流式细胞胞固定破膜单用70%无水已醇吗
这个方法只限于用作PI单染的细胞周期实验,而且最好固定时间不超过半小时。固定如果不能立刻检测,建议更换溶液为PBS和10%BSA。细胞置于酒精时间过长,会出现大量碎片,影响实验结果。
如果要使用抗体染胞内抗原,这个方法不好用。建议使用多聚甲醛加去垢剂来固定来透膜。
根据你所购买的试剂盒而定,一般是先用70%乙醇先固定,然后加RNA酶和PI,半个小时左右上机检测就可以了.需要注意的就是加酒精固定的时候要用四度预冷的酒精,缓慢的加,边加边晃动细胞,避免细胞黏连在一起. (1)细胞培养 取对数生长期的细胞,按1X10。
冰醋酸:5%水溶液可作固定用。不能沉淀白蛋白,但能沉淀核蛋白。渗透性强,固定快,能使红细胞膨胀而破碎,常与其它液体配合使用。