伊红和美蓝的化学成分是什么?
(1)伊红(水溶性)
配方:
伊红 (水溶性) 2.5-5 g
蒸馏水 500 ml
将水溶性伊红溶于蒸馏水中,然后加浓盐酸10毫升,充分搅拌,静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次,再过滤;将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥,加95%酒精1000毫升,配成饱和液。使用前再用95%的酒精 1:1~2倍稀释,加入1~2%冰醋酸。
此方法具有染色时间快,颜色鲜艳,不容易褪色,使用寿命长等特点。
(2)伊红(醇溶性)
配方:
伊红 (醇溶性) 2.5-5g
75%酒精 1000 ml
加几滴冰醋酸至半透 美篮又称亚甲基蓝、次甲基蓝、次甲蓝、美蓝、品蓝,是一种芳香杂环化合物。CAS号:61-73-4,被用作化学指示剂、染料、生物染色剂和药物使用明状主要成分:亚甲蓝。化学式:C16H18N3ClSIUPAC
1.曙红B:蓝光曙红,伊红B
性状:红色粉末。易溶于水,溶液呈绿色荧光,能溶于醇。
用途:组织学用于上皮细胞,肌肉纤维和细胞核的染色。
2.曙红Y(醇溶性)
性状:红色结晶状粉末。能溶于碱,微溶于乙醇,不溶于水。
用途:吸附试剂,检定氟离子,定量分析滴定溴离子和碘离子。
曙红Y(水溶性):水溶性伊红,四溴荧光黄,朝红,四溴荧光素钠
性状:红色具有蓝光结晶或红棕色粉末。易溶于水,稍溶于醇,不溶于醚。浓的水溶液为深棕红色,其稀释液(1:500)为黄红色显绿色荧光,醇溶液有很强的绿色荧光。
用途:原生质染色,碱性磷酸酶染色,氟离子试验,吸附指示剂,滴定溴离子和碘离子。
注:HE染色用醇溶性的伊红Y比较好
配方:曙红 (水溶性)2.5 g;蒸馏水500 ml
水溶性依红酸化配制:
将曙红溶于蒸馏水中,然后加浓盐酸10毫升,充分搅拌,静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次,再过滤;将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥,加95%乙醇1000毫升,配成饱和液。使用前再用95%的乙醇 1:1~2倍稀释,加入1~2%冰乙酸。
(2)伊红(醇溶性)
配方: 伊红 (醇溶性);2.5 g 95%乙醇;1000 ml
最后加入冰乙酸几滴,起到促染作用。目前,国内依红偏酸,不仅不需要加冰醋酸,而且根据胞浆的等电点为pH4.7-5.0,应该用当量NaOH或冰醋酸将依红染液调至pH4.5左右。
一般在80%到90%之间正常
HE染色原理
HE 染色法为苏木精-伊红染色法,是石蜡切片技术里常用的染色法之一,也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基础、最广泛的技术方法。
属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色,为酸性的伊红使细胞着红色,其结果胞核呈蓝色,胞浆呈红色。两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率,在光镜下呈现出细胞图像。
HE染色法之所以成为细胞染色最常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外,还有物理作用中吸附、吸收效果,使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。
实验步骤
1、样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS洗涤3次。
2、样品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min。
3、染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤。
4、分色:镜下观察,若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。
5、染胞质:浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤。
6、吹干或自然晾干细胞爬片后,中性树胶封片。
若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min,伊红5min即可。
实验相关用品
1、固定液:常用95%乙醇和冰丙酮
2、苏木精染液:称取苏木精粉0.5g,铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中,然后取NaIO 31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均匀,滤纸过滤,备用。
3、伊红染液:称取0.5g水溶性伊红染液,溶于100ml蒸馏水中。
4、稀盐酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%盐酸。
5、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。
6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。
实验结果
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。
HE染色试剂盒常见规格为3 10ml和3 100lm。
原因:由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后,细胞核及钙盐粘液等呈蓝色,可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝,如处理适宜,可使细胞核着清楚的深蓝色,胞浆等其它成分脱色。
苏木精 — 伊红染色法简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色
扩展资料:
实验结果:
一、细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,黏液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。
二、着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
三、H-E染色评定标准:
1、切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕。
2、染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观。
参考资料来源:百度百科-he染色