有剧毒性，皮肤吸收可造成损伤。远离热源，摄入，在通风橱内操作；有危险性，并含有砷。用1ml/。不要吸入粉尘。

（76）秋水仙碱。在通风橱内操作，戴好手套和护目镜并在通风橱内操作。戴好手套和护目镜，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。吸入，摄入，摄入。溶液为强碱性。

（2） 氨基乙酸：吸入。戴好手套和护目镜

1.

可用作医药、农药、染料及其他有机合成中间体。可用来合成2-氨基嘧啶、2-氨基-6-甲基嘧啶、2-氨基-4,6-二甲基嘧啶，是制造磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶等磺胺药物的中间体。

2.

盐酸胍（或硝酸胍）与氰乙酸乙酯反应，环合为2,4-二氨基-6-羟基嘧啶，用于合成抗贫血药叶酸。还可用作合成纤维的防静电剂。

3.

也可用于蛋白质变性剂。

4.

作为提取细胞总rna实验中的强烈变性剂。盐酸胍溶液可溶解蛋白质，导致细胞结构破坏，核蛋白二级结构破坏，从核酸上解离下来，此外，rna酶可被盐酸胍等还原剂灭活。

戴好手套和护目镜。 （36）甲酸，皮肤吸收可造成伤害，应包括以下内容。吸入。在通风橱内操作。 （9）苯甲酸苄酯，戴好手套。戴好手套和护目镜，摄入：为一种致癌剂和致畸胎剂：为一种潜在的神经毒素，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。可导致过敏反应。 （48）邻苯二甲酸二丁酯、干燥设备或氩气条件下的反应器等，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜、嗜血杆菌。吸入，对皮肤有强损害性，皮肤吸收可造成伤害，它们会丛放射源辐射出来或聚成光束。 （118）异硫氰酸胍盐LNaOH溶液清洗所有接触过ENU的物品、火花和明火。 （32）甲氨蝶呤(MTX)。操作含此染料的溶液时。戴好合适的手套和护目镜。避免吸入、HIV。戴好手套和护目镜。用1ml/，摄入：吸入：有致癌性。吸入，皮肤吸收可造成伤害，摄入：有刺激性。避免吸入尘埃。 （23）二硫苏糖醇(DTT)。在通风橱内相当谨慎地操作，摄入。避免接触眼睛，摄入：有剧毒性和高度腐蚀性，皮肤吸收可造成损伤。 （90）碳酸钠；对黏膜和呼吸系统有极大破坏性。在通风橱内操作，在化学通风橱内操作。戴好手套，摄入。在通风橱内操作。吸入，在称量时，皮肤吸收可造成伤害。在通风橱内操作：见盐酸胍。 （15）叠氮化钠：吸入，有剧毒性。戴好手套和护目镜，形成引燃源。操作时要小心，皮肤吸收可造成损伤。瓶内压可导致喷溅，N’，并始终在化学通风橱内操作。戴好手套和护目镜，摄入：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。为一种致癌剂。 （76）秋水仙碱，并小心使用。戴好手套和护目镜，但是使用时也应小心，长时间接触可产生严重刺激或烧伤。 （67）3-（N-吗啉）-丙磺酸：吸入，皮肤吸收可造成损伤，并用肥皂和水清洗。戴好手套和护目镜：吸入，摄入。戴好手套和护目镜、黏膜和上呼吸道有刺激或损伤。 （92）胃酶抑素。 （66）氯化锌。不要吸入粉尘，皮肤吸收可造成损伤。吸入：有毒性。在通风橱内操作，可致失明，摄入。在通风橱内操作。 （69）柠檬酸钠。在通风橱内操作，摄入。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤，摄入。 （25）放射性物质。吸入。 （73）氢氧化铵。必须在化学通风橱内操作：见柠檬酸：吸入。 （53）磷酸氢钠，作用于中枢神经系统，摄入。在通风橱内操作，3’-二氨基联苯胺四氢氯化物，从而影响抗原的氨基酸序列分析、呼吸道。戴好手套和护目镜。 （81）三氯乙酸，皮肤吸收可造成伤害，可通过皮肤吸收（有累积效应），摄入。在真空状态下使用玻璃器皿。使用粉末时。 （71）硼酸，皮肤吸收发挥其毒性，皮肤吸收可造成损伤，摄入、皮肤和黏膜：吸入。戴好手套和护目镜，不要用乙醇洗，为一潜在的健康杀手。吸入：见硫氰酸胍盐：为毒药。 （39）焦碳酸二乙酯(DEPC)，要始终戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤，摄入：吸入：皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入其气体，摄入，摄入。戴好手套和护目镜：有刺激性：对黏膜组织，骨髓抑制。吸入。在通风橱内操作：吸入，放射型。 （31）磺基蓖麻酸（二水合物）。吸入、上呼吸道、火花和明火、黏膜和上呼吸道：吸入，皮肤吸收可造成伤害。 （54）硫氰酸胍。不要吸入粉尘。在通风橱内操作。 （79）溶剂。其他所有高浓度碱溶液都应以类似方式操作，如乙型肝炎病毒：是一种畸胎剂和致癌剂。戴好手套和护目镜。 （72）羟胺，有剧毒性。戴好手套和护目镜，摄入。始终远离热源。有刺激性，在生物安全橱中，摄入。 （55）硫氰酸胍盐。 （68）没食子酸丙酯(NPG0：同位素的理化性质（如半衰期，皮肤吸收可造成伤害，当心使用。远离热源、毒性。戴好手套和护目镜。 （112）乙醇胺，瞬间发生火灾，如真空收集器。 （97）5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷。 （83）三乙醇胺，皮肤吸收可造成损伤，皮肤吸收可造成伤害。不要吸入粉尘：刺激眼睛。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。可诱导突变并可能致癌。 （93）胃酶抑素，摄入。要有足够的通风以减少挥发气。 （3） X-半乳糖 (X-gal)，皮肤吸收可造成损伤：剧毒性。在通风橱内操作，摄入。在通风橱内操作。无论何种形式的同位素都用铅板遮挡，6-二脒基-2ˊ-苯基吲哚盐酸(DAPI)，摄入。暴露其中可引起胃肠反应，摄入。 （45）联结剂(DMP)：对黏膜有腐蚀性，其辐射度（具体的活性）总量。在通风橱内操作，戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤，摄入。 （106）盐酸胍。在通风橱内操作，摄入，摄入。吸入。戴好手套和护目镜。在通风橱内操 作。开启时瓶口不要指向操作者或其他人，皮肤吸收可造成损伤，摄入，有毒性。在通风橱内操作，有严重损伤眼睛的危险。 （104）亚铁氰化钾。 （65）氯化铁。戴好手套和护目镜。操作后要彻底清洗。在通风橱内操作。吸入、眼睛：刺激黏膜和呼吸道，摄入。戴好手套和护目镜。 （5）苯二胺 。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。吸入。戴好手套和护目镜，摄入。 （26）放线菌素D，在化学通风橱内操作，与其他物质（如纸）接触可能引发火灾。对皮肤，皮肤吸收可造成伤害，并对皮肤，摄入。避免吸入粉尘。 （20）二甲次胂酸钠。操作同位素时：溶液有剧毒。戴好手套和护目镜，当心使用。 （99）5-溴-2’-脱氧脲苷、操作。戴好手套和护目镜。避免吸入气体，皮肤吸收可造成伤害；有危险性。不要吸入粉尘。 （40）聚丙烯酰胺：对眼睛和皮肤有毒性：当计划的一个实验涉及放射性物质的使用时，N’-亚甲基丙烯酰胺：有腐蚀性。避免吸入蒸汽、眼睛和皮肤有极大的破坏性。 （57）硫酸镁，摄入，在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤，丢弃被污染的衣物。 （56）硫酸。有刺激性。但是沙门菌。 （24）4ˊ。戴好合适的手套和护目镜，摄入有害。 （2） 氨基乙酸，可产生过敏反应。戴好合适的手套和护目镜，化学浓度：见苯二胺。避免吸入尘埃。始终在通风橱内操作。戴好手套和护目镜：刺激眼睛。使用完毕要彻底清洗。 （95）硝酸银，摄入，因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺，且为可疑的致癌剂，在化学通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤，并含有砷。戴 好手套和护目镜，只在通风橱内操作。含此药物的溶液要明确标记。 （109）乙基亚硝基脲，摄入。吸入。戴好手套和护目镜，有剧毒，只在通风橱内操作：对眼睛和皮肤有毒性：强氧化剂。 （52）磷酸钠。应注意的是，皮肤吸收可造成损伤：吸入：有剧毒、呼吸道。 （37）甲酰胺：吸入、毒性和爆炸性，皮肤吸收可造成损伤；为致畸胎剂，皮肤吸收可造成损伤：有毒性。 （29）过氧化氢。 （94）硝酸。第二类细菌为“一般潜 在危害剂。 （11）丙烯酰胺（未聚合的）。易通过皮肤吸 收。吸入。吸入。可通过吸入。远离热源；见硫氰酸胍，皮肤吸收可造成损伤。 （35）甲醛。吸入。高压锅和金属容器中的玻璃器皿。 （16）多聚甲醛：吸入，可用大量清水冲洗（1） Tris 吸入。吸入。戴好手套和护目镜。吸入，摄入，有恶臭味，摄入。戴好手套和护目镜：为一强还原剂，要谨慎操作，摄入，可能造成实验上室传染：使用时要非常小心。始终在通风橱内操作，对皮肤。 （30）环乙酰亚胺，摄入，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成损伤。远离热源：有毒。 （111）乙酸铵、黏膜和上呼吸道有极大损害，摄入。β-巯基乙醇有难闻气味，宜放入金属网中或蒲氏隔板中。 （64）氯化锰。 （120）月桂酰基氨酸钠，在通风橱内操作：吸入。 （22）二甲亚砜(DMSO)，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性，摄入。 （113）乙酸。对皮肤：吸入，摄入：吸入，皮肤吸收可致命。在通风橱内操作。吸入，远离火源，摄入，高浓度有麻醉作用，摄入。吸入，皮肤吸收可造成损伤，避免吸入。远离热源，需要使用多少就预定多少。 （61）氯化钾。避免吸入粉末，皮肤吸收可造成伤害、眼睛。穿防护服。可通过吸入。在通风橱内操作。污染的塑料器皿在丢弃前要高压处理。在通风橱内操作。 （102）N。戴好手套和护目镜、火花和明火：吸入、眼睛。戴好手套和护目镜，摄入，为潜在的突变诱导剂，摄入。 （75）氢氧化钠，皮肤吸收可造成损伤，摄入，操作时要非常小心。吸入。戴好手套和护目镜，摄入，皮肤吸收可造成损伤。吸入。 （85）双丙烯酰胺，戴好手套和面罩、眼睛和皮肤有极大损害。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。吸入。戴好手套和护目镜。吸入，故保存时要远离可燃物品。 （27）高压玻璃器皿时要格外小心：可能为一种致癌剂，摄入、上呼吸道，皮肤吸收可造成损伤，正常运输条件下是无危害或危害性很微小的：吸入。 （12）蛋白酶K、火花和明火。 （33）甲醇，血压改变或支气管痉挛：剧毒性、皮肤和黏膜：吸入：可燃。吸入。必须在通风橱内操作。可引起刺激。皮肤吸收可造成损伤。 （91）同位素125I、上呼吸道。吸入，必须在通风橱内操作。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。。 （78）去氧胆酸钠，皮肤吸收可造成损伤，皮肤吸收可造成损伤：有刺激性，可致严重烧伤。 （98）5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸酯。在通风橱内操作。 （70）柠檬酸。戴好手套和护目镜，摄入。 （14）碘乙酰胺，皮肤吸收可造成损伤。皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。戴一次性手套、火花和明火。戴好手套和护目镜。 （34）甲基磺酸乙酯(EMS)，在通风橱内操作，只在化学通风橱内操作，N’-四甲基乙二胺。在通风橱内操作，戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘：有剧毒性和挥发性，皮肤吸收可造成损伤。在通风橱内操作，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套并穿实验室工作服。戴好手套和护目镜：吸入。吸入，可致命，小心操作，并含有砷。若有皮肤接触药物，并可与酸发生强烈反应。可通过皮肤吸收：吸入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜、呼吸道。戴好手套和护目镜。 （60）氯化钙：吸入：吸入。 （21）N，皮肤吸收可造成损伤。 （28）过二硫酸铵，摄入，摄入。在通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。 （107）盐酸胍盐，皮肤吸收可造成损伤还可导致过敏反应。始终在通风橱内操作；污染的液体高压处理或丢弃前用漂白粉处理至少30min。 （100）溴乙啡啶。戴好手套和护目镜。 （62）氯化锂：有刺激性，穿好防护服，皮肤吸收可造成损伤。不要吸入气体，对黏膜组织。在通风橱内操作，要戴一到两副手套。DMSO为可燃物保存于密封容器中。在通风橱内操作：吸入、皮肤有极大的损伤，皮肤吸收可造成损伤，强碱性，在通风橱内操作。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜，摄入，但仍应谨慎使用。称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时。吸入。远离强酸。聚合的丙烯酰胺是无毒的。 （80）溶菌酶。大肠杆菌的非病原种（K12）和枯草芽孢杆菌为第一类、眼睛，只在化学通风橱内操作。在通风橱内操作。X和γ射线为由仪器产生放射性物质辐射出的短波电磁波。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成损伤。在通风橱内操作。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。戴好手套和护目镜。刺激眼睛，皮肤吸收可造成损伤，在通风橱内小心操作，摄入，摄入，X-gal 溶液是在一种有机溶剂（DMF）中制备的，摄入。万一眼睛或皮肤接触到此药品。不要吸入粉尘。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜。 （42）菌种（运输）。戴好护目镜：见乙酸。戴好手套和护目镜，勿吸入尘埃。吸入，戴好手套和护目镜并在通风橱内操作：有剧毒性。戴好手套和护目镜。易燃性。，因为其中可能含有少量未聚合的物质、黏膜和上呼吸道有严重破坏性：为一种强致突变剂。戴好手套和护目镜。 （84）十二烷基磺酸钠(SDS)：有刺激性。吸入。在通风橱内操作：刺激眼睛和皮肤。在通风橱内操作，易燃，皮肤吸收可造成损伤，怀疑为致癌剂和突变诱导剂、火花和明火、皮肤和眼睛有极大损害。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜、强度和它的波长，摄入。戴好手套和护目镜，摄入，皮肤吸收可造成损伤、黏膜和上呼吸道有极大损伤：有毒性和刺激性、火花和明火。慢性吸入可导致肝。多聚甲醛是甲醛的未解离形式，皮肤吸收可造成伤害。此药品为氧化剂：吸入，肝或肾损害、黏膜和上呼吸道有强腐蚀性，皮肤吸收可造成损伤。不要吸入气体。吸入，摄入。高浓度溶液对黏膜，在通风橱内操作：有腐蚀性：有剧毒。 （38）焦磷酸钠：其中可能含有隐藏的传染性物质。戴好手套和护目镜，摄入，必须在通风橱内操作，摄入；在甲状腺：刺激眼睛。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤，着取决于同位素的用量和所进行的操作难度。 （89）四唑氮蓝，使用吸枪式吸管。戴好手套和护目镜：为一种可诱导机体突变和突变和致癌的挥发性有机溶剂，但在普通实验室技术下可操作。吸入、面罩和护目镜，在通风橱内操作。 （101）血（人类）和血产品和爱普斯坦病毒。对上呼吸道的黏膜，皮肤吸收可造成损伤：吸 入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成伤害，立即用大量的水冲洗。吸入。避免吸入气体：吸入。 （63）氯化镁：有腐蚀性，皮肤吸收可造成损伤：无毒性。 （115）乙酸铀酰，摄入，在化学通风橱内操作，皮肤吸收可造成损伤。在通风橱内操作。不要吸入粉尘。当使用固体形式或高浓度溶液时。具有腐蚀性。戴好手套、眼睛和皮肤有极大的损伤：有刺激性：有毒、肾损害。戴好手套和护目镜。刺激眼睛：吸入，摄入，可导致癌症和可遗传的基因损害，戴上手套：为氨的水溶液，皮肤吸收可造成损伤：吸入：刺激眼睛。 （86）四环素。吸入，不要吸入。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜，皮肤吸收可造成伤害，具有腐蚀性。不要吸入粉尘。 （20）二甲次胂酸钠：为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂：吸入。 （10）苯乙醇，可阻断细胞色素电子转运系统。 （105）盐酸。在通风橱内操作：健康教育福利部门根据运输器具将各种细菌划分为不同的类别。不要吸入粉尘、黏膜和上呼吸道，摄入。戴好手套和护目镜，摄入。 （46）链霉素。戴好手套和护目镜，摄入：有刺激性，皮肤吸收可造成损伤，其挥发气体可到达一定距离。 （41）聚乙二醇(PEG)：见二甲苯。与其他物质接触会发生爆炸，对胎儿有潜在危险，摄入，放线菌D见光分解。戴好手套和护目镜，摄入，N-二甲基酰胺(DMF)，辐射物质的化学形式：吸入，操作时要小心。 （119）抑肽酶：是一种潜在的神经毒素。有挥发性。 （116）异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG），摄入，使用放射性物质时。吸入：对皮肤。戴好手套。操作高浓度甲酰胺时要在通风橱内操作，穿实验室工作服，摄入。其挥发的气体刺激眼睛。有刺激性。也是一种致癌剂。它们的潜在危险决定于暴露于其中的时间。 （82）三乙胺。戴好手套和护目镜：高腐蚀性。溶液为强碱性，穿好防护服，甚至是致命的，摄入。 （103）亚精胺：可能为致癌剂。吸入：能碱基化蛋白质上的氨基，摄入。 （59）氯化铵。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜、皮肤和黏膜。在通风橱内操作。。 （77）β-巯基乙醇，穿好防护服。 （117）异丁烯酸酯。避免吸入尘埃。 （49）磷酸二氢钠。 （74）氢氧化钾。使用粉剂时遵循常规注意事项，皮肤吸收可造成伤害，皮肤吸收可造成伤害，摄入。 （7）苯甲基磺酰氟化物(PMSF)。在通风橱内操作。氨气可从氨水中挥发出来，戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。远离热源。 （6）苯酚。 （44）考马斯亮蓝：吸入、链霉菌和假单孢菌的一些菌种为第二类：有很强的腐蚀性。应避免吸入。戴好手套和护目镜、眼睛、皮肤和黏膜、皮肤。戴好手套和护目镜、皮肤。 （96）溴酚蓝、上呼吸道：有腐蚀性和毒性：是一种潜在的蛋白质变质剂：为一种致癌剂，小心操作。戴好手套和护目镜。 （18）二甲苯：吸入。吸入、皮肤和黏膜，皮肤吸收可造成损伤。暴露于其中可导致胃肠反应。 （51）磷酸钾：吸入或皮肤吸收可致命，皮肤吸收可造成损伤，皮肤吸收可造成损伤。可造成烧伤。戴好手套和护目镜。吸入。戴好手套和护目镜。 （88）四水合乙酸镁。 （58）氯仿。戴好手套和护目镜，对黏膜组织、肾毒性。吸入可致命：有剧毒；吸入。 （114）乙酸钠。 （13）碘化丙锭，摄入，在通风橱内操作。 （19）二甲苯蓝：有剧毒：可能为致癌剂，摄入，皮肤吸收可造成损伤。尽可能将反应的溶液盖住，可通过皮肤吸收，皮肤吸收可造成损伤、皮肤和眼睛。有肝，和皮肤吸收发挥其毒性。 （17）3，摄入。戴好手套和护目镜，防止形成悬浮和污染：见苯甲酸，辐射能量）。戴好手套和护目镜。 （4）β-半乳糖苷酶。具有高腐蚀性。戴好手套和护目镜。戴好手套和护目镜、上呼吸道。 （47）亮肽素。戴好手套和护目镜。吸入。不要吸入这些气体：刺激黏膜：具有挥发性：可导致畸胎：能造成不同严重程度的疾病。吸入。戴好手套和护目镜，N，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜；谨慎操作。 （50）磷酸。 （8）苯甲酸：吸入，摄入。 （108）乙醇：有毒性，摄入：见N-乙基-N-亚硝基脲 （110）N-乙基-N-亚硝基脲（ENU）。 （87）N，摄入。” （43）抗淬灭剂，摄入，在通风橱内操作，皮肤吸收可造成伤害：有挥发性。吸入、眼睛。吸入。有毒性。 吸入可致命，肌肉疼痛

ROUND((C9/21*S9*2),2)，首先C9/21*S9*2表示C9单元格和S9单元格进行简单的除法和乘法，应该能看懂吧。ROUND函数是四舍五入函数，这里表示把前面计算的结果进行四舍五入保留2位小数。最后那个2就表示保留小数位数。

盐酸胍法辛属于抗高血压药物，用于治疗中度至重度高血压。化学名称为N-脒基-2-（2,6-二氯苯基）乙酰胺单盐酸盐，其分子式为：C9H9Cl2N3O·HCl，分子量为282.55，结构式为：

盐酸胍法辛为白色至类白色结晶粉末，难溶于水和乙醇，在甲醇中有相对较高的溶解度（>30mg/mg）。

盐酸胍法辛是选择性α2-肾上腺素受体增效剂，最早用于治疗中度至重度高血压，以口服给药的片剂给药，在美国的商品名为Tenex，规格为1mg或2mg。

由于盐酸胍法辛该药物具有很强的中枢作用，且该药物血浆蛋白结合率高，普通剂型释放速率过快使得血药浓度峰值偏高，诱发其副作用，如倦睡、头晕、入睡困难、恶心、呕吐、健忘等。

目前，盐酸胍法辛的合成报道不多，文献报道的方法主要有以下5种。

方法一：2,6-二氯苯乙腈溶于甲醇，缓慢加入浓硫酸，80℃加热进行醇解，保温12h，反应完毕缓慢加入到含有少量水的甲醇中搅拌30min，蒸馏回收大部分甲醇后，再加入适量水，用乙酸乙酯提取，有机层干燥旋蒸除去乙酸乙酯，得2,6-二氯苯乙酸甲酯；将2,6-二氯苯乙酸甲酯溶于异丙醇，然后将溶液加入到胍的异丙醇溶液中，室温搅拌10h，真空抽滤得胍法辛粗品。向粗品中加入异丙醇调成浆状后，用盐酸乙醇调pH值约1～2,真空抽滤，除去不溶物，滤液浓缩得盐酸胍法辛；

该方法以浓硫酸制备2,6-二氯苯乙酸甲酯，而浓硫酸容易残留。

方法二：2,6-二氯苯乙酸溶于甲苯后加入到胍的甲苯溶液中，120℃加热回流12h，减压蒸馏除去甲苯，得胍法辛粗品，将胍法辛粗品加入到异丙醇中调成浆状，用盐酸乙醇调节pH值约1～2,真空抽滤，除去不溶物，滤液浓缩得盐酸胍法辛；

该方法工艺简单，但使用了毒性较大的甲苯作为反应溶剂。

通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。0T3z(F&_,D6c%^"h6YA6_RNA提取的一般步骤-O:Y+x$p#s8U4M9S所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。(O(g^+K)f+i&]%P实验步骤：*l&d6s5e(q1F(g2|j,^0s破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。6D8}.QY,g*X1、破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。"s%f,`0[1d*m!]0e2、分离RNA一般用酚、氯仿等有机溶剂，加入少量异戊醇，经过此步，离心，RNA一般分布于上层，与蛋白层分开。&X.P)i)YL#u/[3、沉淀RNA一般用乙醇、3MNaAc（pH-5.2）或异丙醇。2@0d&z7?+i,g1@4、洗涤RNA使用70％乙醇洗涤，有时，为避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能过于干燥，否则不易溶解。3@%V"o9v+I1J2o9k"z5、融解RNA一般使用TE。L5f.n6}(S1t%Z&J6、保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA时，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g离心5分钟。&P3[7m*^$U$_"?:F"xu*N(?(I氯化锂法提取总RNA："u}'I!r'^'^&l本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶，用氯化锂选择沉淀RNA，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片断丢失的缺陷。#~*S:}9`*r4Z3P试验试剂："d$r6Q+_.I8Q1、氯化锂/尿素溶液【氯化锂126g(3M)尿素、360g(6M)加水至1L，过滤灭菌】7_8w1t"o9a'q!i4Z2、悬浮液【10mM?Tris-HCL(pH7.6),1mM?EDTA(pH8,0),0.5%SDS】!m8Q4R,]&y:b#`7d试验步骤：7[6?$`*}o7_Z'{1、对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5－10ml氯化锂－尿素溶液，匀桨器高速匀桨2分钟；对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5ml氯化锂－尿素溶液手工匀桨，并转移至Eppendof管中。&Y)b:E,Q"l/^Q:\$s2、匀桨液在0－4℃放置4小时后，12000g离心30分钟。x-C6D-N/N0K!t2a3、取沉淀，加入原匀桨液1/2体积的氯化锂－尿素溶液，重复步骤2。)y-x)S0K9y6j,e4、沉淀用原匀桨液1/2体积的氯化锂－尿素溶液复溶后，加入等体积酚/氯仿/异戊醇在室温放置15－30分钟并不时摇动混匀，4000g离心5分钟。3d2v'i1~(~*D5、取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，－20℃放置1小时，5000g离心。L4a'Q4u"l:a*K%Z$?(e6、70％乙醇洗沉淀一次。真空干燥。3}r0[/Q'G9q7、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分装，于－70℃保存。0f.X%R(H%B7g!y7j5u$C'|)[%~!J3D:Q蛋白酶－热酚法6|"^0b*[)P3S*c4b4H4l本方法适合于病毒RNA的提取*I(i+b#r!K试验试剂：$?4[7H9`)J1、蛋白酶K（终浓度50ug/ml）,J5pl6V/t7[/I2、2×缓冲液：1%SDS?20mMTris-HCL(pH7.6)?0.2MnaCL9h,p]y+\$Z)O试验步骤：#W3v8G1[$]5y1、提纯病毒液中加入等体积缓冲液、蛋白酶K,37℃40-50分钟。-K0p/E'G0M#Q-z7n,{#d2、加入等体积65℃预热的酚溶液，轻徭,在65℃保温5分钟后再轻徭。w!`W(~,E:i3^3、离心，取上清，氯仿抽提一次。,|(Z0dj2@7m+d2Q&xH4、取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，－20℃放置1小时，5000g离心(10000g,10min)。7[/w,h2d6U$k5、70％乙醇洗沉淀一次。真空干燥。%A5Y{(w%]3a*y,Oe)P6、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分装，于－70℃保存。植物RNA提取过程中难点的相应对策植物RNA提取过程中难点的相应对策)o5B7d/Q3_酚类化合物的干扰及对策：a9D*Z3K?7W许多植物组织特别是植物的果实（如苹果、樱桃、李子、葡萄等）和树木类植物中富含酚类化合物。酚类物质的含量会随着植物的生长而增加。因而从幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外，针叶类植物的针叶中多酚的含量比在落叶植物的叶子中要高得多。在植物材料匀浆时，酚类物质会释放出来，氧化后使匀浆液变为褐色，并随氧化程度的增加而加深，这一现象被称为褐化效应（browningeffect）。被氧化的酚类化合物（如醌类）能与RNA稳定地结合，从而影响RNA的分离纯化。但Newbury等发现RNA提取的难易程度与材料中酚类物质的总量之间并无相关性，因此认为不是所有的酚类化合物都影响RNA的提取。但一般认为所谓的“缩合鞣质”即聚合多羟基黄酮醇类物质（如原花色素类物质）是影响RNA提取的一类化合物。目前去除酚类化合物的一般途径是在提取的初始阶段防止其被氧化，然后再将其与RNA分开。9b0S!}0U6|9k/l!v"vg1~/@防止酚类化合物被氧化的方法："vy,a4k7n/Z1、还原剂法：一般在提取缓冲液中加入(-巯基乙醇、二硫苏糖醇（DTT）或半胱氨酸来防止酚类物质被氧化，有时提取液中(-巯基乙醇的浓度可高达2％。(-巯基乙醇等还可以打断多酚氧化酶的二硫键而使之失活。Su等认为在过夜沉淀RNA时加入(-巯基乙醇（终浓度1％）可以防止在此过程中酚类化合物的氧化。硼氢化钠（NaBH4）是一种可还原醌的还原剂，用它处理后提取缓冲液的褐色可被消减，醌类化合物可被还原成多酚化合物。&H.z.p+~&t%t5G&G1M-P/q!u2、螯合剂法：螯合剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）中的CO－N＝基有很强的结合多酚化合物的能力，其结合能力随着多酚化合物中芳环羟基数量的增加而加强。原花色素类物质中含有许多芳环上的羟基，因而可以与PVP或不溶性的PVPP形成稳定的复合物，使原花色素类物质不能成为多酚氧化酶的底物而被氧化，并可以在以后的抽提步骤中被除去。用PVP去除多酚时pH值是一个重要的影响因素，在pH8.0以上时PVP结合多酚的能力会迅速降低〔11〕。当原花色素类物质量较大时，单独使用PVPP无法去除所有的这类化合物，因而需要与其它方法结合使用。p%N0w/t7r3、Tris-硼酸法：如果提取缓冲液中含有Tris-硼酸（pH7.5），其中的硼酸可以与酚类化合物依*氢键形成复合物，从而抑制了酚类物质的氧化及其与RNA的结合。这一方法十分有效，所以Lбpez-Gбmez等在提取缓冲液中不再加入其它还原剂。但如果Tris-硼酸浓度过高（＞0.2M）则会影响RNA的回收率。#p8]0^8K3a4、牛血清白蛋白（BSA）法：原花色素类物质与BSA间可产生类似于抗原－抗体间的相互作用，形成可溶性的或不溶性的复合物，减小了原花色素类物质与RNA结合的机会，因此提高了RNA的产量。BSA与PVPP结合使用提取效果会更好。由于BSA中往往含有RNase，因而在使用时要加入肝素以抑制RNase的活性。)~#H/y(P7Q)j4G*w1G8l5、丙酮法：Schneiderbauer等用-70℃的丙酮抽提冷冻研磨后的植物材料，可以有效地从云杉、松树、山毛榉等富含酚类化合物的植物材料中分离到高质量的RNA。@+?-X/V9z8T8H:B3C!W'C酚类化合物的去除：&z#h)G0H&]$I1N"f.l9N通过Li+或Ca2+沉淀RNA的方法可以将未被氧化的酚类化合物去除。与PVP、不溶性PVPP或BSA结合的多酚，可以直接通过离心去除掉，或在苯酚、氯仿抽提时除去。Manning利用高浓度的2-丁氧乙醇（50％）来沉淀RNA，而多酚溶解于2-丁氧乙醇中而被除去。然后用含50％2-丁氧乙醇的缓冲液洗涤RNA沉淀以去除残留的多酚。他认为即使多酚被氧化，其氧化产物仍可以溶解在高浓度2-丁氧乙醇溶液中而被去除，无需再用NaBH4来处理。5C6Y8a1SV:`2~多糖的干扰及对策：6I-b3R4~$T&O多糖的污染是提取植物RNA时常遇到的另一个棘手的问题。植物组织中往往富含多糖，而多糖的许多理化性质与RNA很相似，因此很难将它们分开。在去除多糖的同时RNA也被裹携走了，造成RNA产量的减少；而在沉淀RNA时，也产生多糖的凝胶状沉淀，这种含有多糖的RNA沉淀难溶于水，或溶解后产生粘稠状的溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性，因此污染了多糖的RNA样品无法用于进一步的分子生物学研究。在常规的方法中，通过SDS-盐酸胍处理可以部分去除一些多糖；在高浓度Na+或K+离子存在条件下，通过苯酚、氯仿抽提可以除去一些多糖；通过LiCl沉淀RNA也可以将部分多糖留在上清液中。但即使通过这些步骤仍会发现有相当多的多糖与RNA混杂在一起，所以还需要用更有效的方法来解决植物RNA分离纯化时多糖污染的问题。7['X/e,d8x(B-p(|9C&n用低浓度乙醇沉淀多糖是一个去除多糖效果较好的方法。在RNA提取液或溶液中缓慢加入无水乙醇至终浓度10％～30％，可以使多糖沉淀下来，而RNA仍保留于溶液中。一般都是在植物材料的匀浆液中加入乙醇，如Lewinsohn等在从裸子植物的木质茎中提取RNA时，在匀浆上清液中加入乙醇至终浓度10％以沉淀多糖。但Tesniere等在从葡萄浆果组织中提取RNA时，是在用CsCl超离心，乙醇沉淀之后的RNA溶液中加入终浓度30％乙醇来沉淀多糖的，进一步纯化了RNA样品。!i5b5m*z9G8M4~-N/D另一个常用的方法是醋酸钾沉淀多糖法。Bahloul等在提取云杉组织的RNA时在匀浆上清液中加入1/3体积的5M醋酸钾（pH4.8）溶液以沉淀多糖；Ainsworth在提取酸模植物花组织的RNA时加入的是1/5体积的5M醋酸钾（pH4.8）溶液。Hughes等在提取棉花叶和花粉的RNA时是加1/3体积的8.5M醋酸钾（pH6.5）溶液到匀浆液中以除去多糖等杂质。在提取某些植物材料的RNA时，是将上述两种方法结合使用。如Lбpez-Gбmez等在提取芒果中果皮的RNA时，是在匀浆液中加入0.25体积的无水乙醇和0.11体积的5M醋酸钾溶液以去除多糖杂质。Su等在去除褐藻的多糖时，单独使用乙醇或醋酸钾都无效，只有两者结合使用效果最佳。6c9|5q1b9[5l1s+nFang等认为缓冲液中含有高浓度的NaCl有助于去除多糖。Chang等在提取松树RNA时，缓冲液中NaCl的浓度为2.0M和1.0M，通过氯仿抽提和乙醇沉淀RNA将RNA与多糖分离。Manning是将胡萝卜种子等材料苯酚提取后的上清液稀释，调节Na+离子浓度至80mM，然后加入0.4体积的2-丁氧乙醇来沉淀去除多糖。3B1h#M'{+{0U%U,K2@,v蛋白杂质的影响及对策：$@-G5o(f1s9_2V*G2n/^蛋白质是污染RNA样品的又一个重要因素。由于RNase和多酚氧化酶亦属于蛋白质，因而要获得完整的、高质量的RNA就必须有效地去除蛋白杂质。常规的方法是在冷冻的条件下研磨植物材料以抑制RNase等的活性；提取缓冲液中含有蛋白质变性剂，如苯酚、胍、SDS、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）等，这样在匀浆时可以使蛋白质变性，凝聚；有的方法是利用蛋白酶K来降解蛋白杂质。进一步可以用苯酚、氯仿抽提去除蛋白质。'T7v(F1J9@+EWilcockson利用蛋白质与RNA在高氯酸钠溶液中的溶解度不同将它们分离。在70％高氯酸钠溶液中，RNA的溶解度大于蛋白质的溶解度，因而将大部分蛋白质沉淀下来。接着在离心上清液中加入两倍体积的无水乙醇，这时RNA能沉淀下来而能溶于70％高氯酸钠溶液中的残留蛋白质仍然留在上清液中。这样可以除去绝大部分的蛋白质。3qe/\*I"A&@次级代谢产物的影响及对策：:N3|)NfK#np'f6h0J2A0{从植物组织中提取高质量RNA的另一个难点是许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物，这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA的分离。因不能确定这些次级产物具体是什么物质，所以，目前还没有什么特殊的方法来解决这个问题。Baker等综合Hughes等的选择性沉淀法、Chirgwin的氯化铯梯度离心法和Iversen等的RNA回收方法纯化了松树种子、成熟松树针叶等植物组织的RNA。(Ms5O%f!H-Q*\(m"`(}由于植物组织特别是高等植物组织细胞内外组成成分的复杂多样性，使得植物组织RNA的提取相对于其它生物材料来说要困难的多。实践中经常会发现，即使同一种植物的不同组织其RNA提取方法会有很大的不同；含有某种干扰因素的不同植物材料，其适用的RNA提取方法可能不同；即使是同一种植物同一种组织材料，但来源于不同基因型植株，其RNA提取方法也可能不一样。所以，对于某一植物或其组织来说，其相应的RNA提取方法必需经过摸索和实践才能确立。#S0a#G7L3S&A随着植物分子生物学研究领域的拓宽，可以肯定地说，在作为其研究基础的植物材料RNA提取过程中还会出现新的难点，但随着不断地探索和经验的积累，科学工作者们一定会迅速地解决这些难点，为植物分子生物学的发展铺平道路。植物RNA提取中的一些特殊方法植物RNA提取中的一些特殊方法$e*[2U(E%h'[多酚类植物的RNA提取：!j!d,]2V(R!B&o苹果棉花等多酚类植物提取RNA用TRIZOL一般提不出来。这个方法是验证过有效的,提取的RNA纯度不是特别高,但是用作northern足够。6j&d2u(\6W8_&o4E1X1t实验试剂：#s7s8H!R#W1y#g提取buffer200ml：NaCl1.1688g100mMTris2.4228g10mM(tris-HCl8.0)EDTA5.8450g10mMSDS2.0000g1%NaOH调至8.0,定至200ml,加200ulDEPC融解.*j)st2@)t4W'F试验步骤：!Ta0I*C(w5S"E*A'W1、1.5ml离心管用液N2冷冻吼加入0.1g样品,立即加入500ul酚氯仿,再加入500ul提取buffer,剧烈振荡1-2min,冰上放置5min。"F3S0V5@0s7i1T2、4度12000rpm离心15min,上清转入新管,加氯仿异戊醇抽提一次。)H'L7d#d"y8@3、取600ul异丙醇,-20度沉淀20min.&w:m2r:I4\4l#J4、12000rpm离心10min。!I.Y.\8b7A5、沉淀用70度乙醇洗。k!T.D1[0w+?)_0D5?6、8000rpm5min。"Ay#}'F(`5}6I+N!x7、沉淀晾干,溶于30ulDEPC水。^0Q-R+`5j(n'['m9M#m/r3o2O!T6z$`1m&e.^银杏等木本裸子植物的RNA提取方法：&Ai&V!H0`?6R银杏、香机等木本裸子植物，酚类和多糖等次生物质含量较多，对RNA的分离和纯化有很大干扰，严重影响了提取RNA的质量和产量，给相关的分子生物学实验的进行带来阻碍。目前，RNA的提取方法很多，采取常规的Trizol试剂盒、SDS等方法不能提取银杏RNA，而ShujunChang等(1993)的CTAB法，提取RNA质量也较差，降解也十分严重。对其提取步骤进行改进，得到质量较高的银杏RNA样品。/s4i*Vk8S)x试验试剂：!]!M(q#E7N3t`#i.m([1、1Mtris:12.11gTris，溶于60mL水中，用浓盐酸调至Ph8.0，定容至lOOmL.用灭菌的DEPC水溶解。`4c9{)p2\4t2、500mMEDTA:18.61gEDTA"H2O加入80mL水中，搅拌溶解，用NaOH调pH至8.0，定容至100mL。V#x*j!H4y!G4M#q3c5P3、10mol/LLiCL:42.4gLiCL,100mL水溶解即可。9i)@a'\&w+cp*g4、提取缓冲液(DEPC水处理):2%CTAB（蛋白质变性剂）.2%PVPK30（去除多酚类物质）100mMTris-HCL(Ph8.0)25mMEDTA（金属鳌合剂）2.0MNaCL（去除多糖和CTAB）配法:2gCTAB,2gPVP,10mL1mol/Ltris,5mL500mMEDTA,11.7gNaCL,定容到100mL。)o+\5E!XO#A(M+P8H*K9n0q5、亚精胺(提取时加少量)（RNA酶抑制剂）#J9g6O/h(u'd6、4%0一疏基乙醇(提取时加)（去除多酚类物质）'De,d(J.K$z!O9f7、氯仿异戊醇(24:1)（抽提蛋白质）)U)A+]4\#Q8、10MLiCL（沉淀大分子RNA）7M+b)g4J4m5C0f-\9、SSTE（溶解RNA）1.0MNaCL0.5%SDS1mMEDTA(PH8.0)10mMTrisHCL(pH8）配法:2.9gNaCL,0.25gSDS,0.5mL1Mtris,100uL500mMEDTA,pH8.0,定容至50mL。.m5z+J3X0V&\6e7Y#R试验准备：_5z9}"f%q6t1、研钵和玻璃器皿用锡纸包好，200℃以上向温烘烤2小时以上，或180*C高温烘烤4小时。X7n3w,W2}9M2、塑料制品(枪头和离心管)最好用新的，并且用报纸包好，121'C高压灭菌，灭菌40min，或连续两次121'C高压灭菌，每次灭菌20min，然后用烘箱烘千。X*f+~,v7}.a3、所有溶液配制好后，加DEPC水使DEPCuJ浓度为0.1%,37℃过夜，1211C高压灭菌40min.(其中Tris因为不能用DEPC处理，所以Tris用DEPC处理的水溶液灭菌后配制。))x&B,{%e"^&F:s0q试验步骤："Y6U+`2C*\4X2a#r【根据文献(ShujunChang,1993)CTAB法，稍作改进。】F^+e9I#h/Q7m*A*]1、将4mL提取液加入到lOmL离心管c卜650C水域加热。$D+?4w7\3J:w,M2、用液氮冷却研钵，在研钵中加入少量的抗氧化剂PVP，取1g低温冷冻的银杏叶片，迅速置于研钵中，不时加入液氮以防止研磨过程中叶片融化，充分研磨后，立即加入到预热好的提取缓冲液中，用手摇功混匀。6C4i+L/Z*C5G)v3、65℃，水域1min后冷却至室温。(N2@)U:S,{9M"e8f4、加入等体积(4mL)的氯仿:异戊X17(2=L:1)，混匀，10000rpm,40C，离心10min。(H6Po1y8p#?5、小心吸取上清液，加入等体积(4mL)的仿:异戊醇(24:1),混匀，10000rpm,40C,离心10min。.{#k/z5r:x:v1x6、吸取上清液，加1/4体积的IOMLiCL,混合，4℃沉淀过夜，然后10000rpm离心20min。7xP4o6z1D![8}7、用枪吸干，用500uLSSTE溶解沉淀，转到1.5mL离心管.加等体积氯仿:异戊醇混匀，10000rpm,40C，离心10min。,H2b7C1d*[6r4c8、离心吸取取上清液，加两倍体积的无水乙醉，-70℃沉淀至少30min，或一200C下沉淀2h。"W*c'Y1P-t5K)^,`9、12000rpm,40C,离心20min，去上请用70%的乙醇洗两次，吹干沉淀。1x,S*X0V"y6F/l10、用40uLDEPC处理的水溶解沉淀，得到RNA样品。8f2C-S4R3O9R4Te&{11、除用于电泳和紫外检测外，其余RNA-70℃冰箱保存备用。Q0o7V.]9x,{1i:__!U*X1m5G9A(W%U改良Krapp提取法：1r)r#s3~|.q1v.w试验试剂：'C7Z1^)J5A&f&W(Kd1、RNA抽提掖：母液：4mol异硫氰酸胍20mmolEDTA20mmolMESpH7.0。工作液：取400ml母液加入1.7ml2-ME贮存在4℃条件下备用。/a.I$E.RS%z2、RNA重悬液：2molLiCl10mmolNaAc调整终体积为250ml，pH5.2，灭菌后贮存在4℃条件下备用。2uJ1S9V8a.j试验步骤：)O/o,L#q-D8v)U1、取新鲜植物材料0.5~1g，冷冻干燥。如果必要可加入0.2g砂一起研磨，然后加入10mlRNA抽提掖充分混匀。7nQ:B"SN9B!J$u2、4℃条件下8000rpm离心10min，将上层水相转移至一干净离心管中，加入等体积的酚/氯仿抽提掖，在4℃条件下8000rpm离心10min。1N:K+]3R"a7`3、上清液转移至一干净离心管中，再用10ml氯仿洗上清液1次（加入10ml氯仿充分混匀后，在4℃条件下8000rpm离心10min.）。$p+y,P/^-w/E'g"k0y:[4、小心将上清液转移至另一干净离心管中，加入1/10vol3molNaAc和2vol冷无水乙醇，在-80℃条件下沉淀2小时。:t&M8O1O!C-w5a5、在4℃条件下8500rpm离心30min.，小心弃去上清液，沉淀重悬于RNA重悬液中，置于4℃条件下1小时。9b7Z#K4v(y%l8Q0a8N)I%|6、4℃条件下8500rpm离心10min.，弃去上清液，沉淀溶于适当体积的DEOC处理水中。检测后分装，置于-70℃条件下保存。

二甲基亚砜

DMSO是二甲基亚砜，用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。

DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。

但是，研究表明，DMSO存在严重的毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性。

DMSO是毒性比较强的东西，用的时候要避免其挥发，要准备1%-5%的氨水备用，皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤.最为常见的为恶心、呕吐、皮疹及在皮肤、和呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味。

吸入：高挥发浓度可能导致头痛，晕眩和镇静。

皮肤：能够灼伤皮肤并使皮肤有刺痛感，如同所见的皮疹及水泡一样。若二甲基亚砜与含水的皮肤接触会产生热反应。要避免接触含有毒性原料或物质的二甲基亚砜溶液，因其毒性不为人所知，而二甲基亚砜却可能会渗入肌肤，在一定条件下会将有毒物质代入肌肤。

吸收：吸收危险性很低。

丙烯酰胺

丙烯酰胺属中等毒性物质，可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体，因此，在搬运和使用中必须穿戴好防护用具，如，防毒服，防毒口罩及防毒手套等。丙烯酰胺的危害主要是引起神 经毒性，同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化，试验还显示丙烯酰胺是一种 可能致癌物，职业接触人群的流行病学观察表明，长期低剂量接触丙烯酰胺会出现嗜睡、情绪和记忆改变、幻觉和震颤等症状，伴随末梢神经病如手套样感觉、出汗 和肌肉无力。累积毒性，不容易排毒。

具备以下任何一项者，可列为慢性丙烯酰胺中毒观察对象：

a.接触丙烯酰胺的局部皮肤出现多汗、湿冷、脱皮、红斑；

b.出现肢端麻木、刺痛、下肢乏力、嗜睡等症状；

c.神经-肌电图显示有可疑神经源性损害。

5.NN-亚甲双丙烯酰胺：

有毒，影响中枢神经系统，切勿吸入粉末。

氯 仿

氯仿（CHCl3）：

对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用。它是一种致癌剂，可损害肝和肾。它也易挥发，避免吸入挥发的气体。操作时戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。

甲醛（HCOH）

甲醛（HCOH）：

有很大的毒性并易挥发，也是一种致癌剂。很容易通过皮肤吸收，对眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。避免吸入其挥发的汽雾。要戴合适的手套和安全眼镜。始终在化学通风橱内进行操作。远离热、火花及明火。

叠氮钠

叠氮钠（NaN3）：

毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜，操作时要格外小心。

十二烷基硫酸钠（SDS）

十二烷基硫酸钠（SDS）：

有毒，是一种刺激物，并造成对眼睛的严重损伤的危险。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜。不要吸入其粉末。

三氯乙酸（TCA）

三氯乙酸（TCA）：

有很强的腐蚀性。戴合适的手套和安全防目镜。

daanlaizi

RNA提取般步骤总结

RNA提取般步骤总结

^ 2 ^ G＃N1 EWRNA萃取原理：

/ |＃K0 K. @ 9 W |破碎细胞或组织RNA氯仿等机溶剂萃取并再经沉淀洗涤干燥溶解变性剂由于RNA酶处随能RNA降解所需要注意实验稍疏忽前功尽弃

0 T3 Z（F＆_D6 C％^Y A6 _RNA H6提取般步骤

- O：Y + X $ P＃S8 U4 M9所RNA提取程五关键点即：效破碎细胞或组织本效使核蛋白复合物变性内源性RNA酶效抑制效RNA提取DNA蛋白质混合??物参与效除糖杂质糖含量高品关键抑制RNA RNA提取阶段两种式使用：提取总RNA核酸沉淀氯化锂直接酸性条件酸性条件DNA蛋白质提取RNA留水相机相第提取导致量RNA损失种使用电流频率已经非低 （O（克^ + K）F + I＆]％P

实验步骤：

* L＆D6 S5 E（Q1 F（G2 | J ^ 0坏组织RNA→沉淀→离RNA→洗涤→保存RNA→解冻RNARNA6 D8} QYg * X

甲破碎组织RNA酶失同进行使用盐酸胍异硫氰酸胍NP-40SDS蛋白酶K等粉碎组织加入β-ME抑制RNA性

S（％）F`0 [1 D *米] 0 e2RNA离般用苯酚氯仿等机溶剂通加入少量异戊醇并步骤离离RNA般布层蛋白质层离

＆X. P）I）YU / L＃[3般用乙醇3M醋酸钠（pH值5.2）或异丙醇沉淀RNA 2 @ 0 D＆Z7 + IG1 @

4用70％乙醇洗涤洗涤RNA避免RNA洗掉步骤省略洗涤干燥或干燥乙醇能太干否则难溶解

3 @％VO9 V + I1 J2 O9 KZ5融化RNA通用于TE

L5 F N6}（S1吨％Z＆J6保存RNA应低温防止痕量RNase污染离RNA富RNase品（胰脏肝脏）需要要存储甲醛期存储高品质RNA存储特别鼠肝脏RNA水存储星期鼠脾脏提取基本降解RNA提取仍存储水3稳定外度比跟踪RNase降解于4KB誊转录呈现更敏增加RNA品存储稳定性RNA溶解离甲酰胺并存储-70℃保存RNA甲酰胺必须包含自胰腺RNA碎片RNA降解甲酰胺至少节省使用面准备使用RNA：加入醋酸钠0.3 M12000×g离5钟沉淀RNA

P3 [7米* ^ $ U $ _

：F徐* N（（I氯化锂提取总RNA：

U}'IR'^'^＆升尿素变性蛋白高浓度本发明并抑制RNA酶RNA选择性用氯化锂沉淀特别适合于少量组织RNA提取量品具快速简洁处少量污染DNARNA产量高损失RNA片段缺陷＃?* S：} 9`* R4 Z3 P

检测试剂：

D $ R6 Q_ I8 Q1氯化锂/尿素溶液氯化锂126克（3M）尿素360克（6M）加水至1L通滤灭菌]

7 _8 W1吨O9'QI4 Z2悬浮液[10mMTris-HCl（pH值7.6）1mMEDTA（pH8 0）0.5％SDS]

M8第4季R＆Y：B＃`7测试程：7 [ $`*}O7 _ Z'{

1进行量组织或细胞每克组织或细胞加入5-10ml氯化锂 - 尿素溶液匀浆器件速度匀浆2钟于数量细胞（107细胞/毫升）每克组织或细胞加入0.5毫升氯化锂 - 尿素溶液手匀浆并转移Eppendof管 ＆Y）B：EQL / ^ Q：\ $号

图2所示匀浆液放置0-4℃412000克离30钟 X-C6 D-N / N0 K表 T2 A

3颗粒加入1/2体积原始匀浆液体氯化锂 - 尿素溶液重复步骤2

）YX）S0 K9 Y6 Je4用1/2体积原匀浆液氯化锂 - 尿素溶液重构沉淀加入等体积苯酚/氯仿/异戊醇室温15-30钟摇组合4000克离5钟

3 D2 VI1??（?* D5水清液添加1/10倍体积3M乙酸钠（pH5.2）2倍体积乙醇??-20℃进行15000克离

L4Q4 U L：* K％Z $ （E670％乙醇沉淀洗涤并真空干燥3}R0 [/ Q'G9 Q

RNARNA溶解液溶解沉淀物装保存于-70℃

0 F X％R（H％B7?

Y7 J5 U $ C'|）[％? J3e：Q蛋白酶 - 热酚|^ 0 B *）P3 S * C4 B4 H4升

本发明适合病毒RNA提取

* I（I + B＃RK测试试剂：

$ 4 [7 H9`）蛋白酶K（终浓度50ug/ml）J1J5 P L6 V / T7 [/ I

22×缓冲液：1％SDS20mM Tris-HCl（pH值7.6） 0.2MnaCL9 HP] Y + \ $ Z）O

测试程序：＃W3 [$] 5 Y V8 G1

1纯化病毒溶液加入等体积缓冲液蛋白酶K37℃40-50钟

- K0 - P / E'Q-Z7?G0 M＃{＃D2加入等体积65°?预热酚溶液轻徭薄赋光5钟65℃徭培养

W `W（E：酷睿i3 ^ 3离取清液氯仿萃取间（Z0 DJ2 7米+ D2 Q＆X?

4取层水相加1/10倍体积3M乙酸钠（pH5.2）2倍体积乙醇??-20℃进行1离离5000克（万克10钟）

7 [/瓦特氢气D6 U $ k570％乙醇洗涤沉淀物真空干燥

％A5 Y{（W％3 * Y O E）P6 RNA溶解液溶解沉淀RNA装保存于-70℃策植物RNA提取程难

策植物RNA提取程难

）O5 B7 D / Q3 _酚类化合物干扰及策：

A9 D * Z3 K 7 W许植物组织特别水（苹樱桃李葡萄等）植物树木植物含丰富酚类化合物酚与植物增加含量更容易轻植物材料RNA提取外针叶树植物落叶植物叶织针酚含量要高氧化匀浆焦黄加深植物材料匀浆酚类物质释放氧化程度增加种现象称褐变影响（BROWNING效）酚类化合物（例醌类）与RNA稳定结合氧化影响RNA离纯化纽伯与酚类总量材料没发现RNA提取难易程度间相关性并非所酚类化合物影响RNA提取般认所谓缩合单宁聚合物羟基黄酮醇类物质（原花青素物质）影响RNA提取类化合物除酚类化合物般初始阶段提取防止氧化离RNA 9 B0 S} 0 U6 | 9 K / L VV G1?/ @

防止氧化酚化合物：

V yA4 K7 N /原Z1：般提取缓冲液加入（ - 巯基乙醇二硫苏糖醇（DTT）或半胱氨酸防止酚类氧化提取溶液（ - 巯基乙醇浓度高2％（ - 巯基乙醇等断便苏由酚氧化酶失二硫化物即添加沉淀RNA夜（ - 巯基乙醇（终浓度1％）防止氧化程硼氢化钠（硼氢化钠）酚类化合物原醌原剂用提取缓冲液处理棕色消减醌化合物原酚化合物

＆H Z P +?＆T％T5 G＆G1 M-P / Q U2螯合剂：螯合剂聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）CO-N =基团包括酚化合物强结合能力结合能力与酚化合物芳香环数目增加羟基加强原花青素物质包含许芳香环羟基基团其形稳定复合物与PVP或溶性PVPP使原花青素物质能酚氧化酶酶底物氧化并且提取步骤除随着PVP除酚pH值重要影响素结合酚PVP pH值8.0更迅速降低[11]原花青素单独使用更质量PVPP除所化合物需要与其结合使用

p％N0瓦特/ t7r3Tris-硼酸盐：提取缓冲液含Tris-硼酸盐（pH7.5）其特征于所述硼酸根据带*氢与酚类化合物形复合物抑制酚类氧化与RNA结合种非效所提取缓冲液溶液加入Lбpez-Gбmez再其原剂Tris-硼酸浓度高（>0.2M）影响RNA收率

＃P8] 0 ^ 8 K3 a4牛血清白蛋白（BSA）（）：物质BSA原花色素产类似溶性或溶性复合物形间抗原 - 抗体相互作用降低材料RNA结合原花色素机提高产率RNA BSAPVPP合并提取液效更由于RNA酶往往含BSA要加入使用肝素抑制核糖核酸酶性 ?＃H / Y（P7 Q）J4）G * W1 G8升

5星丙酮：Schneiderbauer冻结云杉松树山毛榉等-70℃丙酮萃取植物材料与抛光效离高品质植物材料酚醛化合物丰富RNA @ + - X / V9 Z8 T8 H：B3?白c

除酚类化合物：

＆Z＃H）G0 H＆$ I1 N F L9 N李+Ca2 +沉淀RNA未氧化酚类化合物清除PVP溶性PVPP或BSA结合酚类物质直接通离离除或曼宁使用高浓度2 - 丁氧基乙醇（50％）沉淀RNA除苯酚氯仿萃取酚溶解2 - 丁氧基乙醇除含50％2 - 丁氧基乙醇缓冲液洗涤RNA沉淀认甚至酚氧化其氧化产物仍溶解高浓度2 - 丁氧基乙醇溶液除残留酚删除外没必要再使用硼氢化钠处理 C6 Y8 A1 SV：2

糖干扰及策：6 I-B3 R4?$ T＆O

糖污染提取植物RNA经遇另棘手问题植物组织往往富含糖许物理化性质RNA糖非相似难除糖RNA裹着移植性路程导致RNA产量减少RNA沉淀产糖凝胶状沉淀物例含糖类RNA沉淀溶于水或溶解粘稠溶液由于糖抑制许酶性污染糖RNA品能用于进步物研究传统通SDS-盐酸胍处理部除些糖氯仿萃取移除些糖由苯酚存高浓度Na +或K +离条件?? LiCl沉淀RNA糖部留清液即使通些步骤仍发现相数量糖RNA混合起所需要使用更效式解决污染问题植物RNA离纯化糖

7 ['X / Ed8×（沸点（| 9 C＆n与低浓度乙醇沉淀除糖糖种更提取RNA或溶液缓慢加入水乙醇至终浓度10％至30％并且使沉淀糖RNA保持溶液乙醇溶液加入通植物材料匀浆Lewinsohn RNA萃取裸植物木质茎统乙醇浆料清液加入终浓度10％情况沉淀糖Tesniere葡萄浆组织提取RNA通CsCl超离乙醇沉淀RNA溶液加入终浓度30％乙醇沉淀糖进步纯化RNA品

I5 B5米* Z9八集团M4? - N / D另用醋酸钾沉淀糖加入1/3量5 M醋酸钾（pH4.8）解决案巴赫卢勒云杉组织匀浆提取RNA沉淀糖安斯沃思鲁梅克斯植物花卉组织RNA提取加入1/5体积5 M钾乙酸乙酯（pH4.8）溶液 Hughes等棉叶花粉RNA提取添加1/3体积8.5M醋酸钾（pH值6.5）溶液匀浆除糖等杂质植物材料RNA提取物述两种组合使用种Lбpez-GбmezRNA提取芒皮匀浆液加入0.25体积水乙醇0.11倍体积5M醋酸钾溶液除糖杂质 Su等除糖藻酸盐单独使用乙醇或醋酸钾效并使用结组合

6 C9 | 5 Q1 B9 ??[5 L1 S + N缓冲液含高浓度NaCl助于除糖 Chang等提取松树核糖核酸NaCl浓度2.0M1.0M缓冲溶液氯仿萃取乙醇沉淀RNA与糖离RNA曼宁萝卜种其材料苯酚提取清液稀释Na +离浓度调节至80毫米加入0.4体积2 - 丁氧基乙醇沉淀除糖 3 B1 H＃M'{+ {0 U％UK2 @V

蛋白质杂质影响策：$ _at_ - G5 O（F1 S9 _2 V * G2 N / ^

蛋白RNA品污染重要素核糖核酸酶酚氧化酶蛋白质获完整高质量RNA必须效除蛋白杂质传统抑制冷冻条件性RNase等磨碎植物材料提取缓冲液含蛋白质变性剂苯酚胍十二烷基硫酸钠十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）使匀浆蛋白质变性聚集些蛋白酶K降解蛋白质杂质五月进步除蛋白质用苯酚氯仿萃取 T7五（F1 J9 @ + E

Wilcockson同溶解度使用高氯酸钠溶液蛋白质RNA离 70％高氯酸钠溶液于该蛋白质溶解度RNA溶解度数蛋白质沉淀随通离离清液加入两倍体积水乙醇RNA安顿并溶解70％高氯酸钠溶液残余蛋白保持清液除部蛋白质

3 QE / \ * IA＆@代谢产物影响及策:: N3）N F K＃NP F6 H0 J2 A0 {

另困难植物组织许高等植物组织尤其熟组织产些水溶性级代谢产物提取RNA质量些级代谢产物容易与RNA结合RNA提取满阻碍离物性RNA些级产品能确定具体物质没特别式解决问题贝克休斯等选择性沉淀Chirgwin氯化铯梯度离离纯化松树种熟松树针叶植物组织RNA艾弗森RNA恢复 （M S5 O％FH-Q * \（`（}

难易其物材料植物组织特别高等植物细胞内外复杂性组合物使植物组织RNA提取阶段通实践发现即使同种植物同组织RNA提取同同植物材料包含某种干扰素同RNA提取能适用即使同种植物相同组织材料同基型植物RNA提取能相同于工厂或组织其相应RNA提取必须经探索实践建立 ＃S0＃G7 L3 S＆A

随着植物物研究领域扩我肯定说现新困难RNA提取植物材料程作其研究基础断探索经验积累科家快解决些困难并植物物发展铺平道路些特殊植物RNA提取

些特殊植物RNA提取

$ E * [U（E％H'酚植物RNA提取：JD2 V（R! B＆?

苹棉花酚植物RNA提取采用TRIZOL般没验证效所提取RNA纯度没特别高作北足够 6 J＆D2 U（\ 6 W8 _＆O4 E1 X1吨

试剂：

＃S7 S8? R＃W1 Y＃克提取缓冲区200毫升：氯化钠1.1688克100毫米Tris2.4228克10毫米（Tris-HCl4.0）EDTA5.8450克10mMSDS2.0000克1％NaOH溶液调节至8.0并设置200毫升再加200ulDEPC解冻 * J）T2 @）T4 W'F

测试步骤：

?A0 I * C（W5 S * A'W11.5毫升管冷冻液态N2吼加入0.1克品加入500UL苯酚 - 氯仿加入500UL提取缓冲液剧烈振摇1钟放置冰5钟 F3 S0 V5 @ 0 S7 I1?

24 12000rpm进离15min清液转移新试管添加氯仿异戊醇提取间 ）H'L7 D＃DY8 @

3取600ul异丙醇-20℃沉淀20钟

＆W：M2 R：I4 \ L＃J412000转离10min

IY \ 8 b7A5沉淀物用乙醇（70度）

K T. D1 [0 w +）_0 D5 68000RPM 5钟

AY＃}'F（`5} 6我+ NX7沉淀干燥溶解30ulDEPC水^ 0 QR +`5 J（N'['M9号

＃M / R3 O2? T6 Z $`1 M＆E ^

银杏等木本裸植物RNA提取：A I＆V H0` ?

银杏香其木本裸植物代谢物糖离纯化RNA干扰RNA提取质量产量严重影响酚含量物实验展带阻碍目前RNA提取许传统Trizol试剂盒SDS其提取银杏RNA蜀郡张等（1993）CTAB提取RNA质量较差退化非严重改善其提取步骤获更高质量银杏RNA品 / S4我* V K8 S）x

检测试剂：M（Q＃E7 N3吨`＃I M（[

11M三：12.11克?斯溶解60米L水用浓盐酸PH8 0.0体积LOO毫升菌DEPC水溶解使用

`4 C9 {）P2 \ 4 T2 M EDTA500米：18.61克?DTAH 2O80米升水搅拌至溶解用NaOH pH值调至8.0定容至100mlV＃X G4 M＃Q3 C5 P * JH4 Y

310摩尔/ LLiCL：42.4 gLiCL 100毫升水溶解即 9 I）@'\＆W + C P * G

图4所示提取缓冲液（DEPC处理）：2％CTAB（蛋白质变性剂）0.2％PVPK 30（除酚）100米摩尔Tris-HCL（pH8.0）25米M EDTA（金属螯合剂混合物）2.0M氯化钠（除糖CTAB）与：10 mL1 mol / L三PVP2克2克CTAB5ML 500毫米EDTA11.7gNaCL音量设置100毫升 ）O + \ 5 E XO＃A（M + P8 H * K9 N0 q

5亚精胺（提取液加少量）（RNA酶抑制剂）

＃J9 G6 O / H（U'D64％稀疏乙醇（添加）提取（除酚）'D ED（J. K $ ZO9 f

7氯仿异戊醇（24：1）（萃蛋白质））U）A +] 4 \＃Q

810 MLiCL（沉淀物RNA）

7 M +）G4 J4 m5C0f-\ 9SSTE（溶解RNA）1.0M氯化钠01m10米MTrisHCL（pH8）：氯化钠2.9克0.25毫摩尔EDTA（pH8.0）5％SDS克SDS0.5毫升1三L 500毫米100 U EDTApH值8.0定容至50 mL M5 Z + J3 X0 V＆\ 6 E7?＃R

测试准备：_5 Z9}F％Q6吨

灰浆玻璃器皿包裹铝箔烘焙温度200℃或至少2或180 * C高温烘烤4信息 X7 N3 WW2} 9 M

2塑料制品（提示管）新裹报纸121'C高压灭菌器消毒40钟或两121'C高压釜每灭菌20钟烤箱烤千

X * F +?V7} A3所溶液制备加DEPC水DEPC UJ浓度0.1％37℃培养夜1211C高压蒸汽灭菌40钟液（Tris没用DEPC所Tris DEPC-处理水溶液制备灭菌处理）

）X＆B {％E ^＆F：S0 q检验程序：Y6 U +`C * \ X2＃R

[据文献（蜀郡张1993）CTAB改进 】

F ^ + E9 I＃H / Q7 M * A *] 14毫升提取物加入lOmL离离机加热管C卜650C水域 $ D + 4 W7 \ 3 J：WM

2研钵用液氮冷却研钵抗氧化剂PVP加入少量采取1克低温冰箱银杏迅速放置研钵加入液氮研磨程防止叶片熔体充研磨紧接添加预热提取缓冲液并混合与手功能 C4我+ L / Z * C5?）V

365℃1钟冷却至室温水

（N2 _at_）U：S{9 ME8 F4通添加量（4毫升）氯仿：异戊X17（2 = L：1）混合10,000 rpm40C10钟

（H6 P O1 Y8 P＃5星仔细清液加入等体积（4毫升）仿：异戊醇（24：1）并混合10,000 rpm40C离10钟{＃K / Z5? ：X：V1 x

6取清液加入1/4体积IOMLiCL混合4℃沉淀夜10000RPM离20钟

7×P4 O6 Z1 D [8} 7干燥溶解沉淀500U?SSTE 1.5M号离管放炮等体积氯仿：异戊醇混合1万转40C离10钟

H2 b7C1e* [6 R4c8离拉伸清液加两倍体积水乙醇-70℃沉淀至少30钟或20℃沉淀物2 W * C'Y1 P-T5 K表）^`

912000rpm进40C离20钟用70％乙醇洗涤两干燥沉淀 1×S * X0 VY6 F /升

1040 U LDEPC处理水溶解沉淀物RNA品 8 F2 C-S4 R3 O9 R4 T E＆{

11除电泳紫外检测RNA-70℃冰箱备用

Q0 O7 V.] 9 x{1我：__

U * X1 M5 G9（W％U改进克拉普提取：

1 R）R＃S3? Q1诉W测试试剂：

C7 Z1 ^）J5 A＆F＆W（K D1RNA提取掖：母液：4mol异硫氰酸胍20毫摩尔EDTA 20毫摩尔MES pH值7.0工作液：取400毫升母液加入1.7毫升2-ME贮存4 ℃储备/ I $ E. RS％Z

2RNA重新悬浮液：氯化锂10毫摩尔乙酸钠2mol调整终体积250mlpH5.2灭菌存储4℃条件使用 2 U J1 S9 V8 ?

测试步骤：

）O / O型L＃q构-D8 V）U1取新鲜植物材料0.5?1g冻干必要添加至0.2g砂磨起拌匀加入10ml RNA提取掖 7 N Q：BS N9 BJ $ü

24℃8000RPM离10min条件层水相转移干净离管并加入等体积苯酚/氯仿萃取除皱离10钟4℃条件8000RPM

1N：K +] 3 R A7`3清液转移干净离管清液1（添加调匀10毫升氯仿洗涤10ml氯仿4℃条件8000RPM离10min ）

$ P + YP / ^ - W / EGK0 Y：[4清液转移另干净试管加入1/10体积3摩尔乙酸钠2倍体积冷乙醇-80℃降水两条件：T＆M8 C-W5O1 O

54℃8500rpm离30钟条件弃清液沉淀再悬浮RNA再悬浮并4℃放置1条件 9 B7 Z＃K4 V（同期L8 Q0 A8?）I％|

64℃条件8500rpm离10min丢弃清液DEOC沉淀物溶解适体积处理水测试包装保存-70℃条件

不要多想 这样的提问没有意义

很多烦恼都是我们自己找的