流式细胞胞固定破膜单用70%无水已醇吗

根据你所购买的试剂盒而定,一般是先用70%乙醇先固定,然后加RNA酶和PI,半个小时左右上机检测就可以了.需要注意的就是加酒精固定的时候要用四度预冷的酒精,缓慢的加,边加边晃动细胞,避免细胞黏连在一起. （1）细胞培养 取对数生长期的细胞，按1X10。

因为无论用哪种方法提取,沉淀DNA时总会加入高浓度的盐,加盐的目的是破坏能使蛋白质保持稳定的两个因素,使蛋白和DNA分离并沉淀下来.而此时盐的阳离子会与DNA结合形成DNA-阳离子盐溶于溶液中,再用无水乙醇可以将DNA-阳离子盐沉淀下来,但这样一来,DNA中就含有较多的盐离子,这势必会影响下一步实验的进行,所以要用70%乙醇洗涤DNA沉淀(因为在70%乙醇里DNA是不溶的,而盐离子却可溶),用无水乙醇则达不到这个目的!OK?

乙醇对组织细胞的处理既有固定作用又有脱水作用,乙醇借沉淀作用使蛋白质变性,固定组织以80%～95%浓度为好

冰醋酸：5%水溶液可作固定用。不能沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白。渗透性强，固定快，能使红细胞膨胀而破碎，常与其它液体配合使用。

Bouin's固定液是一种常规用于外科活检固定的良好固定液,用于固定大多数器官和组织,适用于结缔组织,尤其是三色染色时候更为理想,固定效果好,组织细胞结构完整.细胞和着色鲜明,但细胞质着色差.对脂肪固定好,尤其适用于含脂肪的淋巴结、乳腺组织和脂肪瘤标本的固定.固定液偏酸,PH为3-3.5,对抗原有一定的损坏,使组织收缩,不宜于标本的长期保存.有一定的毒性,应避免吸入和与皮肤接触.固定时间12-24小时.固定后组织被染成黄色.需用70-80％的酒精洗涤.在酒精中加入饱和的碳酸锂水溶液有助于清除组织块的黄色.固定后可以直接转入95％酒精中.

因此,在Bouin's中是不能固定超多20周的,最好,固定12-24小时后直接送病理科包埋保存.

一

般来说都是将细胞悬液离心并弃上清后加入固定液，我们加的是70%的冰乙醇，加的量根据你细胞的多少。你这个涉及的测蛋白，那么加多聚甲醛的量和时间可能

要控制得严一些才能保证最低限度不破坏a-SMA的结构。如果单测细胞凋亡和周期的话固定液多一点和固定时间长一点都影响不是太大。

其实无论是做细胞周期

的乙醇固定，还是做蛋白染色的多聚甲醛固定，固定液加1mL就可以了，一般每个样品的细胞数都在106左右。固定液太少了不好，因为固定液的实际作用浓

度一定程度上受弃上清后管内残留液体量的影响，但太多了也没有意义。也正是这个原因，实际上多聚甲醛的浓度用4%的多一些，而且因其有挥发性，时间长浓度

会有所降低。至于固定时间，一般4度30min固定作用就已经比较完全了，但是也可以放置过夜，这样有时有利于时间安排。