如何用化学方法鉴别胆固醇，胆酸，黄体酮，雌二醇
苯酚的鉴别可滴加溴水，如有白色沉淀的是苯酚，因为生成了三溴苯酚沉淀。苄胺、N-甲基苯胺和N、N-二甲基苯胺分属于伯胺、仲胺和叔胺，可用兴土堡试验 ：可用苯磺酰氯或甲基苯磺酰氯为试剂， 苯磺酰氯与伯胺作用，生成苯磺酰伯胺，显酸性，能溶于稀碱中 苯磺酰氯与仲胺作用，生成苯磺酰仲胺，呈中性，在稀碱中生成沉淀析出 叔胺在碱性条件下不与苯磺酰氯反应。叔胺是碱性物质，可溶于酸中 也可用亚硝酸试验：苄胺是脂肪族伯胺，与亚硝酸作用生成醇并放出氮气 ，反应式：RNH2+HNO2→+H2O+N2↑ N-甲基苯胺是仲胺，与亚硝酸作用生成N-亚硝酸仲胺，是难溶于水的黄色油状物或低熔点固体。 N、N-二甲基苯胺是芳叔胺，与亚硝酸作用，生成对亚硝基芳叔胺盐酸盐，呈红棕色溶液或橙黄色固体，再用碱中和后得到绿色的对-亚硝酸基芳叔胺。
一、胆固醇测定的方法包括：直接皂化比色法、氧化酶法、气相色谱法、高效液相色谱法。本实验使用的是直接皂化比色法。
1.直接皂化比色法：当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因此可先对食品样品进行皂化和提取，用硫磷铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。步骤：①抽提；②皂化；③毛地黄皂苷沉淀纯化；④显色比色四个阶段。
2.氧化酶法：血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。步骤：在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm•处测定。
3.气相色谱法：取样时，由于气相色谱仪进样少，应严格控制样品质量。由于内标物5-α-胆甾烷不被皂化，可先加入与样品混匀。利用皂化反应RCOOR′+NaOH→RCOONa+ROH的原理，使样品中的主要成分油脂通过遇苛性碱水解成用来制造肥皂脂肪酸钠或钾和甘油，而非皂化物胆固醇和内标物仍稳定存在。利用皂化的水解产物（脂肪酸钠或钾和甘油）易溶于水而胆固醇和内标物不溶于水的特点进行萃取，得到溶有胆固醇和内标物的石油醚溶液。弃去的的水相经两次石油醚提取后基本回收残留在水相中的胆固醇和内标物。得到的石油醚溶液进行吹干后可取1μL进行气相色谱法检测。
4.高效液相色谱法：提要样品中胆甾醇用适当有机溶剂提取，得到胆甾醇和脂类物质的混合物，经皂化后除去脂类干扰物，再用适当的有机溶剂提取胆甾醇，以高效液相色谱仪测定 。
二、实验中样品皂化的作用是：
利用皂化反应RCOOR′+NaOH→RCOONa+ROH的原理，使样品中的主要成分油脂通过遇苛性碱水解成用来制造肥皂脂肪酸钠或钾和甘油，而非皂化物胆固醇和内标物仍稳定存在。利用皂化的水解产物（脂肪酸钠或钾和甘油）易溶于水而胆固醇和内标物不溶于水的特点进行萃取，从而去除其他脂类干扰物，减少干扰，提高测试精度。
比色法
1.原理
固醇类化合物与酸试剂作用，可脱水，发生聚合反应并产生强的颜色反应。
2.适用范围
此方法适用于动物性食物中胆固醇的测定。
3.仪器
（1）实验室常用设备
（2）分光光度计
（3）电热恒温水浴
4.试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水，均为蒸馏水。
（1）石油醚
（2）无水乙醇
（3）浓硫酸
（4）冰乙酸(优级纯）
（5）磷酸
（6）胆固醇标准（美国Sigma公司）
标准储备液：准确称取胆固醇100mg，（胆固醇标准开启后放在干燥器内）溶于冰乙酸中，并定溶至100ml。其浓度为1g/L。可保存2个月。
标准工作液：取标准储备液10ml，用冰乙酸定溶至100ml。其浓度为0.1g/L。此液用时临时配制。
（7）铁矾显色液：
储备液：溶解4.463克硫酸铁铵〔FeNH4（SO4）2·12H2O〕于100ml 85%磷酸中贮于干燥器内，此溶液在室温中稳定。
* 铁矾储备液须在实验前两周配制，因硫酸铁铵不易溶解，每天要进行短时间的振摇待溶质完全溶于磷酸后再定溶到体积。
工作液：吸取储备液10ml用浓硫酸稀释到100ml。贮于干燥器内。
（8）氢氧化钾50%溶液：溶解50g氢氧化钾于水中，定溶至100ml。
（9）氯化钠5%溶液：溶解5克氯化钠于水中，定溶至100ml。
（10）纯氮（99.99%）
5.操作步骤
5.1样品脂肪的提取与测定：根据食物种类分别用索氏提取法、研磨法和罗高氏法提取脂肪，并计算出每100克食物中脂肪含量。
5.2样品胆固醇的测定：准确称取提取的油脂3-4滴（约含胆固醇300-500μg） 取样量可按样品中胆固醇的浓度增减。置于25ml试管内，加入4ml无水乙醇，0.5ml50%氢氧化钾，在65℃恒温水浴中皂化1小时。皂化时每隔20-30分钟振摇一次使皂化完全。皂化完毕，取出试管，冷却。加入3ml 5%氯化钠、10ml石油醚，盖紧玻璃塞，振摇2分钟，静置分层（一般需1小时以上）。
取上层石油醚2ml，置于10ml具玻璃塞的试管内，在65℃恒温水浴中用氮气吹干，加入4ml冰乙酸，2ml铁矾显色液，混匀，放置15分钟后560-575nm下比色。
5.3标准曲线：准确吸取胆固醇工作液0；0.5；1.0；1.5；2.0ml分别置于10ml试管内，在各管内加入冰乙酸，使总体积达4ml。沿管壁加2ml铁矾显色液，混匀，在15-90分钟内，560-575nm下比色。
6.分析结果
样品中胆固醇含量（mg/100g）=C×V/V'×1/W×F/1000
式中
C=测得的光密度值在胆固醇标准曲线上显示的胆固醇量（μg）
V=石油醚总体积（ml）
V'=取出的石油醚体积（ml）
W=称取油脂重量（g）
F=样品的脂肪含量（g/100g）
1/1000=折算成每100克食物中胆固醇的毫克数。
7.注意事项
同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的10%。
jí dī mì dù zhī dàn bái dǎn gù chún
2 英文参考very lowdensity lipoprotein cholesterol
3 概述极低密度脂蛋白胆固醇主要由肝脏合成，其重要的功能是运输内源合成的三酰甘油。其降解受饮食、肠肝组织、毛细血管内壁肾上腺素等因素的影响。
4 极低密度脂蛋白胆固醇的别名极低密度脂蛋白胆固醇；VLDLC
5 极低密度脂蛋白胆固醇的医学检查5.1 检查名称极低密度脂蛋白胆固醇
5.2 分类
血液生化检查 >脂类测定
5.3 极低密度脂蛋白胆固醇的测定原理第一反应（nonLDL胆固醇的消除）
当样品与R1酶显色剂混合时，试剂中的聚阴离子和两性离子表面活性剂保护LDL不与实际中的酶反应，仅仅作用与nonLDL脂蛋白[包括乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）和高密度脂蛋白（LDL）]反应，释放胆固醇，与酶作用产生的过氧化化氢因缺乏色原被过氧化物酶分解成水而消除。
第二反应（LDL胆固醇的显色反应）
当加入R2反应液时，试剂中的CHE和CHO仅仅与LDLC反应，LDLC发生酶反应产生的过氧化化氢，在POD参与下与HDAOS和4氨基安替比林氧化缩合成有色化合物。通过测定生成的蓝色化合物在600nm处的吸光度，与LDLC的校准比较，可计算出样品中LDLC的浓度。
5.4 试剂样品采集：
血清或血浆。样品采集后应即可检验。反复冻融的样品，其脂蛋白会变性。肝素、枸橼酸、草酸盐、EDTA、氟化钠在常规使用量上对测定值不产生影响。
5.5 操作方法可报告范围：
本试验的可报告范围为0.026～10.3mmol/L（1～4000mg/dl）。超出此范围应用生理盐水稀释重新测定，结果乘以稀释倍数。
5.6 正常值电泳法：0.08～0.41mmol/L。
5.7 化验结果临床意义（1）升高：家族性Ⅳ型高脂蛋白血症、糖尿病、胰腺炎、尿毒症、肾病综合征、肾炎、妊娠、服用避孕药、雌激素、孕激素、饮酒、肥胖。
（2）降低：肝功能异常。
5.8 附注饮酒、肥胖、服用雌激素、孕激素、避孕药等，可使极低密度脂蛋白胆固醇升高。
5.9 相关疾病
