氰乙酸是否为危险化学品

1.物质的理化常数

国标编号 61646

CAS号 105-56-6

中文名称 氰乙酸乙酯

英文名称 ethyl cyanocaetate

别名

分子式 C5H7NO2；NCCH2COOCH2CH3 外观与性状 无色液体，略有气味

分子量 113.12 蒸汽压 2.00kPa/99℃ 闪点：110℃

熔 点 -22.5℃ 沸点：206～208℃ 溶解性 微溶于水、碱液、氨水，可混溶于乙醇、乙醚

密 度 相对密度(水=1)1.06 稳定性 稳定

危险标记 14(有毒品) 主要用途 用于有机合成，制药工业，染料工业

2.对环境的影响

该物质对环境有危害，应特别注意对水体的污染。

一、健康危害

侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。

健康危害：低浓度时实验动物有呼吸急促、流泪、嗜睡、精神萎靡、反应迟钝；浓度稍高还可出现呼吸困难，侧卧，眼球突出；浓度高时出现极度呼吸困难，痉挛，死亡。可经皮吸收引起中毒死亡。

二、毒理学资料及环境行为

急性毒性：LD50400～3200mg/kg(大鼠经口)；LC50550mg/m3，2小时(大鼠吸入)

危险特性：遇明火能燃烧。受高热或与酸接触会产生剧毒的氰化物气体。与强氧化剂接触可发生化学反应。遇水或水蒸气反应放出有毒的或易燃的气体。

燃烧(分解)产物：一氧休碳、二氧化碳、氧化氮。

3.现场应急监测方法

水质快速比色管法(日本制,氰化物)

4.实验室监测方法

气相色谱法，参照《分析化学手册》(第四分册，色谱分析)，化学工业出版社

5.环境标准

前苏联 车间空气中有害物质的最高容许浓度 2mg/m3

6.应急处理处置方法

一、泄漏应急处理

迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿防毒服。不要直接接触泄漏物。尽可能切断泄漏源，防止进入下水道、排洪沟等限制性空间。小量泄漏：用砂土或其它不燃材料吸附或吸收。大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容。用泵转移至槽车或专用收集器内，回收或运至废物处理场所处置。

二、防护措施

呼吸系统防护：可能接触其蒸气时，应该佩戴自吸过滤式防毒面具(半面罩)。紧急事态抢救或撤离时，建议佩戴自给式呼吸器。

眼睛防护：戴安全防护眼镜。

身体防护：穿聚乙烯防毒服。

手防护：戴橡胶手套。

其它：工作现场禁止吸烟、进食和饮水。工作毕，彻底清洗。单独存放被毒物污染的衣服，洗后备用。保持良好的卫生习惯。

三、急救措施

皮肤接触：立即脱去被污染的衣着，用流动清水或5%硫代硫酸钠溶液彻底冲洗至少20分钟。就医。

眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。

吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。呼吸心跳停止时，立即进行人工呼吸(勿用口对口)和胸外心脏按压术。给吸入亚硝酸异戊酯。就医。

食入：饮足量温水，催吐，用1：5000高锰酸钾或5%硫代硫酸钠溶液洗胃。就医。

灭火方法：消防人员须佩戴氧气呼吸器。灭火剂：干粉、二氧化碳。禁止用水、泡沫和酸碱灭火剂灭火。

标准编号:GB/T 5750.9-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 农药指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Pesticides parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了生活饮用水中滴滴涕、六六六、林丹、对硫磷、甲基对硫磷、内吸磷、马拉硫磷、乐果、百菌清、甲萘威、溴氰菊酯、灭草松、2,4-滴、敌敌畏（含敌百虫）、呋喃丹、毒死蜱、莠去津、草甘膦、七氯、六氯苯、五氯酚等农药指标的检验方法；

本标准适用于生活饮用水中农药指标的检测。

标准编号:GB/T 5750.8-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 有机物指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Organic parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了用填充柱气相色谱法测定生活饮用水及其水源中三氯甲烷、四氯化碳、三氯乙烯、二氯一溴甲烷、四氯乙烯、一氯二溴甲烷和三溴甲烷。

本方法适用于生活饮用水及其水源水中三氯甲烷、四氯化碳、三氯乙烯、二氯一溴甲烷、四氯乙烯、一氯二溴甲烷和三溴甲烷的测定。

本法的最低检测质量浓度分别为:三氯甲烷0.6μg/L；四氯化碳0.3μg/L；三氯乙烯3μg/L；二氯一溴甲烷1μg/L；四氯乙烯1.2μg/L；一氯二溴甲烷0.3μg/L；三溴甲烷6μg/L。

标准编号:GB/T 5750.7-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 有机物综合指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Aggregate organic parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了生活饮用水中耗氧量、生化需氧量、石油和总有机碳的测定方法。

本标准适用于生活饮用水及其水源水中耗氧量、生化需氧量、石油和总有机碳的测定。

标准编号:GB/T 5750.6-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 金属指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Metal parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准适用于生活饮用水及其水源水中铝的测定。

标准编号:GB/T 5750.5-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 无机非金属指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Nonmetal parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了生活饮用水中硫酸盐、氯化物、氟化物、氰化物、硝酸盐氮、硫化物、磷酸盐、硼、氨氮、亚硝酸盐、碘化物的测定方法。

本标准适用于生活饮用水及其水源水中硫酸盐、氯化物、氟化物、氰化物、硝酸盐氮、硫化物、磷酸盐、硼、氨氮、亚硝酸盐、碘化物的测定。

标准编号:GB/T 5750.4-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Organoleptic and physical parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了生活饮用水及其水源水的各种感官性状检验方法；<br>适用于生活饮用水及其水源水中的各种感官性状测定。

标准编号:GB/T 5750.3-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 水质分析质量控制

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Water analysis quality control

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了生活饮用水水质检验实验室质量控制的原则、要求与方法<br>本标准适用于生活饮用水水质的测定过程。

标准编号:GB/T 5750.2-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 水样的采集和保存

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Collection and preservation of water samples

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了生活饮用水水质检验的基本原则和要求<br>本标准适用于生活饮用水水质检验，也适用于水源水和经过处理、储存和输送的饮用水的水质检验。

标准编号:GB/T 5750.13-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 放射性指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Radiological parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:标准规定了测定生活饮用水及其水源水中α放射性核素的总α放射性体积活度以及β放射性核素的总β放射性体积活度的方法。

本标准适用于测定生活饮用水及其水源水及水源水中α放射性核素的总α放射性体积活度以及β放射性核素的总β放射性体积活度。

标准编号:GB/T 5750.12-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 微生物指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Microbiological parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了测定生活饮用水及其水源水中细菌总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、贾第鞭毛虫、隐孢子虫指标的检验方法。

本标准适用于测定生活饮用水及其水源水中微生物指标。

标准编号:GB/T 5750.11-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 消毒剂指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - Disinfectants parameter

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了测定生活饮用水及其水源水中消毒剂指标的检验方法。

本标准适用于测定生活饮用水及其水源水中游离余氯、有效氯、氯胺、二氧化氯、臭氧、氯酸盐等指标的检验方法。

标准编号:GB/T 5750.10-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 消毒副产物指标

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking Water - Disinfection by-products parameters

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了生活饮用水中三溴甲烷、三溴甲烷、二氯一溴甲烷、一氯二溴甲烷、二氯甲烷、甲醛、乙醛、三氯乙醛、二氯乙酸、三氯乙酸、氯化氰、2,4,6-三氯酚、亚氯酸盐、溴酸盐14项指标的检验方法；

本标准适用于生活饮用水中消毒副产物指标的检测。

标准编号:GB/T 5750.1-2006

标准名称:生活饮用水标准检验方法 总则

标准状态:现行

英文标题:Standard examination methods for drinking water - General principles

替代情况:替代<a href=http://www.csres.com/detail/67106.html target=_blank>GB/T 5750-1985</a>部分

实施日期:2007-07-01

颁布部门:中华人民共和卫生部 中国国家标准化管理委员会

内容简介:本标准规定了生活饮用水及其水源水样的采集、样品保存和采样质量控制的基本原则、措施和要求<br>本标准适用于生活饮用水及其水源水样的采集和样品保存。

1、合成醋酸乙烯、醋酸纤维、醋酸酐、醋酸酯、金属醋酸盐及卤代醋酸等。

2、是制药、农药及其他有机合成的重要原料。

3、在照相药品制造、醋酸纤维素、织物印染以及橡胶工业等方面也有广泛的用途。

4、用于生产醋酸乙酯、食用香料、酒用香料等。

5、用作分析试剂、溶剂及浸洗剂。

此反应可以在能使丁烷保持液态的最高温度和压力下进行，一般的反应条件是150℃和55atm。副产物包括丁酮，乙酸乙酯，甲酸和丙酸。因为部分副产物也有经济价值，所以可以调整反应条件使得副产物更多的生成，不过分离乙酸和副产物使得反应的成本增加。

扩展资料：

用于区分食用醋酸和工业乙酸（或工业醋酸）的检测标准主要是参照GB 1903-2008《食品添加剂 冰醋酸（冰乙酸）》，通过测定乙酸的质量分数、高锰酸钾试验时间、蒸发残渣、酿造醋酸的比率（天然度）、重金属、砷含量、游离矿酸、色度等项目进行区分。

其中的酿造醋酸的比率（天然度）依照方法标准GB/T 22099-2008 《酿造醋酸与合成醋酸的鉴定方法》，通过测定醋酸的天然度即测试冰醋酸中14C的比活度与标准值的比值进行检测。食醋的检测标准主要是通过GB/T 5009.41-2003《食醋卫生标准的分析方法》进行检测。

参考资料来源：百度百科-工业用冰乙酸

食品添加剂中用到的咖啡因的来源是：以氯乙酸或氰乙酸为原料合成的；或者是以茶叶为原料提取的。

咖啡因作为食品添加剂可以用在多种食品和饮料中，比如可乐和红牛等。咖啡因也用于药品之中，如辅助治疗头疼，早产儿呼吸问题等。

咖啡因的具体执行标准：在国家食品安全风险评估中心（CFSA）所属的食品安全国家标准数据检索平台上可以搜索到咖啡因的数据，其执行的国家标准是GB 14758-2010。

丙二酸又称缩苹果酸，主要以钙盐形式存在于甜菜根中。甜菜制糖的浓缩罐里沉积的水垢即丙二酸钙。丙二酸及丙二酸酯是有机合成中的重要原料。主要用于医药中间体，也用于香料、粘合剂、树脂添加剂、电镀抛光剂等；用于生产巴比妥酸盐和其他药物等。

丙二酸主要用途

1.用于生产巴比妥酸盐和其他药物等。

2.也可以用作电镀抛光剂、炸药控制剂和热焊接助溶剂等。

3.丙二酸用作铝表面处理剂，由于加热分解时只生成水和二氧化碳，因而没有污染问题。在这一点上，与过去采用的甲酸等酸型处理剂相比，具有很大的优点。

4.用作有机合成原料。制药工业。用于制造香料、胶粘剂、杀茵剂，还用作皮革及铝制品表面处理剂、电镀抛光剂，泡沫塑料发泡剂、核反应器清洗剂、热焊接助熔剂及炸药控制剂等。

药物简介

【英文名称】 Theophylline

【其他名称】 二氧二甲基嘌呤，异可可碱，Theolix，Theocin，1，3-Dimethyxanthine

【适应证】主要用于支气管性与心源性哮喘，也可用于心源性水肿。

【药品分类】 呼吸系统用药-平喘药

【中文别名】埃斯马隆茶碱； 舒弗美； 二氧二甲基嘌呤； 葆乐去辉； 长效茶碱； 希而文； 优舒特

主要成分

茶碱（Theophylline）

别名为：二氧二甲基嘌呤；1,3-二甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮；1,3-二甲基黄嘌呤水合茶叶碱；茶叶碱；茶碱/1,3-二甲基黄嘌呤；1,3-二甲黄嘌呤

英文名称： Theophylline

英文别名： 1,3-Dimethyl-3,7-dihydro-1H-purine-2,6-dione1,3-dimethyl-xanthin1H-Purine-2,6-dione,3,7-dihydro-1,3-dimethyl-3,7-dihydro-1,3-dimethyl-1h-purine-6-dione3h)-dione,1,3-dimethyl-purine-6(1h6-dione,3,7-dihydro-1,3-dimethyl-1H-Purine-2accurbronAcet-theocin

CAS号： 58-55-9

质量标准： cp

分子式: C7H8N4O2

分子量： 180.16

EINECS号： 200-385-7

InChI：InChI=1/C7H10N4O2/c1-10-5-4(8-3-9-5)6(12)11(2)7(10)13/h3-5H,1-2H3,(H,8,9)

危险品标志：Xn,T,F,Xi

危险类别码：22-39/23/24/25-23/24/25-11-36/37/38

安全说明：7-16-36/37-45-36-26

风险说明 R22Harmful if swallowed.吞食有害。

危险品运输编号：UN 2811 6.1/PG 3

密度：1.62g/cm3[1]

熔点：270-274℃

沸点：390.1°C at 760 mmHg

闪点：189.7°C

蒸汽压：2.72E-06mmHg at 25°C

储存条件： 2-8°C

溶解度： 0.1 M HCl: soluble

水溶解性：8.3 g/L (20 ºC)

外观：白色结晶或结晶性粉末，无臭、味苦。

溶解性质：常温下溶于水 (1：120)、乙醇(1：18)、氯仿(1：86)、氢氧化碱液、氨水、稀盐酸和稀硝酸中，微溶于乙醚。

用途：茶碱是甲基嘌呤类药物。具有强心、利尿、扩张冠状动脉、兴奋中枢经系统等作用。治疗支气管哮喘、肺气肿、支气管炎、心脏性呼吸困难。[2]

制备方法

(1)1，3-二甲基-4-氨基-5-甲酰胺基脲嘧啶与氢氧化钠溶液在90-95℃反应，制得茶碱粗品，经热水重结晶、活性炭脱色得成品。

(2)以氰乙酸乙酯和二甲基尿素为原料，经缩合、亚硝化、还原、甲酰化、环合反应得粗品，再重结晶而得。

鉴别方法

(1) 取该品10mg，加盐酸1ml 与氯酸钾0.1g，置水浴上蒸干，遗留浅红色的残渣，遇氨气即变为紫色；再加氢氧化钠试液数滴，紫色即消失。

(2) 取该品约50mg，加氢氧化钠试液1ml 溶解后，加重氮苯磺酸试液3ml ，应显红色。

(3) 取该品约10mg ，溶于5ml 水中，加氨－氯化铵缓冲液（pH8.0 ）3ml ，再加铜吡啶试液1ml ，摇匀后，加三氯甲烷5ml ，振摇，三氯甲烷层显绿色。

(4) 该品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集272图）一致。

检查方法

(1) 酸度，取该品0.10g ，加热水25ml溶解后，加甲基红指示液1 滴与氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)0.20ml ，应显黄色。

(2)有关物质，取该品，加三氯甲烷－甲醇(6:4) 制成每1ml 中含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加三氯甲烷－甲醇(6:4) 稀释成每1ml 中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl ，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以正丁醇－丙酮－三氯甲烷－浓氨溶液(4:3:3:1)为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯(254nm) 下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。

(3) 干燥失重，取该品，在105 ℃干燥至恒重，减失重量不得过 9.5%；如为无水茶碱，减失重量不得过 0.5%（附录Ⅷ L）。

(4)炽灼残渣,不得过 0.1%。

含量测定

取该品约0.3g，精密称定，加水50ml，微温溶解后，放冷，加硝酸银滴定液(0.1mol/L)25ml，再加溴麝香草酚蓝指示液1ml ，摇匀，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于 18.02mg的C7H8N4O2。

测定方法

方法名称：

茶碱的测定—中和滴定法

应用范围：

该方法采用滴定法测定茶碱的含量。

该方法适用于茶碱。

方法原理：

供试品加水微热溶解后，放冷，精密加入硝酸银滴定液（0.1mol/L），再加溴麝香草酚蓝指示液，摇匀，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显蓝色，纪录氢氧化钠滴定液的使用量，计算，即得。

试剂：

1． 水（新沸放置至室温）

2． 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）

3.硝酸银滴定液（0.1mol/L)

4． 溴麝香草酚蓝指示液

5．基准邻苯二甲酸氢钾

6．基准氯化钠

仪器设备：

试样制备：

1． 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）

配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6mL，加新沸过的冷水使成1000mL。

标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。

贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。

2．硝酸银滴定液（0.1mol/L），

配制：取硝酸银17.5g，加水适量使溶解成1000mL，摇匀。

标定：取在110℃干燥至恒重的基准氯化钠约0.2g，精密称定，加水50mL使溶解，再加环糊精溶液（1→50）5mL，碳酸钙0.1g与荧光黄指示液8滴，用本液滴定至浑浊液由黄绿色变为微红色。每1mL硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于5.844mg的氯化钠。根据本液的消耗量与氯化钠的取用量，算出本液的浓度，即得。

3． 溴麝香草酚蓝指示液

取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2mL使溶解，再加水稀释至200mL即得。

操作步骤：

精密称取供试品0.3g，精密加水50mL，微热溶解后，精密加入硝酸银滴定液（0.1mol/L）25mL，再加溴麝香草酚蓝指示液1mL，摇匀，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显蓝色，记录消耗氢氧化钠滴定液的体积数（mL），每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的茶碱（C7H8N4O2）。即得。

注1：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一，“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。[3]

主要应用

【药物毒理】茶碱的药理作用与血浓度有关。而其有效血浓度安全范围很窄，如血浓度10～20μg/ml时扩张支气管，超过20 μg/ml即能引起毒性反应。口服吸收不稳定，其在体内廓清影响因素多，且个体差异很大，血中的浓度较难控制，故易发生中毒。一次用量过大，或静脉注射速度过快，或反复用药其作用积累，均有发生过量中毒的可能。而且有时中毒症状不易被发现，甚至误诊为原有疾病本身所致；并因此错误地进一步加大茶碱用量，酿成严重中毒。感染可影响茶碱代谢，增加血中浓度，以至达中毒水平。其他能提高茶碱血浓度的因素有：肝病、充血性心力衰竭、呼吸衰竭、慢性阻塞性肺病、肾衰竭、代谢性酸中毒、高热、女性、年幼、年迈和肥胖等。有人强调老年人静脉注射氨茶碱易致中毒，故不宜给老年人静脉注射此药。

【茶碱中毒】

1．轻度中毒：恶心、呕吐、头痛、不安、失眠及易激动等。

2．中度中毒：除上述反应外，出现心前区不适、心悸、心律失常或呼吸不规则等。

3．重度中毒：可有室性心动过速、精神失常、惊厥、癫痫发作、昏迷，甚至呼吸和心脏骤停。

婴幼儿和老年人中毒症状较为严重。国内报道15例儿童（年龄12天至16个月）误用氨茶碱逾正常剂量10倍以上；其中11例，肌内注射和静脉注射各2例，其余口服，用药后主要表现为中枢神经系统过度兴奋，哭闹不安、肌肉震颤、惊厥和谵妄，呼吸加快、衰竭，心律失常，急剧而频繁呕吐；2例死亡。老年人中毒常出现心脏意外。曾有报道6例老年人用0.25～0.5g氨茶碱经5%葡萄糖液20～40ml稀释后静脉注射，发生急性左心衰竭。其中4例在1～2分钟出现呼吸困难、端坐和窦性心动过速；另2例在2分钟时昏厥。经对症处理，于15～20分钟后症状缓解。

有些患者予静脉注射后不久发生过敏性休克，表现为出汗、烦躁、发绀、气急、口麻及血压下降等。须与静脉注射过量所致的毒性反应相鉴别，因两者处理不尽相同。

血浆药物浓度测定 凡接受茶碱类药物治疗的患者有条件时均应测定血药浓度。测定时间应选择在：

①输入负荷量前；

②输入后1～2小时；

③用药后24小时；

④危重患者用药期间应每12小时测定1次。茶碱血浆浓度L时几乎无药效反应；5～10mg/L生效；10～20mg/L达最佳疗效；>20mg/L即有毒性反应表现；达到30～40mg/L可引起严重中毒反应。

【急救处理】无特殊解毒疗法，主要采取支持疗法和对症疗法。

1．清除毒物

1．口服中毒者尽早洗胃，洗胃液可用1：5000高锰酸钾溶液；导泻，大量输液，酌用利尿剂，促使毒物排泄。

2．中毒危及生命者可行血液透析或腹膜透析；树脂血液灌注也有效，灌注2～2.5小时即可，疗效比血液透析快。

3．反复大剂量口服活性炭，初次用40g，然后再2～3小时服20g，并于每次服用后加服20%山梨醇溶液50～70ml，此法可使体内茶碱清除加快1倍。

2．对症治疗

1．腹胀、呕吐者可肌内注射或静脉注射新斯的明1 mg；也可肌内注射甲氧氯普胺10mg。

2．兴奋、烦躁不安、谵妄或惊厥时可用地西泮、苯巴比妥或苯妥英钠等安定、镇静剂。

3．心律失常应根据具体类型选用药物，如室性心律失常可用利多卡因，房性心律紊乱用维拉帕米，也可用普罗帕酮等。

4．低血压时可肌内注射或静脉滴注升压药如间羟胺。

5．吸氧。

3．中毒患者治疗期间禁用三磷腺苷。

【药物相互作用】

1.地尔硫卓、维拉帕米可干扰茶碱在肝内的代谢，与本品合用，增加本品血药浓度和毒性。

2.西咪替丁、雷尼替丁可降低本品肝清除率，合用时可增加茶碱的血清浓度和(或)毒性。

3.某些抗菌药物，如大环内酯类的红霉素、喹诺酮类的依诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星，克林霉素、林可霉素等可降低茶碱清除率，增高其血药浓度，尤以依诺沙星为著，当茶碱与上述药物伍用时，应适当减量。

4.苯巴比妥、苯妥英、利福平可刺激茶碱肝中代谢，结果加快茶碱的清除率；茶碱也干扰苯妥英的吸收，两者血浆中浓度均下降，合用时应调整剂量。

5.与锂盐合用，可使锂的肾排泄增加。影响锂盐的作用。

6.与美西律合用，可减低茶碱清除率，增加血浆中茶碱浓度，需调整剂量。

7.与咖啡因或其他黄嘌呤类药并用，可增加其作用和毒性。

【用法与用量】

1.茶碱片：①常用量，口服1次0.1～0.2g，每日0.3～0.6g；②极量，口服每次0.3g，每日1g。

2.茶碱控释片：口服1次0.1～0.2g，每日0.2～0.4g。

3.茶碱缓释片：口服，本品不可压碎或咀嚼，只能沿划痕掰开。成人或12岁以上小儿，起始剂量为0.2～0.4g，每日1次，晚间用100ml开水送服。剂量视病情和疗效调整，但日量不超过0.9g，分2次服用。

4.茶碱控释胶囊：口服，吞服整个胶囊，或将胶囊中的小丸倒在半食匙温水中吞服。每l2小时1次，成人，1次0.2～0.3g。儿童，1～9岁，每次0.1g，9～l2岁，每次0.2g，12～16岁，每次0.2g。

【制剂与规格】

1.茶碱片：0.1g。

2.茶碱控释片：0.1g。

3.茶碱缓释片：①0.1g；②0.4g(按无水茶碱计算)。

4.茶碱控释胶囊：①0.1g；②0.3g。

【不良反应】茶碱的毒性常出现在血清浓度为15～20μg/ml，特别是在治疗开始，早期多见的有恶心、呕吐、易激动、失眠等，当血清浓度超过20μg/ml，可出现心动过速、心律失常，血清中茶碱超过40μg/ml，可发生发热、失水、惊厥等症状，严重的甚至呼吸、心跳停止致死。

【药理作用】该品对呼吸道平滑肌有直接松弛作用。其作用机理比较复杂，过去认为通过抑制磷酸二酯酶，使细胞内cAMP含量提高所致。实验认为茶碱的支气管扩张作用部分是由于内源性肾上腺素与去甲肾上腺素释放的结果，此外，茶碱是嘌呤受体阻滞剂，能对抗腺嘌呤等对呼吸道的收缩作用。茶碱能增强膈肌收缩力，尤其在膈肌收缩无力时作用更显著，因此有益于改善呼吸功能。

【药动学】口服易被吸收，血药浓度达峰时间为4～7小时，每日口服一次，体内茶碱血药浓度可维持在治疗范围内(5～20μg/ml)达12小时，血药浓度相对较平稳。蛋白结合率约60%。t1/2新生儿(6个月内)>24小时，小儿(6月以上)(3.7±1.1)小时，成人(不吸烟并无哮喘者)(8.7±2.2)小时，吸烟者(一日吸1～2包)4～5小时。该品主要在肝脏代谢，由尿排出，其中约10%为原形物。

【相互作用】

1．地尔硫、维拉帕米可干扰茶碱在肝内的代谢，与该品合用，增加该品血药浓度和毒性。

2．西咪替丁可降低该品肝清除率，合用时可增加茶碱的血清浓度和(或)毒性。

3．某些抗菌药物，如大环内酯类的红霉素、罗红霉素、克拉霉素、喹诺酮类的依诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星，克林霉素、林可霉素等可降低茶碱清除率，增高其血药浓度，尤以红霉素和依诺沙星为著，当茶碱与上述药物伍用时，应适当减量。

4．苯巴比妥、苯妥英、利福平可诱导肝药酶，加快茶碱的肝清除率；茶碱也干扰苯妥英的吸收，两者血浆中浓度均下降，合用时应调整剂量。

5．与锂盐合用，可使锂的肾排泄增加。影响锂盐的作用。

6．与美西律合用，可减低茶碱清除率，增加血浆中茶碱浓度，需调整剂量。

7．与咖啡因或其他黄嘌呤类药并用，可增加其作用和毒。

注意事项

1．与其他茶碱缓释制剂一样，该品不适用于哮喘持续状态或急性支气管痉挛发作的患者。

2．应定期监测血清茶碱浓度，以保证最大的疗效而不发生血药浓度过高的危险。

3．肾功能或肝功能不全的患者，年龄超过55岁特别是男性和伴发慢性肺部疾病的患者，任何原因引起的心力衰竭患者，持续发热患者。使用某些药物的患者及茶碱清除率减低者，在停用合用药物后，血清茶碱浓度的维持时间往往显著延长。应酌情调整用药剂量或延长用药间隔时间。

4．茶碱制剂可致心律失常和(或)使原有的心律失常恶化；患者心率和(或)节律的任何改变均应进行监测和研究。

5．低氧血症、高血压或者消化道溃疡病史的患者慎用该品。

6．对该品过敏的患者，活动性消化溃疡和未经控制的惊厥性疾病患者禁用。

7．该品可通过胎盘屏障，也能分泌入乳汁，随乳汁排出，孕妇、产妇及哺乳期妇女慎用。

药典记载

茶碱Chajian

Theophylline

[修订]

【检查】有关物质 取该品，加流动相溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相稀释制成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液；另取茶碱和可可碱各适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中各含10μg的溶液，作为系统适用性试验溶液。照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以醋酸盐缓冲液（取醋酸钠1.36g，加水100ml使溶解，加冰醋酸5ml，再加水稀释至1000ml，摇匀）-乙腈（93:7）为流动相，检测波长为271nm。量取系统适用性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按茶碱峰计算不低于5000，可可碱峰与茶碱峰的分离度应大于2.0。取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，单个杂质峰的峰面积不得大于对照溶液主峰峰面积的1/5（0.1%），各杂质峰峰面积的和不得大于对照溶液主峰的峰面积（0.5%）。

茶碱药物

迄今为止已知茶碱类药物及其衍生物有300多种。临床上较为常用的有氨茶碱、二羟丙茶碱、胆茶碱、茶碱乙醇胺和思普菲林等。

1．氨茶碱：是临床使用多年且国内应用最广泛的茶碱与乙二胺的复盐制剂。氨茶碱比茶碱水溶性高，易于溶解和吸收。但氨茶碱碱性较高，局部刺激性大，口服易致恶心、呕吐、食欲下降等胃肠道反应。肌注局部可有红肿疼痛等。氨茶碱的全身副作用包括对中枢神经的和心脏的兴奋作用，如焦虑、震颤、烦躁不安、头痛和心慌等。静脉注射过快或剂量过大，还可引起心律失常、血压下降、胸闷、躁动、惊厥甚至猝死。因此，应用氨茶碱，尤其是静脉使用时，应监测血浆茶碱浓度，在无血浆茶碱浓度监测下应密切注意日用药总量，结合考虑机体对茶碱代谢的个体差异，以及影响茶碱代谢的诸因素，并注意有无氨茶碱中毒的前兆症状，如精神症状或心悸等。常用口服量为每次0．1克，每日3次；极量为每次0．4克，每日1克；静脉注射每次0．25克，加25%～50%葡萄糖稀释后缓注。

2．喘定（甘油茶碱，二羟丙茶碱）：是茶碱的中性制剂，pH值近中性，对胃肠道刺激小，主要用于口服给药。其支气管扩张作用较氨茶碱少。心脏副作用也很轻，仅为茶碱的1/10。常用量为每次0．1～0．2克，每日3次；静脉注射每次为0．5克，应加入液体中静滴。

3．胆茶碱：为胆碱当茶碱的复盐制剂。水溶性强，溶解度为氨茶碱的5倍。因此，胃肠吸收较快，口服后约3/小时血浆浓度可达峰值。该药的胃肠刺激小，适宜口服；常用口服量为每次0．2～0．4克，每日3次。

4．茶碱乙醇胺：为氨茶碱直肠栓剂，用于夜间哮喘，于睡前塞入肛门0．5克，可有效地预防夜间哮喘的发作。

5．思普菲林：是发现的新一代衍生物。支气管扩张效应是氨茶碱的5倍以上，并无中枢系统、心血管系统兴奋的副作用。与茶碱相比，恩普菲林不增加胃的分泌，也无利尿作用，仅有轻微的恶心、头痛等副作用。口服剂量每次为4毫克/千克，每日2次；静注剂量每次为0．5～1．5毫克/千克，每日l～2次。

6．茶碱缓释剂：剂型有持续释放12小时和24小时两种。持续释放12小时的制剂，代表药是茶喘平，口服后在胃肠道中能逐渐、恒速地释放，对胃粘膜的刺激性较普通条碱制剂明显减低。由于茶喘平的疗效可靠、作用时间长和给药方便等优点，使之成为最常用的口服止喘药物。其用法为：成人每12小时口服250～500毫克，9～16岁每12小时口服250毫克，6～8岁每12小时口服125毫克。持续释放24/小时的制剂有Theo24、Ccniphlliue和DilatranceAP等。茶碱类药物的作用机制相当复杂，传统的观点认为，茶碱类药物的平喘是特异性地抑制磷酸二酯酶的活性。使细胞内cAMP增高，从而导致支气管扩张。研究证实，治疗剂量的茶碱不能抑制磷酸二酯酶活性，许多比茶碱抑制磷酸二酯酶活性更强的药物都无平喘效应。研究还表明：茶碱类药物通过促进细胞内Ca2+的外流而抑制Ca2+的内流，使细胞内Ca2+浓度降低，从而使气道平滑肌松弛，支气管扩张。茶碱类药物有保护肥大细胞膜、抑制炎性介质释放的作用，并有直接刺激内源性儿茶酚胺的释放作用和桔抗体内腺音所诱发的支气管痉挛效应作用。能增加气道的粘液分泌，促进支气管的粘液清除作用；能增加肺与支气管的血流量，扩张肺动脉，并具有能直接刺激呼吸中枢、使之兴奋的作用。

实验一 转氨酶GPT活性的测定

【 原 理 】

转氨酶是体内重要的一类酶.转氨酶催化α–氨基酸的α–氨基与α–酮酸的α–酮基之间的相互转化,从而生成一种新的氨基酸与一种新的酮酸,这种作用称为转氨基作用.它在生物体内蛋白质的合成,分解等中间代谢过程中,在糖,脂及蛋白质三大物质代谢的相互联系,相互制约及相互转变上都起着很重要的作用.

在动物机体中活力最强,分布最广的转氨酶有两种:一种为谷氨酸草酰乙酸转氨酶(glutamic-Oxaloacetate transaminase简称GOT),另一种为谷氨酸丙酮酸转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase简称GPT).本实验以谷氨酸丙酮酸转氨酶为例.它的催化反应如下:

GPT

丙氨酸 + α–酮戊二酸 谷氨酸 + 丙酮酸

37℃

由上可见此反应最终产物是丙酮酸.测定单位时间内丙酮酸的产量即可得知转氨酶的活性.

丙酮酸可与2,4–二硝基苯肼反应,形成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中呈棕红色,显色的深浅在一定范围内可反映所生成的丙酮酸量多少,与同样处理的丙酮酸标准液进行比色,计算出其含量,以此测定转氨酶的活性.

丙酮酸 + 2,4–二硝基苯肼 丙酮酸–2,4–二硝基苯腙(棕红色)

本实验用金氏(King)法(1)测定转氨酶的活性单位为:每毫升血清与基质在37℃下作用60分钟,生成1μmol丙酮酸为1个单位.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.1/15 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲溶液:

甲液:1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液:称取磷酸氢二钠(Na2HPO4)9.47g(或Na2HPO4 · 12H2O 23.87g)溶解于蒸馏水中,定容至1 000 ml.

乙液:1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液:称取磷酸二氢钾(KH2PO4)9.078g,溶解于蒸馏水中,定容至1 000 ml.

取甲液825 ml乙液175 ml混合,测其pH为7.4即1/15 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液.

2.GPT基质液:精确称取a–酮戊二酸29.2 mg及DL–丙氨酸1.78g,溶于1/15 mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲液50ml 中溶解,加1mol/L NaOH溶液0.5ml,校正pH至7.4.再以pH 7.4的磷酸缓冲液定容至100ml,充分混合,冰冻贮存.

3.2,4–二硝基苯肼溶液:精确称取2,4–二硝基苯肼20mg,先溶解于10ml浓盐酸中(可加热助溶),再以蒸馏水稀释至100ml(有沉渣可过滤),棕色瓶内保存.(注意:此溶液配制时释放大量的热和难闻气味配制时应戴上口罩)

4.丙酮酸标准液(1ml = 2μmol丙酮酸即2mmol/L):精确称取丙酮酸钠22mg于100ml容量瓶中,用1/15 mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度.此溶液应新鲜配制,不能存放.

5.0.4 mol/L氢氧化钠溶液:称取16g氢氧化钠溶解于蒸馏水中,定容至1 000ml.

6.1mol/L氢氧化钠溶液:称取4g氢氧化钠溶解于蒸馏水中,定容至1 00ml.

7.血清300ml.

二 器材

1.水浴锅.

2.分光光度计.

【 操 作 】

1.标准曲线制作:取6支试管按下表操作.

试管号

试 剂

1 2 3 4 5 6

丙酮酸标准液 (ml)

GPT基质液 (ml)

PH7.4磷酸缓冲液(ml)

0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25

0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25

0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

水浴37℃,10分钟

2,4二硝基苯肼溶液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

保温37℃,20分钟

0.4N氢氧化钠溶液 (ml) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

相当活性(单位数) 空白 100 200 300 400 500

混匀后,用分光光度计在520nm波长处进行比色测定,以空白调零,读取各管吸光度读数.以各管相应的转氨酶活性单位值为横坐标,吸光度值为纵坐标,用坐标纸绘制标准曲线.

2.GPT测定:取2支洁净的试管按下表操作.

试 剂 空 白 测 定

血 清 (ml) 0.1 0.1

G PT基质液 (ml) -- 0.5

混匀, 37℃水浴,60分钟

G PT基质液 (ml) 0.5 --

2,4二硝基苯肼溶液 (ml) 0.5 0.5

混匀, 37℃水浴,20分钟

0.4mol/L氢氧化钠 (ml) 5.0 5.0

混匀,放置5分钟,用分光光度计在波长520nm波长处进行比色测定,以空白调零,读取测定管吸光度值.

【 实验结果 】

所测得的吸光度值在已绘制好的标准曲线上直接查对,即可得知待测转氨酶的活性单位.

【 注意事项 】

1.测定血清中转氨酶活性主要有金氏 (King) 法,赖氏 (Reitman—Frankel)法和改良穆氏(Mohun)法.这三种方法的原理,试剂和操作方法包括血清和试剂的用量及作用温度均相同,不同之处是金氏法酶作用时间为60分钟,而其他二法为30分钟.因此活性单位定义不同.

2.转氨酶只作用于L–型氨基酸,对D–型氨基酸无催化能力.实验中所用的是DL–型的混旋氨基酸.若采用L–型时,则用量比DL–型少一半.

3.所用仪器应清洁,不应含有酸,碱,Zn2+,Ca2+,Hg2+,Ag+等蛋白沉淀剂.

4.血清不应溶血,因血细胞内转氨酶含量较多.样品采集后应当日进行测定,否则应将血清分离后贮存于冰箱.

5.温度及时间一定要严格控制,准确掌握.pH要准确以免影响酶活性.

实验二 过氧化氢酶及过氧化物酶的作用

【 原 理 】

在生物机体内,某些代谢物由于需氧脱氢的结果而产生对机体有害的过氧化氢.体内的过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和分子氧,使过氧化氢不致在体内积累.因此,过氧化氢酶具有保护生物机体的作用.

过氧化氢酶是一种以铁卟啉为辅基的酶,它广泛存在于动植物组织中.

过氧化物酶也是一种以铁卟啉为辅基的酶,它能催化过氧化氢释放出新生态氧以氧化某些酚类和胺类物质,例如,氧化溶于水中的焦性没食子酸生成不溶于水的焦性没食子橙(橙红色).其作用机制如下:

E + H2O2 E–H2O2

E–H2O2 + H2O2 E + 2 H2O + O2

【 试剂和器材 】

一 试剂

2%过氧化氢溶液:此溶液易见光分解,应新鲜配制.

1%焦性没食子酸溶液:焦性没食子酸1g,用蒸馏水溶解并配至100ml.此溶液易

氧化,应新鲜配制.

铁粉.

二 材料

鲜猪肝糜.

马铃薯或血液.

白菜梗提取液:白菜梗约5g,切成细块,置研钵内,加蒸馏水15ml研磨成浆,转

移出滤液,备用.

【 操 作 】

1.过氧化氢酶的作用

取试管5支,按下表操作:

试管 2% H2O2(ml) 新鲜肝糜 (g) 煮沸肝糜(g) 生马铃薯(g) 熟马铃薯(g) 铁粉

1 3 0.5 - - - -

2 3 - 0.5 - - -

3 3 - - 1 - -

4 3 - - - 1 -

5 3 - - - - 少许

加毕,观察有无气泡放出,特别是肝糜周围和马铃薯周围.

2.过氧化物酶的作用

取试管4支,按下表操作:

试管 1%焦性没食子酸 2% H2O2 蒸馏水 白菜梗提取液 煮沸的白菜梗提取液

(ml) (滴) (ml) (ml) (ml)

1 2 2 2 - -

2 2 - - 2 -

3 2 2 - 2 -

4 2 2 - - 2

摇匀后,观察并记录各管颜色变化和沉淀的出现.

实验三 琥珀酸脱氢酶及丙二酸的抑制作用

【 原 理 】

琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的一个重要的酶,测定细胞中有无这种酶可以初步鉴定

三羧酸循环途径是否存在.琥珀酸脱氢酶可使其底物脱氢,产生的氢可通过一系列传递体最后递给氧而生成水.在缺氧的情况下,若有适当的受氢体也可显示出脱氢酶的作用.如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下,可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白.这样,便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用.

琥珀酸 + 甲烯蓝 琥珀酸脱氢酶 延胡索酸 + 甲烯白

丙二酸的化学结构与琥珀酸相似,它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合.若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合,则不能再催化琥珀酸脱氢,这种现象称为竞争性抑制.如相对地增加琥珀酸的浓度,则可减轻丙二酸的抑制作用.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.1.5%琥珀酸钠溶液:取琥珀酸钠1.5g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml.如无琥珀酸钠可用琥珀酸配成水溶液后,以氢氧化钠溶液中和至pH7~8.

2.1%丙二酸钠溶液:取丙二酸钠1g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml.

3.0.02%甲烯蓝溶液.

4.1/15mol/LNa2HPO4溶液:取Na2HPO4 · 2H2O 11.88g,用蒸馏水溶解并稀释至1 000ml.

5.液体石蜡.

二 器材

1.玻璃匀浆器.

2.离心机.

三 材料

新鲜猪心.

【 操 作 】

1.猪心脏制备液:称取新鲜猪心1.5~2.0g玻璃匀浆器放中,加入等体积的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml,捣碎成浆,再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液,放置一小时,不时摇动,离心(3000r/min 10 min)取上清液备用.

2.取4支试管,编号并按下表操作:

试管 心脏制备液 1.5%琥珀酸钠溶液 1%丙二酸钠溶液 蒸馏水 0.02%甲烯蓝溶液

(滴) (滴) (滴) (滴) (滴)

1 5 5 - 10 2

2 5(先煮沸) 5 - 10 2

3 5 5 5 5 2

4 5 10 5 5 2

3.各管溶液混匀后,每管各加液体石蜡一薄层(约5~10滴).为什么

4.各管置于37℃水浴中,半小时内观察各管颜色变化,比较其速度并说明原因.然后将第一管用力摇动,观察其有何变化 为什么

实验四 γ–球蛋白的分离

【 原 理 】

中性盐 (如硫酸铵,硫酸钠,氯化钠,硫酸镁等)对球状蛋白质的溶解度有显著影响.随着中性盐浓度的增加,离子强度也增加.当溶液离子强度增加到一定数值时,溶液中蛋白质的溶解度开始下降.离子强度增加到足够高时,蛋白质可从水溶液中沉淀出来,这种现象叫做盐析.各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的高浓度盐溶液来沉淀分离各种蛋白质.

蛋白质是一种生物大分子,它具有不能通过半透膜的性质.透析就是利用这种性质使之与其它小分子物质如无机盐,单糖等分开.本次实验应用的是脱盐透析,即盐析后,将含大量盐类的蛋白质溶液放在半透膜的袋内,再将透析袋浸入蒸馏水中.经过一段时间,袋内的盐类浓度即逐渐降低.若经常更换袋外的液体,最后即可使袋内的蛋白质溶液中所含的盐类除净,从而达到脱盐的目的.应用不同浓度硫酸铵分段盐析法将血清中γ–球蛋白及α,β球蛋白分离,最后用透析法脱盐,即可得到纯度较高的γ–球蛋白.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.pH 7.2,0.01mol/L磷酸盐缓冲液生理盐水(简称PBS): 取0.2mol/L Na2HPO4溶液36.0ml,0.2mol /L NaH2PO4溶液14.0ml混合,加NaCl 8.5克,用蒸馏水稀释至1 000ml.

2.pH7.2饱和硫酸铵溶液:用浓氨水将2 000ml饱和硫酸铵溶液调pH到7.2.

3.纳氏试剂:

纳氏试剂贮存液:于500ml三角烧瓶内加入碘化钾150克,碘110克,汞50克及蒸馏水l00ml,用力振荡7~15分钟,至碘色将转变时,此混合液即产生高热.随即将此烧瓶浸于冷水内振荡,直至棕色之碘转变成带绿色之碘化钾汞溶液为止.将上清液倾入2 000ml量筒内,并用蒸馏水洗涤瓶内沉淀物数次.将洗涤液一并倾入量筒内,加蒸馏水至2 000ml刻度后,混匀即成.

纳氏试剂应用液:取10%氢氧化钠700ml,钠氏试剂贮存液150ml及蒸馏水150ml混匀即成,如显混浊,可静置数日后取上清液使用.此试剂之酸碱度极为重要.用lmol/L盐酸溶液20ml滴定时,需此试剂11～11.5ml恰好使酚酞指示剂变成红色时最为适宜.否则必须纠正其酸碱度.

4.双缩脲试剂:溶解1.50克硫酸铜(CuSO4·5H2O)和6.0克酒石酸钾钠(NaKC4H406 · 4H20)于500ml蒸馏水中.在搅拌下加入10%氢氧化钠溶液300ml,用蒸馏水稀释到1升,贮存在内壁涂以石蜡的瓶中,可长期保存.

5.浓蔗糖液:蔗糖的饱和溶液.

6.10%氢氧化钠:取10克氢氧化钠溶解于蒸馏水中,定容至100ml.

二 器材

1.透析袋.

2.磁力搅拌器.

3.离心机.

三 材料

兔血清

【 操 作 】

一 盐析

1.取离心管1支加入血清2ml,再加入等量PBS稀释血清,摇匀后,逐渐加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2ml(相当于33%饱和度硫酸铵),边加边摇.然后静止半小时,再离心(3 000r/min)20分钟,倾去上清液(主要含白蛋白).

2.用lml PBS将离心管底部的沉淀搅拌溶解,再逐滴加饱和硫酸铵溶液0.5m1.摇匀后放置半小时,离心(3 000r/min)20分钟,倾去上清液(主要含α,β球蛋白),其沉淀即为初步纯化的γ–球蛋白.如要得到更纯的γ–球蛋白,可重复盐析过程1～2 次.

3.把提取的γ–球蛋白用1 mlPBS悬浮.

二 透析脱盐与浓缩

1.将盐析得到的γ–球蛋白放入透析袋内,用线绳缚紧上口,用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100ml烧杯中,使透析袋下半部浸入水中.

2.将烧杯放在磁力搅拌器上搅拌1小时以上(中间换水1～2次),然后将透析袋取下.小心将线绳解开,吸取袋内的液体,与烧怀中的水同时用双缩脲试剂检查袋内外的蛋白质,用纳氏试剂检查袋内外液体中的铵离子(NH4+),观察透析法的脱盐效果.

3.脱盐后得到的γ–球蛋白溶液可继续浓缩,即用透析袋装好悬于盛有10ml浓蔗糖或聚乙二醇溶液的小烧杯内1小时以上,观察袋内液体体积的变化.

实验五 γ–球蛋白含量测定(光度分析法)

【 原 理 】

双缩脲法是蛋白质光度分析法的一种,是利用蛋白质的双缩脲反应而测定蛋白质含量的方法.因蛋白质含有两个以上的肽键,所以有双缩脲反应.在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关.在一定的实验条件下,未知样品溶液与标准蛋白质溶液同时反应,并于540~560nm测定,即可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.标准酪蛋白溶液(5mg/ml):用0.05mol/L NaOH溶液配制:5g酪蛋白加0.05mol/L NaOH溶液至1 000ml.

2.双缩脲试剂:溶解1.5g硫酸铜(CuSO4 · 5H2O)和6.0 g酒石酸钾钠(NaKC4H4O6 · 4H2O)于500ml蒸馏水中.在搅拌下加入10% NaOH溶液300ml,用蒸馏水稀释到1升,贮存在内壁涂有石蜡的瓶中,可长期保存.

3.未知蛋白质溶液:γ–球蛋白溶液.

二 器材

分光光度计.

【 操 作 】

1.标准曲线的绘制:取6支试管按下表操作.

试 剂 1 2 3 4 5 6

标准酪蛋白溶液(ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0

蒸馏水 (ml) 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0

双缩脲试剂 (ml) 4 4 4 4 4 4

室温下(15~25℃)放置30分钟,用分光光度计于540nm测定.以光密度为纵坐标,酪蛋白含量为横坐标用坐标纸绘制标准曲线.

2.γ–球蛋白溶液浓度的测定:取3支试管按下表操作.

试 剂 空白管 测定1 测定2

γ–球蛋白溶液(ml) - 1 1

蒸馏水 (ml) 2 1 1

双缩脲试剂 (ml) 4 4 4

摇匀,放置30分钟,540nm测定读取光密度.

【 实验结果 】

求出待测蛋白质溶液的光密度后,从标准曲线上查出其蛋白质浓度,按稀释倍数求出每毫升蛋白质溶液的蛋白质含量.

实验六 凝胶柱层析法(γ–球蛋白纯化)

【 原 理 】

凝胶层析(gel chromatography),又称为凝胶过滤(gel filtration),分子筛过滤(molecular sieve filtration),凝胶渗透层析(gel osmotic chromatography)等.它是20世纪60年代发展起来的一种层析技术.其基本原理是利用被分离物质分子大小不同及固定相(凝胶)具有分子筛的特点,将被分离物质各成分按分子大小分开,达到分离的方法.

凝胶是由胶体粒子构成的立体网状结构.网眼里吸满水后凝胶膨胀呈柔软而富于弹性的半固体状态.人工合成的凝胶网眼较均匀地分布在凝胶颗粒上有如筛眼,小于筛眼的物质分子均可通过,大于筛眼的物质分子则不能,故称为"分子筛".凝胶之所以能将不同分子的物质分开是因为当被分离物质的各成分通过凝胶时,小于筛眼的分子将完全渗入凝胶网眼,并随着流动相的移动沿凝胶网眼孔道移动,从一个颗粒的网眼流出,又进入另一颗粒的网眼,如此连续下去,直到流过整个凝胶柱为止,因而流程长,阻力大,流速慢大于筛眼的分子则完全被筛眼排阻而不能进入凝胶网眼,只能随流动相沿凝胶颗粒的间隙流动,其流程短,阻力小,流速快,比小分子先流出层析柱小分子最后流出.分子大小介于完全排阻不能进入或完全渗入凝胶筛眼之间的物质分子,则居中流出.这样被分离物质即被按分子的大小分开.

用于凝胶层析的凝胶均为人工合成的产品,主要有交联葡聚糖(商品名为Sephadex),琼脂糖(商品名为Sepharose),聚丙烯酰胺凝胶(商品名为Bio–gel)及具有一定网眼的细玻璃珠等和这些凝胶的衍生物.

本实验主要介绍葡聚糖凝胶,这是由葡萄糖的多聚物与1–氯–2,3–环氧丙烷 (CH2—CH—CH2C1)交连而成.环氧丙烷引入丙三醇基将链状的多聚葡萄糖单位交联起来,凝

\/

O 胶网眼的大小由多聚葡萄糖的分子和环氧丙烷的比例(交联度)来控制.

葡聚糖具有较强的亲水性,在水和电解质溶液中膨胀成为柔软而富于弹性的凝胶,其吸水能力与葡聚糖凝胶的交联度有密切关系.交联度大的,孔径小,吸水少,膨胀的程度小交联度小的,孔径大,吸水多,膨胀的程度大.因此,葡聚糖凝胶孔径的大小可以其吸水量的大小来表示,常以G–10至G–200号码标记.G后面的数字是其吸水量(毫升水/克干胶)乘以10所得的值.如G–25即表示吸水量为2.5ml/g干胶.市售有G–10,G–25,G–50,G–75,G–100,G–150,G–200等型号.G–75以上的胶因吸水量大,膨胀后形态柔软易变,统称为软胶.G–75以下的称为硬胶.

葡聚糖凝胶可分离的分子大小从几百到数十万.可根据被分离物质的分子大小及目的选择使用.一般说Sephadex G–l0～15通常用于分离肽及"脱盐".Sephadex G–75～200用以分离各类蛋白质.

凝胶层析是一种物理分离法.葡聚糖凝胶基本上不带电荷呈多惰性,不与被分离物质发生反应,所以分离的效果较好.然而由于它是葡萄糖的聚合物,因而仍有少量活性羟基,能吸附少量蛋白质等被分离的物质.为了克服这个缺点,一般使用含有离子强度达0.08的NaCl等中性盐缓冲液作洗脱液.

本实验采用凝胶过滤法纯化γ–球蛋白,除去其中的硫酸铵,以达到纯化目的.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.实验二提取出的γ–球蛋白

2.磷酸盐缓冲液(pH6.7,0.0175mol):取0.2mol/L Na2HPO4溶液43.5ml,0.2mol/L NaH2PO4溶液56.6ml混合,用蒸馏水稀释至1 000ml.

3.Sephadex G–25.

4.奈氏试剂

5.20%磺酰水扬酸

6.洗脱液:磷酸盐缓冲液(pH 7.0,0.01mol) 取0.2mol/L Na2HPO4溶液30.5ml,0.2mol /LNaH2PO4溶液19.4ml混合,加NaCl 8.5克,用蒸馏水稀释至1 000ml.

二 器材

1.lcm×20cm层析柱

2.洗脱瓶.

3.部分收集器

恒流泵

5.监测仪

【 操 作 】

1.凝胶处理:溶胀(水化):商品葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶均为干燥颗粒,使用前必须水化溶胀.商品琼脂糖凝胶呈悬浮胶体可直接用,玻璃球不用溶胀.

凝胶溶胀有两种方法:一种是将所需葡聚糖凝胶浸入蒸馏水中于室温下溶胀另一种 是置于沸水浴中溶胀.各种葡聚糖在上述溶胀方法中所需的时间见实验原理部分.

必须浸泡足够的时间以使凝胶充分溶胀.两种方法中,沸水浴溶胀不但节省时间,还可以杀灭凝胶中污染的细菌并排出网眼.

凝胶溶胀后,需用蒸馏水洗涤几次,每次应将沉降缓慢的细小颗粒随水倾倒出去,以免在装柱后产生阻塞现象,降低流速.洗后将凝胶浸泡在洗脱液中待用.

一支层析柱中应该装入的干胶量可以用下法推算:称取1g所需型号的葡聚糖干胶,放在5ml量筒中,用室温溶胀的方法充分溶胀,观察溶胀后凝胶的体积.然后在层析柱中加水到所需柱床高度,将水倒出,量取柱床体积.根据1g干胶溶胀后的体积和所需柱床体积,即可推算出干胶的需要量.

2.装柱 将层析剂装入柱中进行层析的方法称柱层析法.作层析用的柱子称层析柱.层析柱有玻璃和透明塑料的两种.柱子的一端为进口,另一端为出口,出口端底部有烧结玻璃砂板或尼龙布,能阻止层析剂流出,溶剂则可流过.如果没有市售的层析柱,可以选用粗细均匀,长短合适的玻璃管,在两端塞上合适的胶塞,胶塞中插人细玻璃管,在一端放一层尼龙布为出口,即可作为层析柱使用.层析柱的长短粗细根据实验的目的而定,一般说来,凝胶层析时柱越长,分离效果越好.但柱过长,层析时间长,样品易稀释造成扩散,反而影响分离效果.柱的内径不宜较细,直径1cm以下的柱易发生"管壁效应",即柱中部分的物质组分移动较快,管壁周围的则移动较慢,造成分离混乱.当然柱的内径也不宜过粗.

凝胶层析中,在把小分子物质(mw<1 500),如无机或其他物质与大分子物质 (mw0.5ml/支).

配制测定试剂:1号试剂:2号试剂:3号试剂=1.0:0.1:0.1,混匀.临用前视需要量配制,现用现配.

二 器材

1.水浴锅

2.分光光度计

三 材料

血清

【 操 作 】

试剂测定管(U) 标准管(S) 空白管(B)

血清 (μl)(1:5) 30 – –

标准液 (μl) – 30 –

测定试剂 (ml) 0.6 0.6 0.6

蒸馏水 (ml) 0.25 0.25 0.28

4号应用液(ml) 0.15 0.15 0.15

充分混匀,置37℃水浴30分钟

显色剂 (ml) 1.0 1.0 1.0

血清(1:5):0.1ml+0.4ml生理盐水1:5稀释后使用.

混匀,室温10分钟后,分光光度计550nm,1cm厚度比色杯比色,用蒸馏水调零.

酶活性单位表示:SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个单位.结果以每毫升酶单位表示.

【 实验结果 】

SOD U/ml = B-U/B-S×33.3×标准液体积/样品的体积

=B-U/B-S×33.3×30/30×1000/5000

=B-U/B-S×167

正常参考值:人血清SOD:59.5±17.1U/ml(血清取样量6μl)

实验十七 等电聚焦法测定SOD等电点

【 原 理 】

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上.等电聚焦的优点是:有很高的分辨率,可将等电点相差0.01-0.02 pH单位的蛋白质分开一般电泳由于受扩散作用的影响,随着时间和所走的距离加长,区带越走越宽,而等电聚焦能抵消扩散作用,使区带越走越窄由于这种电聚焦作用,不管样品加在什么部位,都可聚焦到其电点,很稀的样品也可进行分离可直接测出蛋白质的等电点,其精确度可达0.01pH单位.

载体两性电解质必需具备的条件:(1)在等电点处必需有足够的缓冲能力,以便能控制pH梯度,而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程. (2)在等电点必需的足够高电导,以便使一定的电流通过,而且要求具备不同pH值的载体有相同的电导系数,使整个体系中的电导均匀,如果有局部电导过小,就会产生极大的电位降,从而其他部分电压就会太小,以致不能保持梯度,也不能使应聚焦的成分进行电迁移,达到聚焦.(3)分子量要小,便于与被分离的高分子物质用透析或凝胶过滤法分开. (4)化学组成应不同于被分离物质,不干扰测定.(5)应不与分离物质反应或使之变性.总起来说,当一个两性电解质的等电点介于两个很近的pk值之间时,它在等电点的解离度大,缓冲能力强,而且电导系数高,这就是好的载体两性电解质.

理想的载体两性电解质的合成:具有几个pH值很相近的多乙烯多胺(如五乙烯六胺)为原料,与不饱和酸(如丙烯酸)发生加合反应:加合反应优先加在α,β饱和酸的β碳原子上,调节胺和酸的比例可以加上一个或多个羧基,这种合成方法与一般有机会合成不同,有机合成一般要求合成的产物越纯越好,而这里要求合成出的产物越复杂越好,要有多异构物和同系物,以保证的很多具有不同而又互相接近的pK值和pI值,从而得到平滑的pH梯度.载体两性电解质的等电点在pH3-10的范围,分子量在300-1000之间,它们的缓冲能力等于或优于组氨酸,电导性能良好,可以使电场强度分布较均匀,它们的水溶性良好,在1%水溶液中的紫外吸收值(260mμ)很低.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1. 1mol/LNa3PO3

2. 1mol/LNaOH

3. 1%甘氨酸

4.染色液:0.2%考马斯亮蓝

5.10%三氯乙酸

6.5%磺基水杨酸

7.电泳仪

8.脱色液:35%无水乙醇与10%冰乙酸等体积混和

9.20%甘油

二 器材

1.微量注射器

2.薄层胶片

3.滤纸

三 材料

透析后的蛋白质样品

【 操 作 】

1.薄层胶片的灌制

(1)配制凝胶溶液(2)架制胶室(3)灌胶(4)保存

2.样品的预处理:透析除盐,用1%甘氨酸或载体两性电解质为溶剂溶解透析后的蛋白质样品.

3.样品的施加: 将滤纸(擦净纸)剪成0.4×0.5cm2的小方块,先贴在胶质上,再用微量注射器滴加一定量的样品.

4.电极液的施加:电极液采用1mol/LNa3PO3为正极液,1mol/LNaOH为负极液.用滤纸条浸润电极液,然后分正负极,贴加在薄层胶片的两端.

5. 电泳的条件: 4℃下电泳或室温通冷凝水电泳.起始电压为60V,15分钟调至120V,转而恒流(每cm胶片长度0.8-1.0mA),约1小时左右,电压便上升到600～700V,再转而恒压600V或700V,维持3～3.5小时即可结束电泳.

6.pH梯度的测定: 把1×7 cm2薄层胶片切下来,分成14等分,每份加0.4ml重蒸水,搅碎后,测出pH.

7.染色及保存: 蛋白质染色步骤:5%磺基水杨酸与10%三氯乙酸等体积混合固定1小时置脱色液(35%无水乙醇与10%冰乙酸等体积混匀)45min0.2%考马斯亮蓝R250的脱色液溶液(W/V)染色30min置脱色液中,37℃温箱内过夜.染色后的胶片可放在20%甘油中,也可制成干片.

8.等电点的测定: 测定染色后所分离的区带距正极端的长度,按pH曲线找出其相应的等电点.

实验十八 牛乳中酪蛋白磷酸肽的制备

【 原 理 】

牛乳中含丰富的蛋白质,其中主要是酪蛋白.酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量的5/6.酪蛋白是一种含磷蛋白的不均一混合物.蛋白质在其等电点pH溶液中溶解度降低.将牛乳的pH调整至4.8,即酪蛋白的等电点时,酪蛋白即沉淀出来.用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪,得到纯的酪蛋白.牛乳酪蛋白中含有磷酸肽,其活性中心是磷酸化的丝氨酸和谷氨酸簇,是最有效的促钙吸收因子.酪蛋白经酶水解可产生酪蛋白磷酸肽.氮磷比是评价CPP产品质量的最重要指标,氮磷比(N/P)越小,则CPP产品中磷酸基密度越高和肽链越短,它促进人体对钙吸收的生理活性也越高,N/P一般应小于7.5.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.乙酸钠缓冲液(0.2mol/L pH4.6)

2.1%NaOH

3.10%乙酸

4.乙醇

5.乙醚

6.0.1mol/LnaOH

7.胰蛋白酶

8.pH7.4,0.1mol/LTris-HCl缓冲液

二 器材

1.pH计

2.离心机

3.表面皿

4.

三 材料

1.新鲜牛乳

2.酪蛋白

【 操 作 】

酪蛋白的制备

取新鲜牛乳300ml,放入250ml烧杯中加热至40℃.加入100ml加热至同样温度的乙酸钠缓冲液,一边加一边摇动,并用pH计检测,调整混合液的pH为4.8(用1%NaOH或10%乙酸进行调整).冷却至室温,继续放置5分钟,离心(2500r/min,20min)获沉淀物,用少量蒸馏水洗几次,过滤.将洗净的沉淀物悬浮在约 30ml乙醇中,离心得沉淀,用乙醇和乙醚等量混合液洗涤两次,最后用50ml乙醚洗一次.取出抽干的粉状物,摊开在表面皿上,使乙醚完全挥发.

二、由氰乙酸乙酯与氨反应生成氰乙酰胺

再经过消除反应制得丙二腈.

三、结果鬼针草乙酸乙酯提取物能显著降低糖尿病大鼠的血糖值。

四、目的合成植物生长调节剂对氯苯氧乙酸乙酯.

五、*弯扁柏心材丙酮萃取物之乙酸乙酯层，运用矽胶薄层分析、高效液相层析仪及再结晶等方法进行进一步的分离纯化。

六、以氰乙酸乙酯和异辛醇为原料，采用钛酸四丁酯为催化剂，用酯交换法合成氰乙酸异辛酯。

七、从烈香杜鹃的乙酸乙酯提取物中分离得到五个化合物

通过波谱分析鉴定其结构.

八、结论乙酸乙酯提取部位是口虾蛄抗肿瘤主要的活性部位.

九、方法以乙酰乙酸乙酯为起始原料lishixinzhi，经酰化、环合、溴化3步反应合成溴匹立明。

十、恒顺香醋乙酸乙酯萃取物具有弱自由基清除活性，主要清除活性成分为酚性和酸性化合物。

十一、而沱茶乙酸乙酯洗脱组分具有增加FXR受体敏感性的作用。

十二、结果表明，小蓟乙酸乙酯萃取部位具有不同程度的促进凝血、止血、抗炎等作用。

十三、白花败酱醇是从白花败酱乙酸乙酯部位和正丁醇部位分得的单体化合物，提取分离容易，提出率较高。

十四、分析了汾酒的香味成分，确定了主体香为乙酸乙酯的复合香。

十五、通过正交实验研究了可膨胀石墨的催化合成乙酸乙酯的最佳条件。

十六、结论:蓝靛果乙酸乙酯提取物是一种具优势的消化性溃疡治疗药物.

十七、例如汾酒中以乙酸乙酯和乳酸乙酯为主体香，而己酸乙酯含量甚微。

十八、采用乙酸乙酯为溶剂，粉状活性炭吸附精制异山梨醇粗品，得出适宜的精制条件，其精制品质量符合USP24版质量标准。

十九、结论了哥王乙酸乙酯提取物抑菌效果显著，具有广谱抗菌作用。

二十、结果表明，[lishixinzhi]丙酮和乙酸乙酯的组合萃取可以将原料中大豆黄苷的含量提高2.5倍以上。

二十一、在氟化钾催化下，芳香醛与氰乙酸乙酯发生克脑文格尔缩合反应，得到高产率的缩合产物。且只得到E式异构体。

二十二、建立了一种用毛细管气相色谱法测定糯米酒中甲醇、乙酸乙酯和杂醇油的方法，并对色谱条件进行了优化。

二十三、个别高档油墨用乙酸乙酯挥发速度太快，用乙酸正丁酯有气味残留，乙酸异丙酯是非常好的油墨溶剂。

二十四、本文研究了A608中乙酸乙酯，环已烷二种有机溶剂的残留量测定方法。

二十五、不会再乙酸乙酯混合物里增长！

二十六、研究杜仲雄花乙酸乙酯提取物的抗惊厥作用。

二十七、采用溶剂萃取法，以五倍子为原料，水为溶媒进行浸提，再用乙酸乙酯为溶剂进行萃取，通过脱色制备高纯度食品鞣酸。

二十八、只要看看一款欧派的指甲油包含的主要成分：醋酸丁酯，甲苯，硝化棉，乙酸乙酯，甲醛树脂，邻苯二甲酸二丁酯，异丙醇。

二十九、方法：采用HPCE的MECC的分离模式，对18个卷柏属植物样品的乙酸乙酯提取物进行测定。

三十、以酸性天然沸石为催化剂

在催化反应精馏塔中进行了合成乙酸乙酯的研究.