茚三酮乙醇溶液和茚三酮丙酮溶液的区别是什么啊,有什么使用范围
茚三酮丙酮溶液:茚三酮1—5克,丙酮100毫升。
茚三酮乙醇溶液:茚三酮1—5克,乙醇100毫升。
使用范围:
茚三酮可以用来监测固相肽合成中的脱保护作用(Kaiser测试)。肽链通过C端与固相基质连接,利用N端扩展肽链,当N脱保护后,茚三酮测试呈蓝色。氨基酸残基是在N端被保护的情况下接入肽链的,因此如果下一个氨基酸残基成功的连接到肽链上,茚三酮测试会给出无色或者黄色的结果。
茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多数氨基酸,水解之后可与茚三酮反应。水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。在分析化学反应的薄层色谱(TLC)中,它可以用于检测所有的胺类,氨基甲酸酯类,在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。
当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO2。二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸的羧基碳。在考古研究中,这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析,以帮助重现古代生物的食物结构。用一种标记底物处理的土壤,随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺,可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌(也叫做硝化细菌)利用土壤中的尿素作为碳源 [4] 。法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面,也即含有氨基酸的指纹,经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色
你的答案是正确的。茚三酮与氨基酸反应,先生成紫红色,最终形成蓝紫色化合物。反应原理:第1步:茚三酮+氨基酸----还原型茚三酮+NH3+CO2+醛此步为紫红色第2步:还原型茚三酮+NH3+茚三酮----茚三酮-N=茚三酮+3H2O
此步为蓝紫色。氨基酸定性测定:试管中氨基酸溶液1mL,加2滴0.5%茚三酮-乙醇溶液,加热,溶液由粉红色变为紫红色,最后变为兰色。氨基酸定量测定:根据此原理,用比色法或分光光度法测定含量。脯氨酸和羟脯氨酸和茚三酮反应,生成黄色化合物,非蓝紫色。一般情况下,蛋白质、多肽、各种氨基酸、等均有此反应。另外,氨、贝塔丙氨酸、许多一级胺化物也具有此反应。
茚三酮,近似为白色结晶,或浅黄色结晶粉末,微溶于乙醚及三氯甲烷,100℃以上变为红色。用于鉴定氨基酸,反应十分灵敏,是鉴定氨基酸的最简便方法。
茚三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。当与这些游离胺反应时,能够产生深蓝色或者紫色的物质,叫做Ruhemann紫。茚三酮常用来检测指纹,这是由于指纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基,其上的一级胺被茚三酮检测。在室条件下,它是一种白色的固体物质,溶于乙醇和丙酮。
1.范围
本方法采用茚三酮试剂与蛋白质中a-氨基酸反应生成蓝紫色化合物最大吸收值的波长为570nm
本方法适用于各类蛋白质测定范围0.5 g 50 g 蛋白质
2.原理
茚三酮是使氨基酸和多肽显色的重要试剂当茚三酮在弱酸性条件下和-氨基酸反应时氨基酸被氧化分解生成醛放出NH3 和C02 水合茚三酮则变成还原型茚三酮然后还原型茚三酮与NH3 及另一分子茚三酮进一步缩合生成蓝紫色化合物最大吸收值的波长为570nm此反应为一切a-氨基酸所共有反应灵敏因而本法是氨基酸定量测定应用最广泛的方法之一脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色化合物最大吸收值的波长在44Onm 多肽和蛋白质虽然具有茚三酮反应但肽链越大灵敏度也越来越差故不宜作定量测定之用在多肽合成中常用来检验有无自由氨基的肽类存在
3 .试剂
茚三酮无水乙醇95%乙醇甘氨酸
4.试样制备
4.1 蛋白质溶液箱保存备用
4.2 1mg mL-1的茚三酮乙醇溶液,0.1g 茚三酮溶于100mL 95%乙醇新鲜配置
4.3 5mg mL-1的甘氨酸溶液
5.参考文献
1.陈曾燮刘兢罗丹 编.生物化学实验.合肥中国科学技术大学出版社1994.1-6
2.李建武等 合编.生物化学实验原理和方法.北京北京大学出版社1994.150-174
3.宁正祥 编.食品成分分析手册.北京中国轻工业出版社1998.62-80