关于病毒纯化

病毒为什么一定要纯化？

（1）病毒培养液中含有大量杂质，包括缺损颗粒、病毒外壳、细胞毒素、培养基、血清以及细胞碎片等，这些杂质若被注入动物体内，会引起宿主强烈的免疫反应；

（2）纯化有利于病毒悬浮于体内注射的缓冲液中。

病毒纯化的原则： 以保持病毒的生物活性和感染性为前提，去除非病毒杂质，提取出高纯度的病毒。

病毒纯化方法

1. 超过滤法： 利用超滤膜将水、盐和小分子滤除，将大分子或病毒等颗粒截留，从而达到纯化的目的，该方法主要用于大容量病毒样品的浓缩，且回收率高。常用的超滤膜是硝酸纤维素滤膜。

注意：超滤膜孔径一定要比病毒颗粒小，且只能去除比病毒小的细胞碎块

2. 吸附法： 利用病毒颗粒或杂质的表面离子与吸附剂之间的亲和作用，将病毒或杂质吸附后，用一定的盐溶液将病毒或杂质洗脱下来。常用的吸附剂有红细胞、磷酸钙、离子交换树脂等。

注意：吸附剂应有较大的表面积和吸附能力，性质稳定并便于洗脱

3. 层析法： 利用物质中各组分的理化性质差异，使各组分在固定相和流动相中的分布程度和移动速度不同，从而达到分离的目的。常用的层析法有凝胶层析法、离子交换层析法和亲和层析法。

（1）凝胶层析法：样品流经具有一定孔径大小的多孔葡聚糖凝胶时，各组分按分子的大小不同而被分离。常用的凝胶有磷酸钙凝胶、氢氧化锌凝胶和焦磷酸镁凝胶。

（2）离子交换层析法：在一定pH条件下，利用病毒颗粒所带电荷不同实现分离。适用于所有带电荷的样品的分离纯化。

（3）亲和层析法：利用样品与基质之间的特异性亲和力，实现分离。适用于纯化生物大分子。

4. 离心法： 根据物质的沉降系数或浮力密度的不同，利用离心力将物质分离纯化。常用于病毒纯化的方法有差速离心法和密度梯度离心法。

（1）差速离心法： 利用不同大小和比重的粒子的沉降速度不同，去除宿主细胞碎片等杂质，最后使病毒沉淀。该方法能迅速处理大量样品。

（2）密度梯度离心： 利用超速离心，将病毒颗粒分配到密度梯度介质中相等密度层中，吸出目的颗粒所在介质层，即可到达分离纯化的目的。常用的介质有氯化铯和蔗糖。

5. 沉淀法： 利用悬浮液中的病毒颗粒在重力作用下产生沉降作用，达到分离纯化的目的。用于病毒纯化的方法有聚乙二醇（PEG）沉淀法、等电点沉淀法和中性盐沉淀法等。

（1）聚乙二醇（PEG）沉淀法： 利用聚乙二醇与病毒颗粒形成多聚体，再离心即可沉淀。

（2）等电点沉淀法： 利用病毒粒子在等电点时，所携带的正负电荷相等，分子间相互作用减弱，溶解度降低，从而发生沉淀。

（3）中性盐沉淀法： 利用高浓度的中性盐使物质的溶解度降低，从而发生沉淀。

6. 电泳法： 利用病毒带电粒子在电场作用下，向着与电性相反的电极的移动速度不同，将组分分离成狭窄的区带，最后收集病毒区带部分。