为什么聚乙二醇能诱导细胞融合呢,作用机理是什么
聚乙二醇(PEG)分子能改变各类细胞的生物膜结构,使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组,由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用,从而使细胞发生融合,从而形成杂种细胞,培养该杂种细胞(细胞质杂种)可以获。
乙二醇可以用作燃料,热值比较低,目前基本都是粗的乙二醇,质量没有保证,乙二醇对金属长时间有一定腐蚀性。乙二醇能兑水。
你是用在厨房燃料吧,换专用炉心就可以,常用气泵的 比较多,也可加热的或则电喷的 。
优点:融合率较高,对各种动物细胞都适宜,且仙台病毒能在鸡胚中大量繁殖,容易培养;
缺点:仙台病毒不稳定,在保存过程中融合活性会降低,并且制备过程比较烦琐。此外,病毒引进细胞后,可能会对细胞的生命活动产生干扰。
2、聚乙二醇(PEG)诱导融合
聚乙二醇PEG具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质的作用,能够有效地促进植物原生质体和动物细胞的融合。在不同种类的动物细胞混合液中加入聚乙二醇,就会发生细胞凝集作用;在稀释和除去聚乙二醇的过程中,就会发生细胞融合。聚乙二醇诱导细胞融合的机理,目前还不太清楚。
优点:聚乙二醇是化学试剂,使用起来很方便,诱导细胞融合的频率比较高
缺点:PEG有一定毒性,对有些细胞(如卵细胞)不适用。
3、电融合 20世纪80年代建立起来的电融合技术,是将两种细胞的混合液置于低压交流电场中,使细胞聚集成串珠状,然后施加高压电脉冲,以促使细胞融合。紧密排列的细胞,在相互接触的细胞膜之间会出现无蛋白颗粒的脂质区,当受到电击时,这个区域就会被击穿,产生脂双层膜孔,导致细胞之间的细胞质连通,进而发生细胞融合。
电融合技术有许多优点,如诱导细胞融合的频率高,对细胞无毒害作用,操作简便,可重复性好。
有无双键并不能说是能否发生加聚反应的决定因素,三键的物质也是可以发生聚合反应的。只有键的结合发生的是聚合反应,而有羟基和羧基也是可以发生加聚反应的,只不过要脱水。
制备单克隆抗体常用的诱导剂有:化学诱导剂——聚乙二醇(PEG)、生物诱导剂——灭活的病毒(常用灭活的仙台病毒)。
具体操作方法如下:
(1)仙台病毒法融合:
①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞膜上。并使两 细胞相互凝聚;
②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需要Ca2+和 Mg2+,最适PH为8.0一8.2;
③细胞膜连接部穿通,周边连接部修复,此时需Ca2+和ATP;
④融合成巨大细胞,仍需ATP。
(2)聚乙二醇(PEG)法:
聚乙二醇(PEG)结构为:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小 于 6000者均可用作细胞融合剂。PEG经高压灭菌后,与温热的Engle氏液混合。 一 般选用分子量为4,000,常用浓度为50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3 调整),分子量小的PEG,融合效应差,又有毒性,分子量过大,则粘性太大,不 易操作。
此外,还有物理方法:离心、振动、电刺激等。
聚乙二醇(PEG)法
聚乙二醇(PEG)结构为:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。PEG经高压灭菌后,与温热的Engle氏液混合。
一般选用分子量为4,000,常用浓度为50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3调整),分子量小的PEG,融合效应差,又有毒性,分子量过大,则粘性太大,不易操作。
扩展资料:
在一般条件下,聚乙二醇是很稳定的,但在120℃或更高的温度下它能与空气中的氧发生作用。在惰性气氛中(如氮和二氧化碳),它即使被加热至200~240℃也不会发生变化,当温度升至300℃会发生热裂解。加入抗氧化剂,如质量分数为0.25%~0.5%的吩噻嗪,可提高它的化学稳定性。它的任何分解产物都是挥发性的,不会生成硬壳或粘泥状的沉淀物。
参考资料来源:百度百科-聚乙二醇
乙二醇水溶性强,吸收后迅速分布于血液及组织液中,并很快在肝脏经乙醇脱水酶代谢为乙醇醛,再经乙醛脱水酶代谢为乙醇酸,乙醇酸经乙醇酸氧化酶氧化为乙醛酸。最后主要代谢物为草酸,也有部分为甲酸和马尿酸。
国内外对于乙二醇的研究结果一致认为其本身毒性较低,而其代谢产物毒性较高,对肾脏的毒性主要是由乙二醇氧化代谢物所致。Gordon列举出乙二醇的主要三种代谢产物乙醛酸、草酸和乳酸的毒性。乙醛酸能抑制糖酵解和三羧酸循环,刺激大脑;草酸可引起肾损伤和代谢性酸中毒,还可与钙离子结合形成草酸钙结晶,导致低钙血症,并沉积于肾、脑等处,造成肾、脑功能障碍;乳酸进一步加重酸中毒。
乙二醇能引起高草酸盐尿和草酸钙结晶沉积于肾一直被看作是肾损伤和肾结石的重要致病机制。综合国内外乙二醇与肾脏结石形成关系的研究,肾结石形成的可能机制是:①自由基和抗氧化酶共同作用机制;②结石基质蛋白和蛋白簇表达抑制剂共同作用机制;③单核.巨噬细胞趋化因子诱导草酸盐和草酸钙结晶致肾损伤机制。近年有学者相继发现乙二醇在导致肾损伤和肾结石的同时伴有一些过氧化合物酶及过氧化产物的增高,如脂质过氧化物酶、MDA(丙二醛)、半乳糖苷酶以及中性肽链内切酶。在乙二醇致大鼠肾结石形成过程中存在着氧化.抗氧化系统的失衡。乙二醇代谢产物早期随血液循环进入肾脏,产生活性氧,后期浸润到白细胞而使抗氧化酶活性水平减低,肾脏后期处于过氧化应激状态下,加重肾脏的损伤程度。
总之,乙二醇代谢物引起的急、慢性酸中毒和组织中草酸钙结晶沉积是乙二醇重要的毒性基础。
以上内容,希望对你有帮助。