如何用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA

在质粒DNA的制备中，无水乙醇起到沉淀DNA继而达到浓缩DNA的目的，70%的乙醇是用来洗涤DNA的，进一步去除杂质。

在除去蛋白质沉淀后，要加入无水乙醇使质粒沉淀，离心除去上清，再加入70%乙醇清洗DNA沉淀，清洗两次左右。最后要把DNA沉淀溶于TE或ddH2O中。

扩展资料：

1、 测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。

2、 每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。

参考资料来源：百度百科-质粒DNA纯化

1. 1/10 体积的乙酸钠（3 mol/L ，PH=5.2）充分混匀

2. 2 倍体积冰预冷的无水乙醇，混匀，- 20℃ 15~30 分钟；

3. 12,000 g X 10 min，弃上清；

4. 再加1ml 70％乙醇，12000g X 1 分钟，弃上清；

5. 挥发至干；

6. 加 ddH2O 或TE溶解 DNA 沉淀。

异丙醇沉淀以后不必用70%乙醇洗.只有醋酸钠 乙醇沉淀之后才需要70%乙醇洗,目的是洗去加入的盐,乙醇浓度太高达不到脱盐效果,浓度太低DNA会溶掉

异丙醇沉淀以后有人用无水乙醇洗一遍,目的是加速DNA的干燥,因为异丙醇的挥发性没有乙醇好

主要目的还是为了除盐,前面沉淀DNA时加入的盐会影响你后续的克隆操作,如酶切和PCR.

无水乙醇沉淀DNA需要阳离子如Na离子的存在，而且需要1/1O体积的NAAC，并且加2倍体积的无水乙醇，而且沉淀的盐少，易挥发除去。缺点是总体积较大。需在-20放置很长时间，30分钟-1小时。同样需要70%乙醇洗涤。

我个人认为无水乙醇沉淀DNA的效果更好些，DNA在体积较大的条件下可以沉淀的更充分，提取的DNA含的盐离子也很好，而且乙醇也容易挥发去除，纯度相对来说也较好。

两者都适合沉淀线形和闭环的DNA或质粒，因为两者化学性质都是醇类，沉淀原理是相似。

如果你的DNA含量丰富的话，沉淀10min 就足够了，如果含量低，则需要在-20度沉淀30min-2小时。可以不短观察沉淀的量决定沉淀时间。

2021年8月26日效果一点也不差。 2) 抽提质粒时,用无水乙醇沉淀的时间可以由实验操作者来决定,如果时间充裕可以 30 min,否则 8-10 min 也可以

1.为什么用无水乙醇沉淀DNA？

用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。

DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15－30分钟即可。

2.在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？

在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。