苯酚硫酸法测定总糖和dns法测定还原糖的区别
用苯酚-硫酸法测定糖的原理是使多糖在浓硫酸条件下先水解成单糖并脱水，然后再加入苯酚，苯酚与脱水后的单糖缩合形成有色化合物，在490nm处有最大吸收，在一定范围内其吸光度值和糖的浓度成正比，即可用吸光光度法分析出处理后的溶液中单糖的含量。根据以上原理可知苯酚-硫酸法测定的实际上是总糖。
DNS 法为在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
没有加浓硫酸啊。
10mg/mL标准葡萄糖溶液：
精密称取无水葡萄糖1.0000置80mL蒸馏水中搅拌溶解，待完全溶解后定容至100mL。标记为10mg/mL的标准葡萄糖溶液，同时标记配制日期，4℃条件下保存。
DNS试剂的配制
称取3,5-二硝基水杨酸31.50g缓慢加入5000mL蒸馏水中，不断搅拌，水浴至45℃，逐步加入1000mL氢氧化钠溶液（e），不断搅拌至溶液清澈透明（在加入氢氧化钠溶液过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸钾钠910.0g、苯酚25.0 g、无水亚硫酸钠25.0 g，继续45℃水浴加热，同时补水3000mL，不断搅拌，至上述物质完全溶解后，冷却至室温，并定容到10000 mL。用滤布过滤，将滤液储存于棕色瓶中，标识名称和配制日期，避光，室温保存7天后可以使用。有效期6个月。
分析步骤：
标准曲线的绘制：
取8支试管按下表加入相关试液后再加入1.5mLDNS试剂,充分摇匀，置沸水浴中反应5min。迅速冷却至室温，用水定容至5.0mL，用0号试管试液作对照，在540nm波长下测其它各试管试液的吸光度。以吸光度为纵坐标，以葡萄糖含量为横坐标绘制标准曲线。
试管号
0
1
2
3
4
5
6
7
缓冲液加入量（μL ）
1000
990
985
980
975
970
965
960
葡萄糖标准液加入量（μL ）
0
10
15
20
25
30
35
40
葡萄糖含量（μg）
0
100
150
200
250
300
350
400
DNS试剂的配方是：称取3，5-二硝基水杨酸3.15 g(化学纯)，加水500 mL。搅拌5 s，水浴至45 ℃。然后逐步加入100 mL 0.2g/ mL的氢氧化钠溶液，同时不断搅拌。
DNS试剂，一种可用于物质中还原糖含量测定的试剂。
Ghose法 DNS试剂的配制
甲液：将6.9 g结晶苯酚溶于15.2 mL10%NaOH溶液，蒸馏水稀释至69 mL，在此溶液中加入6.9 g亚硫酸氢钠。
乙液：将255 g酒石酸钾钠溶于300 mL10%NaOH溶液中，再加入880 mL1%的3，5-二硝基水杨酸溶液。
将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，储于棕色瓶中放置7-10 d后使用。在棕色瓶内保存一年有效。
dns，即3，5-二硝基水杨酸．在酶活的测定中担任显色剂的作用。dns能与木糖反应生成有色络合物，从而用于比色测定。dns试剂的配制方法如下。称取10g
3，5．二硝基水杨酸济于水中，全部溶解后，加入20
g
naoh、200g酒石酸钠，加人蒸馏水，使总体积至500ml左右，加热溶解后，加2
g苯酚、o．5g无水亚硫酸钠，加热搅拌至全部溶解，冷却，甩水稀释至1000ml，储于棕色瓶中，1周后使用。
编辑本段DNS试剂配制标准
Ghose法 DNS试剂的配制
甲液：将6.9 g结晶苯酚溶于15.2 mL10%NaOH溶液,蒸馏水稀释至69 mL,在此溶液中加入6.9 g亚硫酸氢钠.乙液：将255 g酒石酸钾钠溶于300 mL10%NaOH溶液中,再加入880 mL1%的3,5-二硝基水杨酸溶液.将甲乙二溶液混合即得黄色试剂,储于棕色瓶中放置7-10 d后使用.在棕色瓶内保存一年有效.
轻工业部标准DNS试剂的配制
称取3,5—二硝基水杨酸(10土0.1) g,置于约600 mL水中,逐渐加入氢氧化钠10 g,在50 ℃水浴中(磁力)搅拌溶解,再依次加入酒石酸甲钠200 g、苯酚(重蒸)2 g和无水亚硫酸钠5 g,待全部溶解并澄清后,冷却至室温,用水定容至1000 mL,过滤.贮存于棕色试剂瓶中,于暗处放置7 d后使用.
农业部标准DNS试剂的配制
称取3,5-二硝基水杨酸3.15 g(化学纯),加水500 mL.,搅拌5 s,水浴至45 ℃.然后逐步加入100 mL 0.2g/ mL的氢氧化钠溶液,同时不断搅拌.直到溶液清澈透明(注意：在加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48℃).再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0 g、苯酚2.50 g和无水亚硫酸钠2.50 g.继续45 ℃水浴加热,同时补加水300 mL,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解.停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000 mL.用烧结玻璃过滤器过滤.取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存.室温下存放7 d后可以使用,有效期为6个月.
DNS试剂用途：
1.在生化试验中,DNS常用于还原糖含量的测定.2.也可用于生物质中半纤维素含量的测定.它们均要与标准葡萄糖曲线进行比对.
围内,吸收值与糖浓度呈线性关系,从而可比色测定其含量。苯酚比色不能排除还原性杂质(包括单糖)的干扰,且显色剂极
易氧化而影响比色。
3
,5一二硝基水
杨酸法(DNs法),选用以
水解前测得空白值校正水解后样品测定值,达到消除还原性杂质干扰的效果
两种不同的DNS配制方法，加苯酚和无水硫酸钠，目的为提高显色色度。与不加苯酚和无水硫酸钠的DNS相比，吸光值高于后者。标准曲线回归方程斜率大于后者，既产生的比色常数也低于后者。
