多糖提取中,加入乙醇后什么沉了
是为了除去沉淀物之中的水分。由于水提醇沉法沉淀物多为多糖、蛋白质等大分子复合物,具有较强的吸水性。沉淀物单凭烘干无法除去其中的水分,会使沉淀产物含有较多的水分,影响产物性状(是产物呈胶状,而非粉末状固体)以及纯度是产物无法进行精确的定量分析。醇沉后用无水乙醇洗涤,除去一部分水分;再用可溶于水的丙酮洗涤,确保水分除净;最后用无水乙醚洗涤沉淀物,除去残存的乙醇、丙酮和溶于其中的水分。这样就可以得到较纯的多糖或蛋白质了。
多糖是多羟基的醛或酮,可溶于水,但是在多糖水溶液中加入乙醇会破坏多糖水溶液中的氢键,从而降低多糖在水中的溶解度,使多糖以沉淀的形式析出。不同浓度的醇沉淀的组分不一样,一般采取分级醇沉。醇沉的时候单糖也可以被醇沉出来,醇浓度越高单糖被沉淀出来的量也会越高。
就是利用溶解度,和盐析原理类似。
多糖如果参用分级醇沉,会分出来不同分子量的多糖,但是这仅仅是一个粗分,醇沉很容易包裹一些小分子,导致样品不纯,需要进一步做色谱层析,一般多糖用G25,或者S400(可加压)。
但乙醇中的羟基可以和多糖中的羟基脱水,形成醚键.其反应为成醚反应.
影响因素为温度、催化剂.
由于各种生物碱的结构不同,性质各异,提取分离方法也不尽相同,主要是根据生物碱的溶解度而定。生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂,除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外,一般均不溶或难溶于水,而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。基于这种特性,可用不同的溶剂将生物碱从中药中提出,常用的提取溶剂有下列3种:
(1) 非极性溶剂:样品先用10%氢氧化铵溶液湿润,使中草药中与酸结合成盐的生物碱呈游离状态,然后用氯仿或乙醚等提取,一些与酸结合比较稳定的生物碱盐类和鞣酸盐或碱性较强的生物碱盐等,氢氧化铵不能将其完全分解,可用碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钙或氧化镁,甚至氢氧化钠碱化,这个方法的缺点是不能提出水溶性生物碱。
(2) 极性溶剂:极性较大的生物碱可用中性甲醇、乙醇、酸性甲醇、乙醇、酸水(常用0.1%~1%盐酸、硫酸、乙酸、酒石酸等)以及缓冲液等进行提取,该方法较简便,但提出的杂质较多,需进一步净化。
(3) 混合溶剂:用不同极性的溶剂按不同比例混合,可以较好地进行提取,如麦角用氯仿:甲醇:氢氧化铵(90:9:1),百部、粉防已用乙醚:氯仿:乙醇:10%氢氧化铵溶液(25:8:25:1)等。
水溶性生物碱还可采用与生物碱沉淀试剂如雷氏盐(硫氰化铬铵)、磷钨酸等生成不溶的复盐而从水溶液中析出。生物碱与雷氏盐生成的沉淀可溶于丙酮,再通过阳离子交换树脂,用氢氧化铵洗脱即得游离的生物碱,生物碱与磷钨酸生成的沉淀可与固体碳酸钾研磨使干燥,再用无水乙醇热提。
实际上,每种分析法的建立都要对上述三类溶剂作比较,以优选出最佳提取溶剂。
生物碱的提取方法,常用的有冷浸、渗漉、超声波、索氏提取、热回流提取,由于中药分析所涉及到的大部分内容是有机化合物微量分析,故需要的样品量很少,因此,实际上是少量样品与大量提取溶剂,加上样品又经粉碎过筛,常常冷浸提取液中被测组分浓度与提取液中粉碎的样品内所含被测组分相当,即能提取完全。为了使提取更完全,也常常对上述方法进行组合如冷浸-渗漉,冷浸-超声波,冷浸-索氏提取,冷浸-热回流提取,因冷浸、冷浸-超声波提取操作简便,故使用较多,必要时,要对上述方法作比较,以优选出最佳提取方法。
多糖一般都是食品,或者药品,对卫生条件要求较高。多糖中含有多个羟基,易溶于水,酒精的极性适当,与水完全混溶,乙基使乙醇的极性变低,通过在水溶液中慢慢加入乙醇,使水溶液的极性变低,多糖中的大分子首先沉淀出来,随着酒精浓度的上升,然后逐渐沉淀出中分子和小分子多糖。
采用酒精的另外两个好处就是,酒精无毒性可以食用,酒精可以杀菌,避免多糖产品滋生微生物。