常温下水饱和的甲苯，含水量为多少PPM

油气是有机物质在水介质条件下生成的，再加上油气田水与油气藏长期接触，必然会在水中残留下某些物质。因此，在一定条件下，我们可以认为水中的有机质是含油气性的直接标志。水中的有机质含量甚微，一般每升只有几毫克，对测量和研究的效果有一定影响。目前普遍采用的方法是用不同的有机溶剂和吸附剂进行萃取，然后再进行分析。

1.环烷酸

环烷酸包括一系列成分及物理－化学性质差别很大的化合物，其中一些是比较容易在水中溶解的，另一些在水中几乎不溶。环烷酸的酸度指数多介于250～330之间，含有10～15个碳原子，化学通式为CnH2n-1COOH。

环烷酸与油气有着密切的关系，是烃类组分氧化的产物，很多研究人员把它作为含油气性的直接标志。但水中环烷酸的富集受很多因素的影响，如烃类的化学组成、水的化学成分以及水同油气藏接近的程度等。

环烷酸在成分不同的烃类中含量有很大差别，含环烷族多的烃类，将使与之接触的水中聚集较多的环烷酸；含量少甚至不含该组分的烃类，在很多情况下，水中完全找不到环烷酸。另外还必须注意，有些环烷酸在水中几乎不溶。因此，环烷酸在烃类中含量很高，而在水中并非能够经常见到其显著聚集。同时，水的化学成分对环烷酸在水中的含量也有很大影响，其含量决定于水的总碱度和矿化度。环烷酸的含量随总碱度的增加和矿化度的减小而增多。

2.酚

地下水中普遍含酚，但含量变化很大。我国陆相油气田水中酚含量为每升几毫克到零点几毫克。陕甘宁地区中生界油田水中酚的含量变化在0.15～0.82mg/L之间（表1-1）。

表1-1　陕甘宁地区中生界油田水中的酚、苯含量

（据刘孝汉，1981）

冀中坳陷地层水中酚含量明显受埋深影响。埋深0～1500m时，酚含量一般在0.02×10-6以下；埋深大于1500m，则从0.02×10-6升到0.40×10-6。这种情况可能是受温度的影响。温度升高可以加大酚的溶解度，冀中坳陷3000m深处，温度一般可达120℃，促进了酚的溶解。

3.苯和甲苯

不同性质烃类聚集的地层水中苯的含量不同。伊利琴科（1984）根据分析了约100个油藏及凝析气藏的资料来看，石油和凝析油中苯和甲苯的含量是明显不同的。大部分凝析油中苯的含量常超过1%，甚至达到30%，而石油中苯的含量通常小于1%。甲苯在石油中的含量常低于1%，虽然有时也可达到5%。甲苯在凝析油中的含量大于1%，经常变化在5%～36%之间。由于凝析油中苯和甲苯含量较高，故凝析气田水中苯和甲苯含量均高于油田水。

气藏水中苯的含量同气藏气中C5以上的含量有关。谢列市里亚科夫（1975）指出，地层水中苯的含量与气藏气中含有C5以上的高分子烃有着直接关系。例如，俄罗斯普罗梅斯洛夫地区的巴柔阶地层水中溶解的重烃（C5以上）达0.18%，水中苯含量为0.04mg/L；在同一地区，阿尔必阶地层水中溶解气内无C5以上重烃存在，则水中不含苯。

Collins（1975）指出，油气聚集是油气田水中苯和甲苯的主要来源。所以很多人认为油气田水中的苯被认为是含有油、气的重要的和直接的指标。根据黄福堂（1993）对松辽盆地的研究，产油层和非产油层的苯系物界限非常明显（表1-2）。表中的数据表明，在接近含油气区，地层水苯系物含量比较高，甲苯/苯的值多数大于0.5，含油中心部位甲苯/苯的值一般在1.0～5.30之间，与原油中的甲苯/苯值相似。

4.脂肪酸

地层水中的脂肪酸主要是C4以下的低级脂肪酸，C4以上的脂肪酸在水中的溶解度随碳原子数的增加而下降。根据松辽盆地地层水中的脂肪酸含量统计表明，地层水中的脂肪酸含量大多数在10～1800mg/L之间变化，最高含量达2060mg/L。据黄福堂（1993）对松辽盆地北部地层水中脂肪酸含量分布的研究，脂肪酸在与油气藏接触的地层水中含量高，在油气藏边界以外较远的井地层水中的含量低。脂肪酸含量在松辽盆地北部地层水中多大于10mg/L，在油气水接触带地层水中则为20～75mg/L。

表1-2　松辽盆地北部地层水苯系物分析数据

（据黄福堂等，1993）

分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。

而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式： 1 A=log — =ECL T 式中 A 为吸收度； T 为透光率； E 为吸收系数，采用的表示方法是(E1％ 1cm),即吸收度换算成溶液浓度为1％(g/ml)，液层厚度为1cm的数值； C 为100ml溶液中所含被测物质的重量，g(按干燥品或无水物计算）； L 为液层厚度 ，cm。 物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

分光光度计的简单原理

分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

核酸的定量

核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。

事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。

除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。

蛋白质的直接定量（UV法）

这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg 公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm 的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg 公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。

比色法蛋白质定量

蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。

比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。

Lowry 法：以最早期的Biuret 反应为基础，并有所改进。蛋白质与Cu2 反应，产生蓝色的反应物。但是与Biuret 相比，Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。

BCA（Bicinchoninine acid assay）法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2 反应产生Cu ，后者与BCA形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强，反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法，操作简单，敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。

Bradford 法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应，产生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特点是，敏感度好，是Lowry 和BCA 两种测试方法的2 倍；操作更简单，速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定1小时，方便结果；而且与一系列干扰Lowry，BCA 反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。

某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致，感到迷惑，究竟该相信哪种方法？由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如：Keller等测试人奶中的蛋白，结果Lowry，BCA 测出的浓度明显高于Bradford，差异显著。即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质，以BSA作标准品，浓度1.34mg/ml，以a球蛋白作标准品，浓度2.64mg/ml。因此，在选择比色法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外，比色法定量蛋白质，经常出现的问题是样品的吸光值太低，导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是，反应后1011分光光度计的重要配件—— 比色杯的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品（包括标准样品），都必须在此时间内测试。时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。除此，反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外，非常重要的是，最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确。

细菌细胞密度（OD 600）

实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能离心，保持细菌悬浮状态。

分光光度计的重要配件—— 比色杯

比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。

由于另外测试的样品量不同，所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量，亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯，样品用量仅需50μl，比色杯单个无菌包装，可以回收样品。如Eppendorf UVette塑料比色杯，是目前比色杯市场上一个革新。随着生命科学以及相关学科发展，对此类科学的实验研究提出更高的要求，分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器，也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一。

随着科技的发展，现在比色杯已经不是使用分光光度计时的必备物品。目前国外Nanodrop公司（现已被Thermo Fisher公司收购）生产的ND1000分光光度计与旧式分光光度计相比，已经可以做到无需稀释样品，无需使用比色杯，每次测量仅需1-2μl样品即可完成测量。

对

水中微量苯的检测，可以用甲基硅油等有挥发性的有机溶剂或者低分子量的聚合物吸收，然后通过色谱进行分析；或者采用比色法分析；也可以将含有苯的空气深

度冷冻，将苯冷冻下来，然后把硫酸铁和过氧化氢溶液加入得到黄褐色或黑色沉淀，再用硝酸溶解，然后通过比色法分析。或者直接用硝酸吸收空气中的苯，硝化成

间二硝基苯，然后用二氯化钛溶液滴定，或者用间二甲苯配制的甲乙酮碱溶液比色定量。

你再怎么改变含量出来的共沸物还是这个组分

只要环境压力不变，甲苯的比热和水的比热是定值，共沸点就是定值

恒定共沸点的蒸汽压是一定的因此配比也是固定的

除非改变环境压力条件

配比会略有改变，但是改变是有限的

一般共沸是需要避免的负面情况

所以很少有主动去改变共沸物组成配比的情况