层析柱bpg200/500是什么意思

SephadexG-200

Sephadex是葡聚糖凝胶过滤层析技术。利用具有多孔网状结构的凝胶颗粒的分子筛作用，根据分离样品中分子量大小的差异进行洗脱分离的一项技术。每一种特定的凝胶介质都有特定的分子量分级范围。根据其分级范围，可以将溶质分子分为三类：全排阻分子、全渗透分子以及部分渗透分子。按照分子在层析凝胶中的保留时间长短逐步洗脱。SephadexG加一个数字，数字越小的介质交联度越大，分级范围越小，而数字越大的介质交联度越小，分级范围越大。G-200分离分子量范围500-800 000

DEAE-纤维素52

就是阴离子交换层析，是按照离子强度对蛋白质进行分离， 离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。

⒈ 离子交换剂预处理和装柱 对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒，以保证有较好的均匀度，对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理，使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理，使最终转为-OH-型或盐型交换剂；对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理，使最终转为H+型交换剂。洗涤好的纤维素使用前必须平衡至所需的pH和离子强度。已平衡的交换剂在装柱前还要减压除气泡。为了避免颗粒大小不等的交换剂在自然沉降时分层，要适当加压装柱，同时使柱床压紧，减少死体积，有利于分辨率的提高。柱子装好后再用起始缓冲液淋洗，直至达到充分平衡方可使用。

⒉ 加样与洗脱 加样：层析所用的样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度，所选定的pH值应落在交换剂与被结合物有相反电荷的范围，同时要注意离子强度应低，可用透析、凝胶过滤或稀释法达此目的。样品中的不溶物应在透析后或凝胶过滤前，以离心法除去。为了达到满意的分离效果，上样量要适当，不要超过柱的负荷能力。柱的负荷能力可用交换容量来推算，通常上样量为交换剂交换总量的1％-5％。

洗脱：已结合样品的离子交换前，可通过改变溶液的pH或改变离子强度的方法将结合物洗脱，也可同时改变pH与离子强度。为了使复杂的组份分离完全，往往需要逐步改变pH或离子强度，其中最简单的方法是阶段洗脱法，即分次将不同pH与离子强度的溶液加入，使不同成分逐步洗脱。由于这种洗脱pH与离子强度的变化大，使许多洗脱体积相近的成分同时洗脱，纯度较差，不适宜精细的分离。最好的洗脱方法是连续梯度洗脱，洗脱装置见图16-6。两个容器放于同一水平上，第一个容器盛有一定pH的缓冲液，第二个容器含有高盐浓度或不同pH的缓冲液，两容器连通，第一个容器与柱相连，当溶液由第一容器流入柱时，第二容器中的溶液就会自动来补充，经搅拌与第一容器的溶液相混合，这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。第一容器中任何时间的浓度都可用下式进行计算：

C＝C2－（C2－C1）（1－V）A2/A1

式中A1、A2分别代表两容器的截面积：C1、C2分别表示容器中溶液的浓度；V为流出体积对总体积之比。当A1＝A2时为线性梯度，当A1＞A2时为凹形梯度，A1＞A2时为凸形梯度。

洗脱时应满足以下要求：①洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使分离的各峰不致于太拥挤。②梯度的上限要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。③梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。

⒊ 洗脱馏份的分析 按一定体积（5-10ml/管）收集的洗脱液可逐管进行测定，得到层析图谱。依实验目的的不同，可采用适宜的检测方法（生物活性测定、免疫学测定等）确定图谱中目的物的位置，并回收目的物。

⒋ 离子交换剂的再生与保存 离子交换剂可在柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/: NaCl淋洗柱，若有强吸附物则可用0.1mol/L NaOH洗柱；若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生，也可用乙醇洗涤，其顺序为：0.5mol/L NaOH-水-乙醇-水-20％NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002％氯已定（洗必泰），阳离子交换剂可用乙基硫柳汞（0.005％）。有些产品建立用0.02％叠氮钠。

⒌ 离子交换层析的应用 离子交换层析技术已广泛用于各学科领域。在生物化学及临床生化检验中主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。

SephadexG-200食葡聚糖凝胶层析，G后面加一个数字，数字越小的介质交联度越大，分级范围越小，而数字越大的介质交联度越小，分级范围越大。这些是蛋白质分离技术提纯的基本技术，就是分子筛，适合大量蛋白的提纯，G-200一般就是分离分子量差距较大的混合物质。

替代方法可能会有超滤，也是截流分子量。HPLC高效液相色谱等分离方法，但是还是离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。

⒈ 离子交换剂预处理和装柱 对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒，以保证有较好的均匀度，对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理，使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理，使最终转为-OH-型或盐型交换剂；对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理，使最终转为H+型交换剂。洗涤好的纤维素使用前必须平衡至所需的pH和离子强度。已平衡的交换剂在装柱前还要减压除气泡。为了避免颗粒大小不等的交换剂在自然沉降时分层，要适当加压装柱，同时使柱床压紧，减少死体积，有利于分辨率的提高。柱子装好后再用起始缓冲液淋洗，直至达到充分平衡方可使用。

⒉ 加样与洗脱 加样：层析所用的样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度，所选定的pH值应落在交换剂与被结合物有相反电荷的范围，同时要注意离子强度应低，可用透析、凝胶过滤或稀释法达此目的。样品中的不溶物应在透析后或凝胶过滤前，以离心法除去。为了达到满意的分离效果，上样量要适当，不要超过柱的负荷能力。柱的负荷能力可用交换容量来推算，通常上样量为交换剂交换总量的1％-5％。

洗脱：已结合样品的离子交换前，可通过改变溶液的pH或改变离子强度的方法将结合物洗脱，也可同时改变pH与离子强度。为了使复杂的组份分离完全，往往需要逐步改变pH或离子强度，其中最简单的方法是阶段洗脱法，即分次将不同pH与离子强度的溶液加入，使不同成分逐步洗脱。由于这种洗脱pH与离子强度的变化大，使许多洗脱体积相近的成分同时洗脱，纯度较差，不适宜精细的分离。最好的洗脱方法是连续梯度洗脱，洗脱装置见图16-6。两个容器放于同一水平上，第一个容器盛有一定pH的缓冲液，第二个容器含有高盐浓度或不同pH的缓冲液，两容器连通，第一个容器与柱相连，当溶液由第一容器流入柱时，第二容器中的溶液就会自动来补充，经搅拌与第一容器的溶液相混合，这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。第一容器中任何时间的浓度都可用下式进行计算：

C＝C2－（C2－C1）（1－V）A2/A1

式中A1、A2分别代表两容器的截面积：C1、C2分别表示容器中溶液的浓度；V为流出体积对总体积之比。当A1＝A2时为线性梯度，当A1＞A2时为凹形梯度，A1＞A2时为凸形梯度。

洗脱时应满足以下要求：①洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使分离的各峰不致于太拥挤。②梯度的上限要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。③梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。

⒊ 洗脱馏份的分析 按一定体积（5-10ml/管）收集的洗脱液可逐管进行测定，得到层析图谱。依实验目的的不同，可采用适宜的检测方法（生物活性测定、免疫学测定等）确定图谱中目的物的位置，并回收目的物。

⒋ 离子交换剂的再生与保存 离子交换剂可在柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/: NaCl淋洗柱，若有强吸附物则可用0.1mol/L NaOH洗柱；若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生，也可用乙醇洗涤，其顺序为：0.5mol/L NaOH-水-乙醇-水-20％NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002％氯已定（洗必泰），阳离子交换剂可用乙基硫柳汞（0.005％）。有些产品建立用0.02％叠氮钠。

⒌ 离子交换层析的应用 离子交换层析技术已广泛用于各学科领域。在生物化学及临床生化检验中主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。

替代方法也许超滤可以，但只能以此截流固定分子量。高效液相色谱，这个十分方便，但是仪器很贵，如果SephadexG-200等方法可以进行分离，还是比高效液相便宜的......

装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。

不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。

湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂“走柱子”，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。

方法提要

试样中的沥青质馏分用正戊烷或正己烷或石油醚沉淀后，可溶物部分过硅胶-氧化铝层析柱，采用不同极性的溶剂依次淋洗出饱和烃、芳香烃和非烃馏分。挥发溶剂后，用重量法测定试样中各馏分的质量分数。

仪器设备

层析柱 内径 7～10mm，长 400～500mm。

具塞三角烧瓶。

减压溶剂浓缩仪。

氮吹仪。

称量瓶。

分析天平 感量 0.1mg。

电热干燥箱 室温～200℃。

高温炉。

干燥器。

试剂和材料

正戊烷或正己烷或石油醚 (30～60℃) 分析纯，经重蒸及除芳烃处理。

二氯甲烷 分析纯。

无水乙醇 分析纯。

三氯甲烷 分析纯。

层析硅胶 粒径 0.177～0.149mm，用氯仿抽提至不发荧光，在 140～150℃活化 8h，稍冷却后置于干燥器中保存备用。

中性氧化铝 粒径 0.149～0.075mm，在高温炉中于 450℃活化 4h，取出稍冷却后移入干燥器中冷却，保存备用。

脱脂棉 经氯仿抽提至不发荧光。

分析步骤

1) 在 100mL 具塞三角烧瓶中称取 20～ 50mg (准确至 0.1mg) 岩石可溶有机物或原油试样 (需事先脱水、除去杂质) ，加入 30mL 正戊烷 (或正己烷、石油醚) 。缓慢摇动，使试样完全溶解。盖塞，静置 12h 以上，使试样中的沥青质充分沉淀。

2) 用塞有脱脂棉的玻璃三角漏斗过滤沥青质，用另一 100mL 具塞三角瓶承接滤液，以正戊烷 (或正己烷、石油醚) 洗涤原三角瓶及脱脂棉至滤液无色为止。

3) 用尽量少的三氯甲烷将称样三角瓶、漏斗和脱脂棉上的沥青质转移至已恒量的称量瓶中，得沥青质馏分溶液。

4) 将滤液转移至 100mL 圆底烧瓶中，在 40℃ 浴温下减压浓缩至 3～ 5mL，备柱层析。

5) 在层析柱 (内径 60～ 80mm) 底部填塞少量脱脂棉，依次加入 3g 硅胶和 2g 中性氧化铝，同时轻击柱壁使其填充均匀。

6) 加入 6mL 正己烷 (或石油醚) 润湿层析柱，用适当容器承接洗出液。当溶剂接近固定相底部时，将待柱层析的试样浓缩液转入层析柱，以每次 5mL 正己烷 (或石油醚)共 6 次淋洗层析柱，用 100mL 三角烧瓶承接饱和烃馏分。

7) 当最后一次加入的正己烷 (或石油醚) 液面接近固定相顶部时，改以每次 5mL 二氯甲烷-正己烷 (或石油醚) 混合溶剂 (2∶ 1 体积比) 共 4 次淋洗层析柱。当第一次加入的混合溶剂进入柱内 3mL (原油试样 2mL) 时，取下承接饱和烃馏分的三角烧瓶，换上承接芳香烃馏分的三角烧瓶。

8) 当最后一次加入的二氯甲烷-正己烷混合溶剂液面接近固定相顶部时，依次用无水乙醇和三氯甲烷各 10mL 淋洗层析柱。当无水乙醇流进柱内 3mL 时，将承接芳香烃馏分的三角烧瓶换为承接非烃的三角烧瓶，至淋洗完成。

9) 将所得各馏分溶液用 100mL 圆底烧瓶在 40℃ 下减压浓缩至 1～ 3mL 后，分别转移至不同的已恒量的称量瓶中，在 40℃浴温下用氮吹仪挥发溶剂至净。

10) 所得各馏分放入干燥器中。每 30min 称重一次，至两次称量之差不大于 0.0005g为止。

11) 按相同流程和条件进行空白值测试。

按下式计算试样中各馏分的质量分数:

岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术

式中:w(S，A，N，B)分别表示饱和烃、芳香烃、非烃和沥青质馏分的质量分数，%m1为称量瓶加馏分的质量，gm2为称量瓶的质量，gm3为组分空白值，gm为试样质量，g。

所得结果应修约到二位小数。