胆汁酸的提取工艺

胃酸的主要成分是盐酸。吃饭吃菜的时候摄入的食盐氯化钠进入人体进行一系列化学反应，就生成了胃酸胃液的主要成分和作用。 （1） 胃液的主要成分包括：盐酸、胃蛋白酶原、粘蛋白、内因子等。 1) 盐酸的作用 盐酸由泌酸腺壁细胞分泌作用：①可杀死随食物进入胃内的细菌，因而对维持胃和小肠内的无菌状态具有重要意义。②激活胃蛋白酶原，使之转变为有活性的胃蛋白酶，并为胃蛋白酶作用提供必要的酸性环境。盐酸进入小肠后：③可以引起促胰液素的释放，从而促进胰液、胆汁和小肠液的分泌。④盐酸所造成的酸性环境，还有助于小肠对铁和钙的吸收。 2) 胃蛋白酶原的作用 胃蛋白酶原由主细胞合成和分泌，其主要作用是分解蛋白质，主要分解产物是长链多肽、寡肽及少量氨基酸。胃蛋白酶只有在酸性较强的环境中才能发挥作用，其最适pH为2。随着pH的升高，胃蛋白酶的活性降低，当pH升至6以上时，即发生不可逆的变性。 3) 粘液和碳酸氢盐的主要作用 粘液和碳酸氢盐共同构筑成粘液-碳酸氢盐屏障，以抵抗胃酸和胃蛋白酶的侵蚀，对胃粘膜具有保护作用。 4) 内因子的主要作用 内因子可与食物中的维生素B12结合，形成一种复合物，这种复合物对蛋白质水解酶有很强的抵抗力，可保护维生素B12不被小肠内水解酶破坏。当复合物移行至回肠，可与远端回肠粘膜的特殊受体结合，从而促进回肠上皮吸收维生素B12。若体内产生抗内因子抗体或内因子分泌不足，将会出现维生素B12吸收不良，从而影响红细胞的生成，造成巨幼红细胞性贫血。 答案补充 （1胰液由无机成分和有机成分组成，无机成分主要为水、碳酸氢盐和多种离子；有机成分主要是消化三种营养物质的消化酶，主要有胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶原和糜蛋白酶原. 1) 胰液无机成分的作用： HCO3-的主要作用是中和进入十二指肠的胃酸，保护肠粘膜免受强酸的侵蚀；并为小肠内多种消化酶的活动提供最适的pH环境（pH7～8）。 2) 胰液的有机成分和作用 ：胰淀粉酶：是人体重要的水解淀粉的酶。 胰脂肪酶：能分解中性脂肪为脂肪酸、甘油一酯和甘油。 肠液中的肠致活酶可以激活胰蛋白酶原，使之变为具有活性的胰蛋白酶. 由于胰液中含有能消化蛋白质、脂肪和碳水化合物的水解酶，因而是所有消化液中消化力最强、消化功能最全面的一种消化液。 （2） 胆汁的成分很复杂，但胆汁中没有消化酶，参与消化和吸收的主要成分是胆盐。胆汁生理作用： 1) 促进脂肪的消化。 2) 促进脂肪分解产物的吸收. 3) 促进脂溶性维生素（维生素A、D、E、K）的吸收 4) 刺激肝分泌胆汁：胆汁中的胆盐或胆汁酸被排至小肠后，可通过胆盐的肠肝循环刺激肝胆汁分泌

胃液成分

胃液（gastric jiuce）分泌有三个主要作用：①启动蛋白质的消化；②将摄入的食物进行物理与化学的预处理，合其成为一种能适应小肠消化的混合物；③分泌的内因子能种进维生素B12在小肠内的吸收。

胃粘膜具有复杂的分泌功能，胃液是由胃壁粘膜各种细胞分泌物组织成的液体。人的纯净胃液是一种无色透明酸性液体，其成分有无面物如盐酸、钾、钠、碳酸氢盐等；有机物有胃蛋白酶原、凝乳酶、内因子、分泌素、粘蛋白等。

1．盐酸：由壁细胞分泌，通常甩谓的胃酸即指盐酸。壁细胞可以从血浆中摄取氢离子分泌到胃液中，使胃液中氢离子浓度高出血浆百万倍以上。其分泌浓度即在未被其它分泌物稀释以前约为150mmol/L，在胃中和食物等其它物质混合后下降。胃盐酸的最林分泌量怀粘膜壁细胞量呈现正相关，可从盐酸分泌量推测壁细胞量，壁细胞分泌盐酸的机制尚不十分清楚，但至少知道它是一个跨膜的主动运输过程。

胃液中盐酸以解离的游离酸与结合的结合酸两种形式在，两者加在一起为交响曲盐酯。此外胃液中还有极少的可以忽略不计的其它酸性物质，如有机酸乳酸、乙酸等及酸性盐酸性磷酸盐。这些酸总和起来以总酸度表示，但目前多以总盐酸分泌量表示胃液酸排出量。

盐酸的主要消化功能是胃蛋白酶原的激活提供所必须的高度酸化条件，同时也能有限地水解少许多肽和多糖。胃酸还杀死食入细菌的能力，此钱盐酸进入小肠后可以促进胰液、肠液和胆汁的的分泌促进对钙和铁等物质的吸收。胃液过多或过少均可出现许多症状，或成为疾病的原因之一。测定胃盐酸分泌量是常用的测量胃分泌功能的试验。

2．胃蛋白酶（pepsin）由胃腺的主细胞分泌，先以下具活性的酶原形式分泌出来，在盐酸的作用和已激活的胃蛋白酶的自身催化下转变具有活性的胃蛋白酶，胃蛋白酶是胃液内几种消化酶中最主要的一种，因此以胃液中胃蛋白酥含量代表胃液的消化力。胃蛋白酶能水解除蛋白质，其最适合反应PH为2。随着PH的升高活性降低，池达到PH6以上时即可发生不可逆的变性。因此当胃内容物进入小肠以后，胃蛋白酶即失去作用。患者胃酸缺乏和疾病，特别是恶性贫血患者可无胃蛋白酶。这是因为胃粘膜萎缩，使胃蛋白酶原分泌减少；又由于低酸或无酸，即使有少量酶原分泌，也不能成为吸活性的酶。

3．粘液（mucus）胃粘膜以常处于与胃液接触中，而只有食物被消化，胃组织不受损伤，其部分原因是因为覆盖于全胃表面的一层胶状粘液的保护作用。这种胶状物形成一种粘液屏障与胃粘膜屏障不同，保护胃沾膜免受酸、胃蛋白酶及其它的害物质侵蚀。这还人滑润作用，使胃粘膜不受机械性损伤。粘液不能阻挡水和电解质的通透。在基础状况下对胃酸有一定的中和作用，但在刺激后胃酸分泌时，此时作用微不足道。

4．碳酸氢盐：是覆盖于胃表面的粘液一碳酸氢盐屏障，对粘膜起保护作用，这个屏障作为含有PH梯度的胶状物为上皮表面提供了一处中性微环境。碳酸氢盐由胃表面粘液细胞所分泌。

5．内因子（intrinsic factor）是胃粘膜分泌的一种分子量为 1.7万的粘蛋白，其主要功能是促进肠胃对维生素B12的吸收，1单位内因子可使1ng维生素B12被吸收。内因子缺乏可引起恶性贫血。萎缩性胃炎、胃酸缺乏的病人内因子分泌量减少。刺激内因子分泌之物质与刺激胃酸分泌者相同，如五肽胃泌素、组织胺、胆碱能兴奋剂等，但内因子对刺激反应的程度与胃酸分泌封无关。正常情况下内因子不被蛋白分解酶和胃酸所破坏。

胃液中的成分很复杂，除胃泌素外还有许多内泌素。全身契约的电解质几乎都在胃液中出现。除消化酶外还有一些非消化酶。如LDH、AST、ALT、ALP等。除胃粘膜分泌物质外，胃液中还人少冼唾液中的物质，如淀粉酶等，但在胃液的PH下，淀粉酶已失去活性。若有十二反映肠的反流，胃液中还会出现胆汁酸。

胃液分析可以了解胃的分泌，运动才消化功能；还可协助检查与胃液亿分改变有关的疾病如恶性贫血等，是多年来临床上研究与诊断胃肠疾病的重要手段。

胃液分析包括空腹与给刺激剂后的胃液，其中胃酸分泌的检查占重要位置。虽然近年来有了内镜等更为直观的检查手段，胃液检查的必要性有所下降，但仍然是一个不能取化的检查项目。

目录1 拼音2 英文参考3 检查名称4 分类5 化验取材6 概述7 原理8 试剂9 操作方法10 正常值11 临床意义12 附注13 相关疾病 1 拼音

zǒng dǎn zhī suān

2 英文参考

TBA

total bile acid

total bile acids

3 检查名称

总胆汁酸

4 分类

血液生化检查/脂类测定

5 化验取材

血液

6 概述

胆汁酸的生成和代谢与肝脏有十分密切的关系，血清胆汁酸水平是反映肝实质损伤的一个重要指标。血清总胆汁酸（Total bile acids，TBA）测定对肝病的诊断有十分重要的价值。

7 原理

在3α羟类固醇脱氢酶（3αHSD）作用下，各种胆汁酸C3上α位的羟基（3αOH）脱氢形成羧基（3αO），同时氧化型NAD＋还原成NADH。随后，NADH的上氢由黄递酶催化转移给硝基四氮唑蓝（NTB），用磷酸终止反应，生成物的产量与总胆汁酸成正比，在540nm波长比色。与同样处理的标准品比较，计算其含量。反应式如下：

8 试剂

有成套商品试剂盒供应，主要包括以下成分：

（1）0.2mol/L TrisHCl缓冲液（pH7.5）：称取Tris 24.3g，用约500ml蒸馏水溶解。加入1mol/L盐酸161.2ml，混匀，以蒸馏水稀释至1L，加入非离子表面活性剂Noigen ET180 10mg。

（2）测定试剂：取48ml上述缓冲液，加入66.3mg（100μmol）NAD＋、20mg NTB，溶解，临用前加入50U黄递酶及0.5U 3αHSD，贮棕色瓶中，置4℃保存。

（3）空白试剂：同测定试剂，但不含3αHSD，贮棕色瓶中，置4℃保存。

（4）丙酮酸钠（200mmol/L）：称取丙酮酸钠1.1g，以蒸馏水溶解并稀释至50ml，贮棕色瓶中，置4℃保存。

（5）1.33mol/L磷酸：取85%磷酸（d＝1.685）45.5ml，加入约400ml蒸馏水中稀释至500ml。

（6）混合血清：取无溶血、无黄疸、肝功能试验正常的血清混合。

（7）标准液（50μmol/L甘氨胆酸钠）：称取甘氨胆酸钠（MW＝487.6）2.44mg，溶入100ml混合血清中，分装后冰冻保存。

9 操作方法

严格按试剂盒说明书进行，或参照表1操作。

混匀，540nm波长比色，以相对应的B管调零，分别测定相应各管吸光度。

10 正常值

禁食，成人血清1～7μmol/L（3.5±1.75）。

11 临床意义

（1）急性肝炎：急性肝炎时血清TBA显著增高，可达正常人水平的10～100倍，甚至更高。杨昌国等报道，60名健康对照者空腹TBA（FTBA）含量为4.9±2.4μmol/L，中餐后2h血清TBA（PTBA）含量为8.2±2.9μmol/L；34例急性肝炎急性期FTBA为124.1±74.0μmol/L，PTBA为152.2±73.0μmol/L，分别是正常上限的13倍和11倍，异常率为100%。急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高值几乎与AST在同一时间降至正常水平，若持续不降或反而升高者则有发展为慢性的可能。有人对21例急性肝炎患者的随访研究发现，凡TBA恢复至10μmol/L以下者，一年后未发现有慢性转归病例，但TBA升高而AST降至正常者5例中有4例转为慢性肝炎。

（2）慢性肝炎：国外研究认为，在慢性肝炎患者中，若TBA水平超过20μmol/L，可考虑慢性活动性肝炎。国内杨昌国等报道，慢性迁延性肝炎pTBA和FTBA分别是23.6±12.5μmol/L和7.7±4.6μmol/L，而慢性活动性肝炎分别是111.3±45.1μmol/L和78.7±38.9μmol/L，慢性活动性肝炎的FTBA和PTBA均显著高于慢性迁延性肝炎。故血清TBA测定对慢性肝炎的鉴别以及监测慢性活动性肝炎的预后和治疗效果有重要意义。

（3）肝硬化：肝硬化时，肝脏对胆汁酸的代谢能力减低，血清TBA在肝硬化的不同阶段均增高，增高幅度一般高于慢性活动性肝炎，即使在肝硬化的晚期亦如此。当肝病活动降至最低时，胆红素、转氨酶及堿性磷酸酶等指标转为正常，但血清TBA仍维持在较高水平上。

（4）乙醇性肝病：乙醇性肝病血清TBA可增高。当乙醇性肝病（包括肝硬化）发生严重的肝损伤时，血清TBA明显增高，而轻、中度损伤增高不明显。也有人报道，血清TBA测定对乙醇性肝病肝细胞损伤诊断的可信度和灵敏度远远优于各种酶学检查和半乳糖耐量试验等指标，甚至建议将血清TBA再加上β氨基己糖苷酶作为乙醇性肝病的诊断指标。Sumino等报道，乙醇性肝病病人食入蛋黄后60min，血清TBA明显升高，并认为餐后60minTBA测定对乙醇性肝病诊断更有意义。

（5）中毒性肝病：血清TBA测定对中毒性肝病的诊断优于常规肝功能试验。有报道表明，在23例接触苯乙烯的工人中，11人血清TBA增高，而其他指标仅有3例异常。对临床服用某些治疗药物而致肝中毒引起的急性肝损伤也有诊断意义。

（6）胆汁淤积：血清TBA测定对胆汁淤积的诊断有较高灵敏度和特异性。肝外胆管阻塞及肝内胆汁淤积包括急性肝炎、初期胆管性肝硬化、新生儿胆汁淤积、妊娠性胆汁淤积等均可引起TBA增高。在胆管阻塞的初期，胆汁分泌减少，使血清中的TBA显著增高，且在阻塞的不同阶段几乎保持不变；而血清胆红素水平则随着不同阶段而变化。胆汁淤积患者肝组织中的胆汁酸含量明显高于正常人，CA增高8倍，CDCA增高4倍，DCA仅增加1.5%。肝外阻塞经过引流缓解后，血清TBA水平迅速下降，而其他指标则缓慢恢复正常。

在所有肝病中，餐后血清TBA水平及异常率均比空腹时高，故对肝病的诊断餐后TBA测定比空腹时测定更灵敏。有人报道，餐后测定TBA对各种肝病的诊断灵敏度和特异性高达100%，而同时测定空腹血清TBA有40%的患者在正常范围。急性肝炎是否转为慢性，连续监测餐后TBA水平可以观察慢性过程。慢性活动性肝炎是否发生肝纤维化改变，餐后连续监测也可以了解纤维化过程，不做肝活检即可获得肝损伤的程度。

12 附注

（1）血清中LD在其底物存在下（血清中含有一定量的乳酸）也可还原NAD＋为NADH，产生高空白值。本法中加入丙酮酸钠，抑制LD活性，可有效地降低空白吸光度。

（2）反应混合物中各成分浓度为：

3αHSD    5U/L

黄递酶     500U/L

NAD＋       1mmol/L

NTB        0.2g/L

pH         7.50

（3）反应混合物的吸光度受蛋白质影响，故甘氨胆酸钠标准液配制于混合血清中。混合血清中原有胆汁酸及其他可能参与反应的物质需设P管消去。

（4）3αHSD制品中含有二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT），酶制剂用量过多时可影响NTB的还原。

（5）本法线性达250μmol/L。如血清胆汁酸超过此值应作适当稀释。

（6）Noigen ET180是一种非离子表面活性剂，化学名为聚氧乙烯油醚（polyoxyethyleneolylether），为日本京都Daiichi Kogyo Seiyaku公司产，加入反应混合物中可防止沉淀，不影响3αHSD及黄递酶活性，不影响本测定系统的敏感性。

（7）血清中的TBA含量较低，标本中含大量的干扰物质，其中最主要的是乳酸脱氢酶（LDH）。LDH能影响NAD＋的还原反应，由LDH生成的NADH往往比由3αHSD催化TBA参与的反应生成的NADH量要大的多。由于各类肝炎均可引起血清LDH升高，因此测定中必须消除LDH的影响，方法有：血清67℃加温30min、加草酸作为LDH的封闭剂、堿或酸处理、或用丙酮酸钠抑制LDH活性等，其中以丙酮酸钠法最好。其它还原性物质的干扰通过设立双试剂，样品先和不加3αHSD的体系孵育，使样品中的干扰物质反应，然后加入3αHSD，使TBA反应，可排除干扰。

13 相关疾病

黄疸

肝硬化