聚乙二醇peg为何能够诱导动物细胞融合。动植物细胞都适用么?
聚乙二醇(PEG)分子能改变各类细胞的生物膜结构,使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组,由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用,从而使细胞发生融合,从而形成杂种细胞。聚乙二醇PEG具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质的作用,能够有效地促进植物细胞以及动物细胞的融合。
聚乙二醇法(PEG)为我国学者高国楠首创,是最成功的原生质体融合技术。PEG作为一种高分子化合物,由于PEG分子中醚键的存在使其分子末端带有微弱负电荷,能与水、蛋白质、糖等极性物质的正极形成氢键。当PEG分子足够长时,可作为邻近原生质表面之间的分子桥而使之粘连。PEG也能连接Casuperscript2+superscript等阳离子,Casuperscript2+superscript可在一些负极化基团和PEG之间形成桥,因而促进粘连。
在洗涤过程中,连接在原生质体膜上的PEG分子可被洗脱,这样将引起电荷的紊乱和再分布或使膜表面局部脱水,或改变构型使原生质类脂“液态”化而引起融合。PEG法已经广泛地用于原生质体融合,因为它能得到较高的异核体产率,对大多数细胞的毒性都很低,利于形成双核异核体。
PEG促融合是非特异的,因此对种间融合、基因间融合都是有用的。PEG法的缺点是对原生质体有一定毒害,而且融合率一般较低,不超过1%。
具体操作过程如下:取等量、密度相近的两种不同原生质体悬浮液,在玻璃容器内混合均匀,取150μL左右的原生质体悬浮液滴在盖玻片上,缓慢加入450μL左右的PEG溶液,放在2030摄氏度条件保温培养0.51h,然后用原生质体培养介质将原生质体漂洗几遍以除去PEG,再将原生质体样品重新悬浮在培养介质中。
有无双键并不能说是能否发生加聚反应的决定因素,三键的物质也是可以发生聚合反应的。只有键的结合发生的是聚合反应,而有羟基和羧基也是可以发生加聚反应的,只不过要脱水。