硫酸奎宁的药物分析
方法名称: 硫酸奎宁—硫酸奎宁的测定—非水溶液滴定法
应用范围: 本方法采用非水溶液滴定法测定硫酸奎宁((C20H24N2 O2)2·H2SO4)的含量。
本方法适用于硫酸奎宁的含量测定。
方法原理: 取供试品适量,加冰醋酸溶解,加醋酐与结晶紫指示液1-2滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色。并将滴定结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于24.90mg的(C20H24N2 O2)2·H2SO4,计算,即得。
试剂: 1. 水(新沸放置至室温)
2. 冰醋酸
3. 醋酐
4. 结晶紫指示液
5.高氯酸滴定液(0.1mol/L)
6. 基准邻苯二甲酸氢钾
仪器设备:
试样制备: 1. 结晶紫指示液
取结晶紫0.5g,加冰醋酸100mL使溶解。
2. 高氯酸滴定液(0.1mol/L)
配制:取无水冰醋酸(按含水量计算,每1g水加醋酐5.22mL)750mL,加入高氯酸(70~72%)8.5mL,摇匀,放冷,加无水冰醋酸适量使成1000mL,摇匀,放置24小时。若所测供试品易乙酰化,则须用水分测定法测定本液的含水量,再用水和醋酐调节至本液的含水量为0.01%~0.2%。
标定:取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g,精密称定,加无水冰醋酸20mL使溶解,加结晶紫指示液1滴,用本液缓缓滴定至蓝色,并将滴定结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量,算出本液的浓度。
3. 基准邻苯二甲酸氢钾
贮藏:置棕色玻璃瓶中,密闭保存。
操作步骤: 取本品约0.2g,精密称定,加冰醋酸10mL溶解后,加醋酐5mL与结晶紫指示液1-2滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色,并将滴定结果用空白试验校正。
注1:“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一,“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
注2:“水分测定”用烘干法,取供试品2~5g,平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中,厚度不超过5mm,疏松供试品不超过10mm,精密称取,打开瓶盖在100~105℃干燥5小时,将瓶盖盖好,移置干燥器中,冷却30分钟,精密称定重量,再在上述温度干燥1小时,冷却,称重,至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量,计算供试品中含水量(%)。
参考文献: 中华人民共和国药典,国家药典委员会编,化学工业出版社,2005年版,二部,p.744。
荧光分析法
荧光分析法
附录Ⅳ E. 荧光分析法
某些物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的荧光。物质的
激发光谱和荧光发射光谱,可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶
剂及温度等条件固定时,物质在一定浓度范围内,其发射光强度与溶液中该物质的浓度
成正比关系,可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法
为高,浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用,以及由于在液面附近溶液会吸收激发光,
使发射光强度下降,导致发射光强度与浓度不成正比,故荧光分析法应在低浓度溶液中
进行。
所用的仪器为荧光计或荧光分光光度计,按各药品项下的规定,选定激发光波长和
发射光波长,并配制对照品溶液和供试品溶液。
由于不易测定绝对荧光强度,故荧光分析法都是在一定条件下,用对照品溶液测定
荧光强度与浓度的线性范围后,再在每次测定前,用一定浓度的对照品溶液校定仪器的
灵敏度;然后在相同的条件下,分别读取对照品溶液及其试剂空白的荧光读数与供试品
溶液及其试剂空白的荧光读数,用下式计算供试品浓度:
R<[i]>-R<[ib]>
C<[i]>=×C<[r]>
R<[r]>-R<[rb]>
式中 C<[i]>为供试品溶液的浓度;
C<[r]>为对照品溶液的浓度;
R<[i]>为供试品溶液的荧光读数;
R<[ib]>为供试品溶液试剂空白的荧光读数;
R<[r]>为对照品溶液的荧光读数;
R<[rb]>为对照品溶液试剂空白的荧光读数。
因荧光分析法中的浓度与读数的线性较窄,故(R<[i]>-R<[ib]>)/(R<[r]>-R<[rb
]>)应为0.50~2.0;如有超过,应在调节溶液浓度后再测。
对易被光分解的品种,为使仪器灵敏度定标准确,避免因激发光多次照射而影响荧
光强度,可选择一种激发光和发射光波长与之近似而对光稳定的物质配成适当浓度的溶
液,作为基准溶液,例如蓝色荧光可用硫酸奎宁的稀硫酸溶液,黄绿色荧光可用荧光素
钠水溶液,红色荧光可用罗丹明B水溶液等,在测定供试品溶液时用基准溶液代替对照品
溶液校定仪器的灵敏度。
荧光分析法因灵敏度高,故干扰因素也多。溶剂不纯会带入较大误差,应先作空白
检查,必要时,应用玻璃磨口蒸馏器蒸馏后再用。溶液中的悬浮物对光有散射作用,必
要时,应用垂熔玻璃滤器滤过或用离心法除去。所用的玻璃仪器与测定池等也必须保持
高度洁净。温度对荧光强度有较大的影响,测定时应控制温度一致。溶液中的溶氧有降
低荧光作用,必要时可在测定前通入惰性气体除氧。
荧光析
附录Ⅳ E. 荧光析
某些物质受紫外光或见光照射激发能发射比激发光波较荧光物质
激发光谱荧光发射光谱用作该物质定性析激发光强度、波、所用溶
剂及温度等条件固定物质定浓度范围内其发射光强度与溶液该物质浓度
比关系用作定量析荧光析灵敏度般较紫外光光度或比色
高浓度太溶液自熄灭作用及由于液面附近溶液吸收激发光
使发射光强度降导致发射光强度与浓度比故荧光析应低浓度溶液
进行
所用仪器荧光计或荧光光光度计按各药品项规定选定激发光波
发射光波并配制照品溶液供试品溶液
由于易测定绝荧光强度故荧光析都定条件用照品溶液测定
荧光强度与浓度线性范围再每测定前用定浓度照品溶液校定仪器
灵敏度;相同条件别读取照品溶液及其试剂空白荧光读数与供试品
溶液及其试剂空白荧光读数用式计算供试品浓度:
R-R
C=×C
R-R
式 C供试品溶液浓度;
C照品溶液浓度;
R供试品溶液荧光读数;
R供试品溶液试剂空白荧光读数;
R照品溶液荧光读数;
R照品溶液试剂空白荧光读数
荧光析浓度与读数线性较窄故(R-R)/(R-R<[rb
]>)应0.50~2.0;超应调节溶液浓度再测
易光解品种使仪器灵敏度定标准确避免激发光照射影响荧
光强度选择种激发光发射光波与近似光稳定物质配适浓度溶
液作基准溶液例蓝色荧光用硫酸奎宁稀硫酸溶液黄绿色荧光用荧光素
钠水溶液红色荧光用罗丹明B水溶液等,测定供试品溶液用基准溶液代替照品
溶液校定仪器灵敏度
荧光析灵敏度高故干扰素溶剂纯带入较误差应先作空白
检查必要应用玻璃磨口蒸馏器蒸馏再用溶液悬浮物光散射作用必
要应用垂熔玻璃滤器滤或用离除所用玻璃仪器与测定池等必须保持
高度洁净温度荧光强度较影响测定应控制温度致溶液溶氧降
低荧光作用必要测定前通入惰性气体除氧
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2010 nián bǎn yào diǎn sān bù fù lù Ⅱ
《中华人民共和国药典》(2010年版)三部附录Ⅱ 分光光度法
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度,对该物质进行定性和定量分析的方法。
常用的波长范围为:(1) 200~400nm的紫外光区;(2) 400~760nm的可见光区;(3) 760~2500nm的近红外光区;(4) 2.5~25μm(按波数计为4000~400cm1)的中红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所用仪器应按照国家汁量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。单色光辐射穿过被测物质溶液时,在一定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式:
式中A为吸光度:
T为透光率;
E为吸收系数,采用的表示方法是( ),其物理意义为当溶液浓度为1%(g/ml),液层厚度为1cm时的吸光度数值;
c为100ml溶液中所含被测物质的重量(按干燥品或无水物计算),g;
l为液层厚度, cm。
物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸光度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。
2 附录Ⅱ A 紫外-可见分光光度法仪器的校正和检定2.1 1.波长由于环境因素对机械部分的影响,仪器的波长经常会略有变动,因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外,还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm,253.65nm,275.28nm,296.73nm,313.16nm, 334.15nm, 365.02nm, 404.66nm, 435.83nm.546.07nm与576.96nm或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正;钬玻璃在波长279.4nm,287.5nm, 333.7nm, 360.9nm, 418.5nm, 460.0nm,484.5nm.536.2nm与637.5nm处有尖锐吸收峰,也可作波长校正用,但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化,使用时应注意;近年来,常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器,以10%高氯酸溶液为溶剂,配制含氧化钬(Ho2O3) 4%的溶液,该溶液的吸收峰波长为241.13nm,278.10nm, 287.18nm, 333.44nm, 345.47nm, 361.31nm,416.28nm, 451.30nm, 485.29nm, 536.64nm和640.52nm。仪器波长的允许误差为:紫外光区±1nm,500nm附近±2nm。
2.2 2.吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定.取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg,精密称定,用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml,在规定的波长处测定并计算其吸收系数,并与规定的吸收系数比较,应符合表中的规定。
波长/nm
235(最小)
257(最大)
313(最小)
350(最大)
吸收系数( )的规定值
124. 5
144.0
48.6
106.6
吸收系数( )的许可范围
123.0~126.0
142.8~146.2
47.0~50.3
105.5~108.5
2.3 3.杂散光的检查
可按下表所列的试剂和浓度,配制成水溶液,置1cm石英吸收池中,在规定的波长处测定透光率,应符合表中的规定。
试剂
浓度/% (g/ml)
测定用波长/nm
透光率/%
碘化钠
亚硝酸钠
1.00
5.00
220
340
<0.8
<0.8
对溶剂的婆求
含有杂原子的有机溶剂,通常均具有很强的末端吸收。因此,当作溶剂使用时,它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。另外,当溶剂不纯时,也可能增加干扰吸收。因此,在测定供试品前,应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求,即将溶剂置1cm石英吸收池中,以空气为空白(即空白光路中不置任何物质)测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度,在220~240nm范围内不得超过0.40,在241~250nm范围内不得超过0.20,在251~300nm范围内不得超过0.10,在300nm以上时不得超过0.05。
测定法
测定时,除另有规定外,应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照,采用1cm的石英吸收池,在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸光度,或由仪器在规定波长附近自动扫描测定,以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除另有规定外,吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内,并以吸光度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸光度读数,以在0.3~0.7之间为宜。仪器的狭缝波带宽度宜小于供试品吸收带的半高宽度的十分之一,否则测得的吸光度会偏低;狭缝宽度的选择,应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收,因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数,或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。
当溶液的pH值对测定结果有影响时,应将供试品溶液的pH值和对照品溶液的pH值调成一致。
1.鉴别和检查 分别按各品种项下规定的方法进行。
2.含量测定 一般有以下几种方法。
(1)对照品比较法 按各品种项下的方法,分别配制供试品溶液和对照品溶液,对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%,所用溶剂也应完全一致,在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后,按下式计算供试品中被测溶液的浓度:
cx(AX/AR)CR
式中cx为供试品溶液的浓度;
Ax为供试品溶液的吸光度;
CR为对照品溶液的浓度;
AR为对照品溶液的吸光度。
(2)吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液,在规定的波长处测定其吸光度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时,吸收系数通常应大于100,并注意仪器的校正和检定。
(3)计算分光光度法 计算分光光度法有多种,使用时应按各品种项下规定的方法进行。当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响,故对照品和供试品的测试条件应尽可能一致。计算分光光度法一般不宜用作含量测定。
(4)比色法 供试品本身在紫外一可见光区没有强吸收,或在紫外光区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度,可加入适当的显色剂,使反应产物的最大吸收移至可见光区,这种测定方法称为比色法。
用比色法测定时,由于显色时影响显色深浅的因素较多,应取供试品与对照品或标准品同时操作。除另有规定外,比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液,然后依次加入等量的相应试剂,并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度后,按上述(1)法计算供试品浓度。
当吸光度和浓度关系不呈良好线性时,应取数份梯度量的对照品溶液,用溶剂补充至同一体积,显色后测定备份溶液的吸光度,然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线,再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度,并求出其含量。
3 附录Ⅱ B 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法的测量对象是呈原子状态的金属元素和部分非金属元素,系由待测元素灯发出的特征谱线通过供试品经原子化产生的原子蒸气时,被蒸气中待测元素的基态原子所吸收,通过测定辐射光强度减弱的程度,求出供试品中待测元素的含量。原子吸收分光光度法遵循分光光度法的吸收定律,一般通过比较对照品溶液和供试品溶液的吸光度,求得供试品中待测元素的含量。
3.1 对仪器的一般要求所用仪器为原子吸收分光光度计,由光源、原子化器、单色器和检测系统等组成,另有背景校正系统、自动进样系统等。
3.1.1 1.光源常用待测元素作为阴极的空心阴极灯。
3.1.2 2.原子化器主要有四种类型:火焰原子化器、石墨炉原子化器、氢化物发生原子化器及冷蒸气发生原子化器。
(1)火焰原子化器 由雾化器及燃烧灯头等主要部件组成。其功能是将供试品溶液雾化成气溶胶后,再与燃气混合,进入燃烧灯头产生的火焰中,以干燥、蒸发、离解供试品,使待测元素形成基态原子。燃烧火焰由不同种类的气体混合物产生,常用乙炔-空气火焰。改变燃气和助燃气的种类及比例可以控制火焰的温度,以获得较好的火焰稳定性和测定灵敏度。
(2)石墨炉原子化器 由电热石墨炉及电源等部件组成。其功能是将供试品溶液干燥、灰化,再经高温原子化使待测元素形成基态原子。一般以石墨作为发热体,炉中通入保护气,以防氧化并能输送试样蒸气。
(3)氢化物发生原子化器 由氢化物发生器和原子吸收池组成,可用于砷、锗、铅、镉、硒、锡、锑等元素的测定。其功能是将待测元素在酸性介质中还原成低沸点、易受热分解的氢化物,再由载气导入由石英管、加热器等组成的原子吸收池,在吸收池中氢化物被加热分解,并形成基态原子。
(4)冷蒸气发生原子化器 由汞蒸气发生器和原子吸收池组成,专门用于汞的测定。其功能是将供试品溶液中的汞离子还原成游离汞,再由载气将汞蒸气导入石英原子吸收池,进行测定。
3.1.3 3.单色器其功能是从光源发射的电磁辐射中分离出所需要的电磁辐射,仪器光路应能保证有良好的光谱分辨率和在相当窄的光谱带(0.2nm)下正常工作的能力,波长范围一般为190.0~900.0nm。
3.1.4 4.检测系统由检测器、信号处理器和指示记录器组成,应具有较高的灵敏度和较好的稳定性,并能及时跟踪吸收信号的急速变化。
3.1.5 5.背景校正系统背景干扰是原子吸收测定中的常见现象。背景吸收通常来源于样品中的共存组分及其在原子化过程中形成的次生分子或原子的热发射、光吸收和光散射等。这些干扰在仪器设计时应设法予以克服。常用的背景校正法有连续光源(在紫外光区通常用氘灯)、塞曼效应、自吸效应等。
在原子吸收分光光度分析中,必须注意背景以及其他原因引起的对测定的干扰。仪器某些工作条件(如波长、狭缝、原子化条件等)的变化可影响灵敏度、稳定程度和干扰情况。在火焰法原子吸收测定中可采用选择适宜的测定谱线和狭缝、改变火焰温度、加入络合剂或释放剂、采用标准加入法等方法消除干扰;在石墨炉原子吸收测定中可采用选择适宜的背景校正系统、加入适宜的基体改进剂等方法消除干扰。具体方法应按各品种项下的规定选用。
3.2 测定法3.2.1 第一法(标准曲线法)在仪器推荐的浓度范围内,制备含待测元素的对照品溶液至少3份,浓度依次递增,并分别加入各品种项下制备供试品溶液的相应试剂,同时以相应试剂制备空白对照溶液。将仪器按规定启动后,依次测定空白对照溶液和各浓度对照品溶液的吸光度,记录读数。以每一浓度3次吸光度读数的平均值为纵坐标、相应浓度为横坐标,绘制标准曲线。按各品种项下的规定制备供试品溶液,使待测元素的估计浓度在标准曲线浓度范围内,测定吸光度,取3次读数的平均值,从标
准曲线上查得相应的浓度,计算元素的含量。
3.2.2 第二法(标准加入法)取同体积按备品种项下规定制备的供试品溶液4份,分别置4个同体积的量瓶中,除(1)号量瓶外,其他量瓶分别精密加入不同浓度的待测元素对照品溶液,分别用去离子水稀释至刻度,制成从零开始递增的一系列溶液。按上述标准曲线法自“将仪器按规定启动后”操作,测定吸光度,记录读数;将吸光度读数与相应的待测元素加入量作图,延长此直线至与含量轴的延长线相交,此交点与原点间的距离即相当于供试品溶液取用量中待测元素的含量(图)。再以此计算供试品中待测元素的含量。此法仅适用于第一法标准曲线呈线性并通过原点的情况。
图 标准加入法测定图示
当用于杂质限度检查时,取供试品,按各品种项下的规定,制备供试品溶液;另取等量的供试品,加入限度量的待测元素溶液,制成对照品溶液。照上述标准曲线法操作,设对照品溶液的读数为α,供试品溶液的读数为b,b值应小于(ab)。
4 附录Ⅱ C 荧光分析法某些物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的荧光。物质的激发光谱和荧光发射光谱,可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时,物质在一定浓度范围内,其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系,可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外-可见分光光度法为高,但浓度太高的溶液会有“自熄灭”作用,以及由于在液面附近溶液会吸收激发光,使发射光强度下降,导致发射光强度与浓度不成正比,故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。
4.1 测定法所用的仪器为荧光计或荧光分光光度计,按各品种项下的规定,选定激发光波长和发射光波长,并制备对照品溶液和供试品溶液。
通常荧光分析法都是在一定条件下,用对照品溶液测定荧光强度与浓度的线性关系。当线性关系良好时,可在每次测定前,用一定浓度的对照品溶液校正仪器的灵敏度;然后在相同的条件下,分别读取对照品溶液及其试剂空白的荧光强度与供试品溶液及其试剂空白的荧光强度,用下式计算供试品浓度:
式中 cx为供试品溶液的浓度;
cr为对照品溶液的浓度;RX为供试品溶液的荧光强度;
RXb为供试品溶液试剂空白的荧光强度;
Rr为对照品溶液的荧光强度;
Rrb为对照品溶液试剂空白的荧光强度。
因荧光分析法中的浓度与荧光强度的线性较窄,故(RXRXb)/(RrRrb)应控制在0.5~2之间为宜,如若超过,应在调节溶液浓度后再测。
当浓度与荧光强度明显偏离线性时应改用工作曲线法。
对易被光分解或弛豫时间较长的品种,为使仪器灵敏度定标准确,避免因激发光多次照射而影响荧光强度,可选择一种激发光和发射光波长与供试品近似而对光稳定的物质配成适当浓度的溶液,作为基准溶液,例如蓝色荧光可用硫酸奎宁的稀硫酸溶液,黄绿色荧光可用荧光素钠水溶液,红色荧光可用罗丹明B水溶液等。在测定供试品溶液时选择适当的基准溶液代替对照品溶液校正仪器的灵敏度。
4.2 【注意事项】荧光分析法因灵敏度高,故应注意以下干扰因素。
(1)溶剂不纯会带入较大误差,应先做空白检查,必要时,应用玻璃磨口蒸馏器蒸馏后再用。
(2)溶液中的悬浮物对光有散射作用,必要时,应用垂熔玻璃滤器滤过或用离心法除去。
(3)所用的玻璃仪器与测定池等也必须保持高度洁净。
(4)温度对荧光强度有较大的影响,测定时应控制温度一致。
(5)溶液中的溶氧有降低荧光作用,必要时可在测定前通人惰性气体除氧。
(6)测定时需注意溶液的pH值和试剂的纯度等对荧光强度的影响。
5 附录Ⅱ D 火焰光度法某些含堿金属或堿土金属元素的供试品溶液用喷雾装置以气溶胶形式引入火焰光源中,靠火焰的热能将供试品元素原子化并激发出它们的特征光谱,通过光电检测系统测量出待测元素特征谱线的强度可求出供试品中待测元素的含量。通常借比较对照品溶液和供试品溶液的发光强度,求得供试品中待测元素的含量。
5.1 对仪器的一般要求所用仪器为火焰光度计,由燃烧系统、单色器和检测系统等部件组成。
燃烧系统由喷雾装置、燃烧灯以及供应燃料气体和助燃气体的装置等组成。燃烧火焰通常是用空气作助燃气、用煤气或液化石油气等作燃料气组成的火焰,即空气-煤气或空气-液化石油气火焰。
仪器某些工作条件(如火焰类型、火焰状态、空气压缩机供应压力等)的变化可影响灵敏度、稳定程度和干扰情况,应按各品种项下的规定选用。
5.2 测定法
9、当斗鱼长到2月龄时,渐渐可以分出公母,就可以开始公母挑选了。
说到这里,最主要的要点和宗旨是好的水质和好的饵料培育出好的斗鱼,这两个条件是养殖热带鱼至关重要的。
种类很多,品种诸如丽丽鱼,曼龙鱼,斗鱼都有,价格不等,一般3~10元都有。
还有这类鱼一般会吐泡沫保护小鱼哦,不用担心吃掉!
斗鱼很好斗,两只雄鱼一定要分开放!
斗鱼养殖与饲育
泰国斗鱼因为所需生活空间不大而且颜色艳丽, 常成为大家第一次养鱼的经验, 但也因为大家都认为它容易养, 所以真正养得好的人并不多, 其实斗鱼如果好好照顾, 它会以您从未见过的美丽来回报您. 台湾每年进口泰国改良型斗鱼在十万只以上, 但这些斗鱼的余生通常是在窄小的容器, 混浊而充斥排泄物的水中度过, 笔者甚至曾在网络上看到有网友问斗鱼需不需要喂食, 可见一般人对斗鱼的误解, 在此笔者不得不为斗鱼叫屈在它原生的环境中常有剧烈的环境变动, 所以造就了它对恶劣环境的适应力, 可是大家可不要因为它对水质及食物不好的忍受力强, 就不断的考验它, 它可是会生病抗议的.
一般一只成熟的雄斗鱼约需要五到十公升的容器, 如果您用的容器不是方形的, 你可以用1.25公升的保特瓶来测试, 至少要能装超过4瓶才算及格如果您肯每天帮它清理排泄物, 它更会在心中默默感谢你这个好主人, 清理排泄物, 并不代表一定要换水, 用一根筷子绑上适当长度的风管, 再利用虹吸现象, 就可以帮助您快速清理缸底的污秽, 此外一根简单的滴管也是个不错而方便的的选择只要空间够大, 勤于清除废物再加满水, 几乎就可以替代所有换水的工作.
除了生理环境方面, 心理的层面也很重要, 通常这是斗鱼主人最不注意的部份, 但这也是最令观察入微的人沉醉的地方一般养斗鱼的人常觉得他的斗鱼只有喂食的时候较有精神, 其它时候常静静的不动, 您可能不知道, 它不一定正在生气您不肯帮它找些娱乐您可以常常帮它找些活饵, 让他它享受一番狩猎的乐趣, 活的水蚤 小丰年虾 丝蚯蚓等都是不错的选择, 有打死的蚊子也可以丢给它补一补, 毕竟它绝不是素食主义者或者您也可以养一只以上的斗鱼, 让它们隔缸相望彼此炫耀, 这些都是不错的方法. 减少环境的紧迫因子, 让它过得舒服自在, 就如同刚开的百合花, 如果把雄蕊摘去, 则因雌蕊的等待授精会延长花开的时间一样, 了解它并给它良好的生活环境及朝气蓬勃的伙伴, 会让您的斗鱼对疾病抵抗力增强, 而且更能快乐长寿.
以斗鱼强健的体质而言, 如果有一个良好的环境是很难生病的, 不过在一些意外的情况下生病, 我们还是要尽一个好主人的本份加以治疗. 斗鱼最常见的疾病是有缩鳍, 体色变暗及食欲不振的现象 , 这通常是因为空间过小或者长期水质不良, 所引起鳃或全身的细菌性感染, 除非感染过久或病入膏肓, 否则用市售一般细菌性的药就可以让它病情好转, 不过如果您不能改善它的生活环境, 它会一再的染病白点病也是它常得的疾病, 尤其是在冬天温度较低时, 或换水温差过大另外丝绒病也是它常得的疾病, 丝绒病的病征是全身布满细小的白粉, 其白色点状物比白点病小很多, 这是一些原生虫的寄生, 可以用治原生虫的药来医治. 适当的空间不过低的温度, 多变的食谱及可以炫耀的邻居, 是斗鱼不容易生病的快乐天堂, 就看您怎么帮它安排了.
一般在水族馆中我们常看到的都是长尾型的斗鱼(或称马尾型) , 也有少部份圆尾斗鱼(短尾型), 今年有一些业者引进双尾斗鱼, 这是隐性基因的尾型, 提供了斗鱼爱好者另一个选择, 其实改良型斗鱼的种类不仅于此, 它的分类可以依鳍型及颜色来判别. 在鳍型方面, 可粗略分为单尾及双尾, 一般我们用英文缩写来代表, ST代表单尾(Single Tail), DT代表双尾(Double Tail), 如果有第三个英文字母, 则是以 M 和 F 代表雄性和雌性, 以 DTF 为例便是代表双尾的母鱼 单尾又大致可分为圆尾,长尾,团尾及扇尾, 此外还有鳍缘呈康乃馨花瓣般的美丽锯齿状, 被称为鸡冠尾.
团尾斗鱼市面上很少见 , 在这里特别提到它是因为它是扇尾斗鱼的前身 , 扇尾斗鱼便是由此改良而来的 , 不过您想自己做出扇尾斗鱼 , 可不是一两代就能达成的目标 这两三年日本因为扇尾斗鱼的出现 , 而掀起了一阵斗鱼的热潮 , 杂志也争相报导 , 因为它饱满而圆大的鳍型 , 在日本它们被称为 Show Betta 这种改良品种出现至今不到五年 , 当初笔者第一次见到照片 , 对它的美丽也是惊叹不已 , 它鳍型的饱满固然是基因的影响 , 但鳍型长而大却与营养及生活环境有很大的影响 , 所以笔者才会在前面提到 , 给斗鱼好的环境您会发现它不止那么美丽 , 即使是一般的长尾斗鱼 , 好好照顾也会有不一样的表现.
改良型斗鱼在色彩方面 , 由四种基本色素或有或无组合而成 , 有 256 种可能, 这也是它另一个引人入胜的地方, 色彩再加上其斑纹分布的基因, 提供爱好者无限的发展空间 斗鱼简单的颜色分类 , 可以分成浅色身体(Light Body) 及深色身体(Dark Body) 两大类 , 浅色身体的类型在国外被称为 Combodia , 据说是因为50年代有鱼商在柬埔寨进口的鱼货中 , 发现这种近似白化的美丽斗鱼 , 以地名称之而延用至今 改良型斗鱼的详细分类 , 是以色彩斑纹分为单色(Concolorous) , 双色(Bicolor) , 大理石纹(Marble) 及蝶翼(Butterfly) . 一般市面上较常看到单色的个体 , 其它就颇为稀少 .
单色系我们可以分为白 黄 红 蓝 黑等五个主要的颜色 . 红色及蓝色在市面上是最常见的 , 尤其纯红色的斗鱼更是为多数鱼迷所喜好 , 蓝色除了一般常见带有强烈金属色的蓝以外 , 还有一种纯朴高雅带较少金属色的蓝 , 被称为 Steel Blue , 有些业者将其译为铁锈蓝 , 有些业者则因其底色中往往有黑色圆点而称它为黑珍珠 . 白 黄两色就单色鱼种而言难度是较高的(97年时 笔者尚未接触白色 ,98年后开始繁殖才知道白色的难度不高,约与红 蓝色同等级) , 白色系可分为不透明的白和完全无色透明的肤色 , 都是黑色素缺乏所致 , 有些白色个体带有蓝色或绿色,因而呈现粉蜡笔颜色的笔触 (Pastel) , 有些业者将它翻译为淡彩系列 , 黄色亦可分为透明及不透明两种 , 目前市面上黄色的透明型可以以黄金长尾斗鱼为代表 (97年时, 不像现今还有黄色圆尾斗鱼) . 就难度而言 , 黑色系可说是各国斗鱼玩家所追求的最高境界 , 目前全世界尚没有人能够培养出百分之百的纯黑斗鱼 , 也因此使得许多高手醉心投入废寝忘食 , 只希望能够突破 .
双色这个名词在斗鱼颜色上专指身体及鳍各一种颜色,最常见的是白身红鳍或黄身红鳍的个体,鳍、身两色以分明为佳。大理石纹是以肤色或白色等浅色身体为底色,覆盖黑色或蓝色等斑块,大部份的个体我们可以用浅或斑驳的头部颜色来判断,它身上斑块的大小及分布有无限的可能,极富趣味性,它的颜色变化我们可以用锦锂来比拟,只不过它比较少出现黄、红等暖色调的颜色。而所谓的蝶翼则是指鳍的颜色由内而外呈现环状的清晰分布,可能有两层或两层以上,基本上内层以红色为主,其它颜色则很少见,不过您如果想培育两层以上的蝶翼斗鱼,光用红色是不够的,蝶翼的个体一般人在第一次看见时,除了讶异它的美丽之外,大部份的人都会认为只是挑出来的个体,而不是基因遗传,笔者当初亦是如此认为,但其实际确为基因遗传,可以繁殖验证。
斗鱼基因的问题,不似孔雀鱼基因已有许多人在讨论,目前国内外都很少文献发表,笔者也仅能了解自己已繁殖过的种类,不过就因为它的一片空白,相信一定可以为你带来更多像是发现宝藏的乐趣。在水族宠物世界中,有许多鱼种因为人工繁殖改良的可行性高,而吸引许多玩家投入这迷人的水族世界,而泰国斗鱼也是其的一种,在这些繁殖改良可行性高的鱼种中,除了历史悠久的锦锂、金鱼外,七彩神仙、孔雀鱼及泰国斗鱼,算是三个主要代表性的改良鱼种。
七彩神仙虽然高贵美丽,体型较大适于展示,但一般七彩神仙一个世代约需八个月至两年的时间,野生七彩神仙可能更不止于此,除非是职业鱼场,空间及时间都许可,否则想要做品种改良殊为不易。孔雀鱼因为颜色艳丽,繁殖容易且世代短,目前受到许多玩家的喜爱,不过泰国鱼鳍型及颜色变化决不逊于孔雀鱼,其自出生到生育下一代也趴需四到六个月,而且它的体形较大,更提升了观赏价值,它在基因方面也非常的多变,新的颜色及鳍型容易出现,像95年所发表的黄金双尾斗鱼,便是一个例子,它的黄色是带有金属色泽的金色,而不是一般的黄色斗鱼,虽然它还带有部份蓝黑色不是纯色,不过也是非常特别。斗鱼在育成方面和孔雀鱼一样,良好的鳍型及体型还是需要细心的照料,它才能完美的展现出它的美丽。
泰国斗鱼在台湾水族爱好者的市场一直没有被注意,粗俗廉价,不容易死,好象是一般人的印象,此外还有更多以讹传讹是而非的观念;日后笔者会再为大家介绍泰国改良型斗鱼的种种,希望事实上俱有沉稳王者风范及积极进取个性的斗鱼,在您了解它后会喜欢上它,此外笔者另一个最重要的任务就是为目前府上的小斗鱼请命,希望在您更了解它后,可以给它更舒适的生活环境,屈时你会发现它每天都会精神抖擞的展现它最美丽的一面。
改良型斗鱼繁殖饲育
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原先一直没写文章叙述斗鱼繁殖的部份, 是因为斗鱼的繁殖量实在太大, 随便生一胎通常都有200只左右, 笔者最高一次曾养大650只以上, 着实吓人, 其后所衍生的需求并不是一般爱好者, 简单的几个瓶瓶罐罐所能解决的, 所以笔者希望读者在看完这篇文章后, 更要慎重考虑繁殖后的结果, 毕竟生命是多么沉重的负担啊!
有了繁殖斗鱼斗鱼的念头后, 一般都是从挑选优秀的种鱼入手, 公鱼当然要活泼健康, 到水族馆挑选时, 趴着一动不动, 看到同伴一点反应都没有的个体就不用考虑了, 很多水族馆卖斗鱼, 连包装都懒得打开, 除非是刚进货, 否则就不要考虑, 太瘦的个体也要斟酌一下问清楚, 不管是问同好或店家, 很多斗鱼因为已经卖太久, 而店家用以展示的空间又太小, 水质的酸化已经非常严重, 所以同好常有一买回家换完水, 当天或隔天就溶鳍的现像, 让很多同好都非常的心疼. 其实刚买回家的斗鱼, 除非对店家处理斗鱼的方式有一定程度的了解, 否则回家换水的比例不要太大, 虽然发生溶鳍状况的死亡率不是很高, 但要恢复它的美丽就没有那么容易了. 母鱼的挑选应该着重腹部后方的饱满, 那是卵巢位置的所在, 所谓判断母鱼白色排卵管并不是很准确的方法. 另外店家饲养的状况也很重要, 如果同缸中有死鱼, 最好能考虑稍候几天再购买, 其实一般母斗鱼的价钱并不高, 问题是店家能养好母斗鱼的不多, 如果常逛水族馆的同好, 一定常常看到店家挂鱼的惨况, 在健康的前提下, 母鱼的横纹(注一)如果有出现, 是可以优先挑选的个体. 除了公母鱼的个别条件外, 彼此的大小类别也要注意, 一般公母鱼的大小差距笔者会以鱼体长度为基准, 母鱼连尾部的长度大概与公鱼不计尾部长度相当即可. 公母鱼的种类最好一样, 像市面上 长尾, 双尾, 扇尾的个体算同一类, 与圆尾这一类体型上有很大的差异, 如果想要做不同类的繁殖要更加的小心在意, 以避免伤亡的发生.
挑到了优秀的种亲后我们就要来预备它们的新房了, 很多繁殖斗鱼的同好常用用市售所谓的斗鱼格来进行, 其实斗鱼格用来暂时饲养是可以的, 但如果用来长期饲养或繁殖都不太恰当 , 如果是长期饲养, 因为水质的恶化, 常会有腹水或立鳞的疾病发生, 用来繁殖的话, 常会有悲惨伤亡的发生, 这都是有爱心的饲主所不愿看到的. 笔者用来繁殖的空间大约都在8~12公升的水族箱, 除非您可以随时看顾, 否则比八公升(注二)小的空间, 似乎不太适宜, 激烈的争斗会造成亲鱼的伤亡, 虽然公鱼打不赢母鱼的话不容易繁殖成功, 但是那也是以母鱼的鳍稍有破损为准, 母鱼的鳍被咬个精光, 甚至身体受伤都是可以避免的, 就看您怎么帮它们安排了. 有了缸子后, 装满水不要忘了帮母鱼或公鱼准备躲藏的地方, 一团莫丝或小榕等植物都是不错的选择, 如果公母鱼不太成熟打算先一起饲养 或已成熟但打算长期一起饲养的话, 不要忘了准备一个小的海棉过滤器, 来维持水质的稳定.
鱼的入缸也有一些小技巧, 因为鱼也是有地域势力, 先来后到的观念. 准备好新房先将母鱼放入让她熟悉个几天, 再把公鱼放入, 母鱼被打得很凄惨的机率就会大大的降低, 当然即使躲藏环境,先来后到 等细节都注意到了, 刚放在一起相处状况的观察还是最重要的, 如果争斗得太激烈都要先将它们分开, 休息个半天一天, 再重新让它们在一起, 如此反复动作, 一直到母鱼可以一起与公鱼进食, 就算大功告成了. 先前提到准备的植物是让公母鱼躲藏, 是因为笔者曾有一只非常凶悍的母鱼, 因为当时难得有全黄色的母鱼(大约两年前), 所以一直希望她能繁衍下一代, 结果因为没碰过老婆修理老公的情形, 一不小心就损失三只优秀的公鱼了, 所以准备新房到繁殖, 样样都要小心翼翼. 很多同好都认为斗鱼很好生, 因为他们把公母鱼丢在一起, 一两天就生了, 这通常是在很小容器的状况下, 所谓丢在一起不是生了就是死了, 希望同好不要使用这种残忍的方式来繁殖, 生命的尊重应该是水族同好所必须具备的美德, 不爱它如何能了解它, 让它展现最美丽的一面呢?
在一起饲养的过程中要注意, 公母鱼强弱势的状况, 如果母鱼抢食很快要留意不要让母鱼吃太多, 一但母鱼长得太巨大, 公鱼可能就会被修理得很惨了, 当初想繁殖的愿望也就不可能实现. 有时努力将公母鱼养在一起很久, 等待它们繁殖是必要的, 因为有时我们没办法同时找到想要的个体 , 一但找到了岂能一不小心使其中一方伤亡, 而白白浪费了繁殖优秀下一代的机会. 还记得站长刚开始养斗鱼时(1996), 有一次为了找类似的公母鱼就花了大概两个月, 等找到了养在一起就是不生, 苦苦等了将近三个月才终于繁殖成功, 为了它们还中断了计划已久的旅游行程, 不过一切的牺牲, 在看到近四百只白化的双尾斗鱼逐渐长大, 就都不算甚么了. ------
如果想做到斗鱼”配对零伤亡”, 各方面都要小心注意, 之前笔者的经验, 有时配对不到半天就生了, 但也有一起养了三个月才生的. 身为一个好的斗鱼主人千万要记得不能因为急着想看它们繁殖而伤害了它们, 对生命的尊重, 应该是水族爱好者应有的美德, 像上期笔者提到有些同好, 用很小的空间繁殖, 太激烈的争斗, 不仅太残忍也太不人道, 也违背了笔者写这些文章推广斗鱼饲养的原意. 当一对斗鱼情投意合开始交配时, 鱼类繁殖方式中最缠绵的画面就呈现在你的面前了. 您打算有耐心的等待这一刻, 还是草草了事只为了赶快看到它们交配, 而伤害它们?
鱼类繁殖各个不同形式中, 最拟人化的我想应该是斗鱼吧, 不管是泡巢或口孵的方式, 因为其中包含了 ”公鱼拥抱母鱼” 的动作, 这是一般体外授精的鱼类所没有的. 当母鱼有意愿想配对时, 母鱼会对公鱼所做的泡巢露出兴味的模样, 在公鱼忙碌的浮上水面吸气做泡巢的同时, 母鱼也会进出泡巢的下方, 像是评查公鱼泡巢的工作进度一样, 也像是在满心期待它们爱的小窝完成的样子, 而公鱼在母鱼游近时也会展开全身美丽的鳍向母鱼夸示, 母鱼离去它又开始忙碌的工作.
当一切准备工作就绪, 公母鱼就会浮着头在水面开始绕圈圈, 经过几次的尝试, 公鱼弯着腰呈U字形的抱住母鱼, 并将母鱼反转腹部向上, 二者同时射精并排卵, 当公鱼看到一颗颗晶莹的卵粒向下掉时, 就会急忙的放下母鱼, 去将卵一一衔入口中, 并将这些未来的小生命细心的塞入泡巢中, 此时母鱼也从欢愉的晃惚中清醒过来, 短暂的展鳍夸示后又绕着圈圈反复交配的动作. 通常这样的时间会持续三到六个钟头, 等完成后公鱼就会将母鱼赶走, 独自一人照顾它们的宝贝蛋.
温度如果在二十八度上下, 小斗鱼在48小时左右就会孵化了, 刚出生的小斗鱼还不会游泳, 每只都头上尾下的黏在泡巢上, 即使掉在缸底一有风吹草动也会奋力的往上游, 等小斗鱼打横我们就要来帮它们准备食物了, 孵丰年虾苗应该是最方便的, 笔者都是用这个方法, 当然也有许多同好, 有许多不同的创意, 像淡水水蚤就是不错的方式, 许多浮游生物也都是很好的小鱼饵料. 只要注意适口性及对水质的影响就不容易出错了.
还记得笔者第一次带小斗鱼(1996)是用所谓淡水虾苗的粉末饲料, 虽然弄得很麻烦, 不过那次也带大了一百五十只左右的小斗鱼, 只要细心其实都没问题. 不过大家会碰到最多人建议的绿水, 反而养活小鱼的机率不高, 可能只有五到十五个百分比, 大概二三十只吧, 这是因为小斗鱼是肉食性的, 绿藻对它们没有帮助, 绿水中吃绿藻的浮游生物才是小斗鱼的最爱, 不过量都太少了, 对这些刚出世的大胃王是绝对不够的.
如果喂食正常,小斗鱼出世一个月左右就会有零点八公分左右了,如果您繁殖的是双尾斗鱼,大约七到十天大小斗鱼就可以看出来是双尾的,鱼的尾巴可以看出来是ㄚ字形的,非常可爱。正常的喂鱼及换水就如同一般养鱼的要领一样,三个月大时,公鱼的性征就会一一显现出来,甚至开始吐泡巢,公鱼鳍变长的顺序是臀鳍、背鳍,最后才是尾鳍;如果臀鳍往下拉长并往后拖出尖尖的形状,就可以捞出分开饲养。
因为斗鱼的生命期不长,所以它鳍的再生能力并没有其它生命期较长的鱼类那么的好,一但因争斗而伤害到鳍,日后就算鳍长长了也无法完全恢复,一能辨认出是公鱼就分开饲养,应该是维持公鱼美丽的最好方法。另一方面,由于每只小斗鱼进食的速度不同,如果喂食量不够可能会使同一批的小鱼大小差很多,大约一个月大就要注意小鱼的大小,如果大小差太多最好还是分开饲养,以免发生哥哥姐姐虐杀弟妹的情形。
另一个大家会关心的事可能是关于小鱼养大后会是甚么颜色或鳍型如何的问题,在笔者数十次繁殖斗鱼并养大的经验中,颜色及鳍型要在四个半月到半年才能肯定,像颜色可能在成长的过程因为移缸饲养或水质的改变,都可能使颜色发生变化。
有一次笔者一只四个月大的单尾扇尾蝶翼公鱼就因为移缸饲养,内圈的红色竟然在一周内就完全消失,内圈变成透明无色,外圈则仍维持原来的蓝色,有些白色的个体也会因为移缸饲养而出现部份黑色杂斑,随着水质的变化可能又回复纯白;这部份变色的问题,笔者也还找不到一定的规律,希望诸位同好能一同来发掘这个秘密。至于鳍型的部份可能更要五个月以上才能确定,发育良好的扇尾公斗鱼在三个半月左右,每只尾鳍撑开几乎都是180度的,但随着时间的过往可能就不是如此了,如果说要一个比较明确的判别标准,应该说当公斗鱼尾鳍的长度超过身长的四分之三,或者鱼的体长超过三公分(不含尾鳍),才能肯定这只公斗鱼的品质吧。
在千禧年完成了笔者的第三篇有关斗鱼的文章感到非常欣喜,这一年来喜爱斗鱼的人口也越来越多了,期盼在斗鱼爱好者人口增加的同时,也能提升疼爱小斗鱼的人口比例,残忍的互咬比赛或恶劣的饲养环境希望都能越来越少。希望每个在桌上养着斗鱼的人们,当坐到桌前看到斗鱼在对您摇头摆尾时,都能了解您是寂寞的斗鱼唯一的朋友,您如果不能照顾它们的话,它们还能依*谁呢 ?
斗鱼雌雄鉴别方法
扇尾跟泰斗
公鱼的特征.本站收集一些图片几乎都是公鱼.所以有比赛鱼图片都是公鱼.
母鱼的特征.腹鳍的末缘跟公鱼不同.母鱼腹鳍末缘还会拖细细的1根(如果没被咬掉的话..)
母鱼在腹鳍与臀鳍中间有一颗白黄色的生殖孔.
母鱼的各鳍都是短短的不像公鱼一样能拉长.母鱼肚子微涨.
冠尾斗鱼.
母鱼在腹鳍与臀鳍中间有一颗白黄色的生殖孔.
母鱼的各鳍都是短短的不像公鱼一样能拉长.母鱼肚子微涨.
圆尾斗鱼.
母鱼的特征.腹鳍的末缘跟公鱼不同.母鱼腹鳍末缘还会拖细细的1根(如果没被咬掉的话)
母鱼在腹鳍与臀鳍中间有一颗白黄色的生殖孔.
母鱼的肚子微涨.
母鱼颜色较不鲜艳(不是很可*)
蓝战狗(成鱼).公鱼的鳃盖有明显的蓝色斑点.母鳃盖斑点较不明显.(需多只比较才可分辨)
红战狗(成鱼).公鱼有鲜艳的颜色
某些物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的荧光。物质的激发光谱和荧光发射光谱,可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时,物质在一定浓度范围内,其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系,可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高,但浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用,以及由于在液面附近溶液会吸收激发光,使发射光强度下降,导致发射光强度与浓度不成正比,故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。
由于不易测定绝对荧光强度,故荧光分析法都是在一定条件下,用对照品溶液测定荧光强度与浓度的线性范围后,再在每次测定前,用一定浓度的对照品溶液校正仪器的灵敏度;然后在相同的条件下,分别读取对照品溶液及其试剂空白的荧光读数与供试品溶液及其试剂空白的荧光读数,用下式计算供试品浓度:
式中CX为供试品溶液的浓度;
Cr为对照品溶液的浓度;
RX为供试品溶液的荧光读数;
RXb为供试品溶液试剂空白的荧光读数;
Rr为对照品溶液的荧光读数;
Rrb为对照品溶液试剂空白的荧光读数。
因荧光分析法中的浓度与读数的线性较窄,故(RX-RXb)/(Rr-Rrb)应为0.50~2.0;如有超过,应在调节溶液浓度后再测。偏离线性时应改用工作曲线法。
对易被光分解或驰豫时间较长的品种,为使仪器灵敏度定标准确,避免因激发光多次照射而影响荧光强度,可选择一种激发光和发射光波长与之近似而对光稳定的物质配成适当浓度的溶液,作为基准溶液,例如蓝色荧光可用硫酸奎宁的稀硫酸溶液,黄绿色荧光可用荧光素钠水溶液,红色荧光可用罗丹明B水溶液等。在测定供试品溶液时用基准溶液代替对照品溶液校正仪器的灵敏度。
荧光分析法因灵敏度高,故干扰因素也多。溶剂不纯会带入较大误差,应先作空白检查,必要时,应用玻璃磨口蒸馏器蒸馏后再用。溶液中的悬浮物对光有散射作用,必要时,应用垂熔玻璃滤器滤过或用离心法除去。所用的玻璃仪器与测定池等也必须保持高度洁净。温度对荧光强度有较大的影响,测定时应控制温度一致。溶液中的溶氧有降低荧光作用,必要时可在测定前通入惰性气体除氧。测定时需注意溶液的pH值和试剂的纯度等对荧光强度的影响。