苯酚硫酸显色剂怎么配

多糖在酶作用下水解成单糖分子,并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物,在适当波长下和一定浓度范

围内,吸收值与糖浓度呈线性关系,从而可比色测定其含量。苯酚比色不能排除还原性杂质(包括单糖)的干扰,且显色剂极

易氧化而影响比色。

3

,5一二硝基水

杨酸法(DNs法),选用以

水解前测得空白值校正水解后样品测定值,达到消除还原性杂质干扰的效果

两种不同的DNS配制方法，加苯酚和无水硫酸钠，目的为提高显色色度。与不加苯酚和无水硫酸钠的DNS相比，吸光值高于后者。标准曲线回归方程斜率大于后者，既产生的比色常数也低于后者。

没有加浓硫酸啊。

10mg/ml标准葡萄糖溶液：

精密称取无水葡萄糖1.0000置80ml蒸馏水中搅拌溶解，待完全溶解后定容至100ml。标记为10mg/ml的标准葡萄糖溶液，同时标记配制日期，4℃条件下保存。

dns试剂的配制

称取3,5-二硝基水杨酸31.50g缓慢加入5000ml蒸馏水中，不断搅拌，水浴至45℃，逐步加入1000ml氢氧化钠溶液（e），不断搅拌至溶液清澈透明（在加入氢氧化钠溶液过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸钾钠910.0g、苯酚25.0

g、无水亚硫酸钠25.0

g，继续45℃水浴加热，同时补水3000ml，不断搅拌，至上述物质完全溶解后，冷却至室温，并定容到10000

ml。用滤布过滤，将滤液储存于棕色瓶中，标识名称和配制日期，避光，室温保存7天后可以使用。有效期6个月。

分析步骤：

标准曲线的绘制：

取8支试管按下表加入相关试液后再加入1.5mldns试剂,充分摇匀，置沸水浴中反应5min。迅速冷却至室温，用水定容至5.0ml，用0号试管试液作对照，在540nm波长下测其它各试管试液的吸光度。以吸光度为纵坐标，以葡萄糖含量为横坐标绘制标准曲线。

试管号

0

1

2

3

4

5

6

7

缓冲液加入量（μl

）

1000

990

985

980

975

970

965

960

葡萄糖标准液加入量（μl

）

0

10

15

20

25

30

35

40

葡萄糖含量（μg）

0

100

150

200

250

300

350

400

通用薄层板色谱显色剂 ①硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液1.5mol/L硫酸溶液与0.5-1.5mol/L硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。 ②0.5%碘的氯仿溶液 对很多化合物显黄棕色

选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：

Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,

Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate

展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。

一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。

很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。

我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。（选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。）分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。温度，湿度对分离效果影响也很明显，在实验中我们发现有时同一展开条件，上下午的Rf截然不同展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑在进行薄层层析时，首先应该知道未知化学成分的类型，其极性的大致归属，从提取液或从色谱柱的流动相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性不同大致分，然后细分，对于分离未知的化学物质，展开剂的选择也是一个摸索的过程，不应该仅仅从展开剂考虑，多因素综合衡量！

溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂。洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。

在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附。然后渐增大溶剂的极性。这种极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。如果极性增大过诀（梯度太大），就不能获得满意的分离。溶剂的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数（ε）来表示。介电常数高，洗脱能力就大。以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶、氧化铝。对非极性吸附剂，如活性炭，则正好与上述顺序相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用，较在脂溶性溶剂中为强。

3．被分离物质的性质：被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此紧密相连。在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直接与被分离物质的结构与性质有关。对极性吸附剂而言，成分的极性大，吸附住强。

当然，中草药成分的整体分子观是重要的，例如极性基团的数目愈多，被吸附的住能就会更大些，在同系物中碳原子数目少些，被吸附也会强些。总之，只要两个成分在结构上存在差别，就有可能分离，关键在于条件的选择。要根据被分离物质的性质，吸附剂的吸附强度，与溶剂的性质这三者的相互关系来考虑。首先要考虑被分离物质的极性。如被分离物质极性很小为不含氧的萜烯，或虽含氧但非极性基团，则需选用吸附性较强的吸附剂，并用弱极性溶剂如石油醚或苯进行洗脱。但多数中药成分的极性较大，则需要选择吸附性能较弱的吸附剂（一般Ⅲ～Ⅳ级）。采用的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增，或可应用薄层层析以判断被分离物在某种溶剂系统中的分离情况。此外，能否获得满意的分离，还与选择的溶剂梯度有很大关系。现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系。如有多组分的混合物，象植物油脂系由烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份。当以硅胶为吸附剂时，使油脂被吸附后选用一系列混合溶剂进行洗脱，油脂中各单一成分即可按其极性大小的不同依次被洗脱。

又如对于C-27甾体皂甙元类成分，能因其分字中羟基数目的多少而获得分离：将混合皂甙元溶于含有5％氯仿的苯中，加于氧化铝的吸附柱上，采用以下的溶剂进行梯度洗脱。如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代氧化铝，由于硅酸镁的吸附性较弱，洗脱剂的极牲需相应降低，亦即采用苯或含5％氯仿的苯，即可将一元羟基皂甙元从吸附剂上洗脱下来。这一例子说明，同样的中草药成分在不同的吸附剂中层析时，需用不同的溶剂才能达到相同的分离效果，从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成分三者的相互关系。

（二）簿层层析：薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析基本相似。

1．薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较。

2．吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同。主要区别在于薄层层析要求吸附剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250目，并要求粒度均匀。用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高，以Ⅱ～Ⅲ级为宜。而展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩短，一般不超过10厘米，否则可引起色谱扩散影响分离效果。

3．展开剂的选择：薄层层析，当吸附剂活度为一定值时（如Ⅱ或Ⅲ级），对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于展开剂的选择。中草药化学成分在脂溶性成分中，大致可按其极性不同而分为无极性、弱极性、中极性与强极性。但在实际工作中，

显色剂：

碘：

适用于不饱和或者芳香族化合物

配制方法：在100ml 广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。

或者在瓶中，加入10g 碘粒，30g 硅胶

高锰酸钾

适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛

配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH +

200mL 水. 使用期3 个月

磷钼酸(PMA)

广谱

配制方法：10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇

紫外灯

适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物

硫酸铈：

生物碱

配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液

氯化铁

苯酚类化合物

配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.

桑色素(羟基黄酮)

广谱, 有荧光活性

配制方法：0.1% 桑色素+甲醇

茚三酮

适用于氨基酸

配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸

二硝基苯肼(DNP)

适用于醛和酮

配制方法：12g 二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸+ 80mL 水+ 200mL

乙醇

香草醛(香兰素)

广谱

配制方法：15g 香草醛+ 250mL 乙醇+2.5mL 浓硫酸

溴甲酚绿

适用于羧酸，pKa<=5.0

配制方法：在100ml 乙醇中，加入0.04g 溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH 水溶液，刚好出现蓝色即至。

钼酸铈

广谱

配制方法：235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL

浓硫酸

茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1

广谱

配制方法：135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL

茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.

茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2

适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)

配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)经常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整

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你真是个行外人！

先说你补充的问题，很有意思。石油醚（60~90℃）这个指的是石油醚的沸程，并不是说是在60~90℃的时候加入石油醚，石油醚还有一种是30~60℃沸程的。怎么配制就不多说了吧，选择好了石油醚，加入适当的乙酸乙酯就可以了。

再说1%香草醛浓硫酸，我们一般是用1g的香草醛加到60%的硫酸100ml中。

配制方法：15g香草醛+250ml乙醇+2.5ml浓硫酸

5g香草醛，硫酸溶解后定容至100ml这样配置会出现这样的结果（水与硫酸在一起配置会把香草醛炭化掉）。我是这样配制配制5％香草醛硫酸试液：5g香草醛，用10%硫酸乙醇100ml（无水乙醇）。显色效果很好

用法调配

①调配：3%=10°；6%=20°；9%=30°；12%=40°。②作用：10°（3%）双氧奶起染深的作用；20°（6%）双氧奶可染浅1个色度并覆盖白发；30°（9%）双氧奶可染浅2~3个色度；40°（12%）双氧奶起染浅4~5个色度及漂浅褪色的作用。

颜色理论

颜色是由物体发射、反射或透过的光波通过视觉产生的印象。颜色的纯度和明度叫色度。反映颜色的冷暖感叫光感。掌握颜色的基本理论，对提高漂染技术，创造优美发型具有重要意义。

主色（一等色）：

红、黄、蓝是三种基本色彩，任何颜色均由这三种主色混合而成，三种主色相加等于黑色。

副色（二等色）：

是由主色中的其中两种色相加而成，即"红+黄=橙色"、"红+兰=紫色"、"黄+兰=绿色"。

调合色或互补色（三等色）：

等量的一等色和等量的二等色可混合三等色。如等量一等色和二等色混合可调成棕色，但有些相对的颜色含有互相抵消的作用，抵消后的结果可配合成较深的灰色。

问题一：苯酚是什么？ 苯酚（C6H6O，PhOH），又名石炭酸、羟基苯，是最简单的酚类有机物，一种弱酸。常温下为一种无色晶体。有毒。有腐蚀性，常温下微溶于水

易溶于有机溶液；当温度高于65摄氏度时，能跟水以任意比例互溶，其溶液沾到皮肤鸡用酒精洗涤。暴露在空气中呈粉红色。

苯酚是一种常见的化学品，是生产某些树脂、杀菌剂、防腐剂以及药物（如阿司匹林）的重要原料。

问题二：用什么试剂鉴定苯酚 苯酚与溴水反应生成白色沉淀（三溴苯酚）

可以用氯化铁溶液检验苯酚，加入氯化铁后可观察到溶液变成紫色。苯酚与溴水反应生成三溴苯酚白色沉淀。

问题三：苯酚有什么作用和用途 苯酚是重要的有机化工原料，用它可制取酚醛树脂、己内酰胺、双酚A、水杨酸、苦味酸、五氯酚、2,4-D、己二酸、酚酞n-乙酰乙氧基苯胺等化工产品及中间体，在化工原料、烷基酚、合成纤维、塑料、合成橡胶、医药、农药、香料、染料、涂料和炼油等工业中有着重要用途。此外，苯酚还可用作溶剂、实验试剂和消毒剂,苯酚的水溶液可以使植物细胞内染色体上蛋白质与DNA分离，便于对DNA进行染色。

问题四：测甲醛用的酚试剂是苯酚吗 反应原理：空气中的甲醛与3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(简称酚试剂)反应生成嗪,嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物.颜色深浅与甲醛含量成正比,通过比色定量.反应中,Fe3+为氧化剂和显色剂,一般采用硫酸铁铵的酸性溶液.

问题五：刚买的苯酚是固体的 怎么配试剂啊 苯酚在室温先是固体。用干净的改锥或应的药勺将其捣松后移取称量。

问题六：苯酚的用途有哪些？ 苯酚是一种重要的有机合成原料，可用来制取酚醛塑料(电木)、合成纤维(锦纶)、医药、染料、农药等。苯酚可凝固蛋白质，有杀菌效力，苯酚稀溶液是医药上最早使用的喷洒消毒剂。

望采纳谢谢

问题七：怎么检验苯酚 可用溴(生成白色沉淀三溴苯酚)

或者用FeCl3(生成［Fe(C6H5O)6]3-络离子呈紫色)

acd都含有酚羟基，能与FeCl3溶液显色。b不能显色。所以先区分出b来。 acd三种物质，d含有葡萄糖基—glc，所以能与斐林试剂显色，ac不能。 ac两种物质，先酸性水解，使其内酯环打开生成一个新的酚羟基，然后再用Gibb’s或Emerson反应加以鉴别。a能...。1、加热显色； 2、碘蒸气熏显色； 3、喷显色剂（如香草醛浓硫酸）。显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂；另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。显色剂种类繁多，本章只能列举一些常用的显色剂。 l．通用显色剂 ①硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇...。显色指数由高到低分为1A（Ra90-100）-需要色彩精确对此的场所；1B（Ra80-89）需要色彩正确判断的场所；（优良）2（Ra60-79）需要中等显色性的场所；3（Ra40-59）对显色性的要求较低，色差较小的场所；（普通）4（Ra20-39）对显色性无具体要求的...。那个我来吧！ 第一 三价铁的显色反应，遇苯酚变紫（用作鉴别三价铁的方法之一） 第二 蛋白质的显色反应，雨浓硝酸变黄（很贴近生活） 第三 三价铁的显色反应，遇硫氢根离子形成络合物变红 第四 二价铁离子的显色反应，遇双氧水变黄（绿色的菠菜...。很多办法。 碘熏法。紫外吸收法。高锰酸钾显色法。溴甲酚绿显色法。乙醇/硫酸显色法。 还有其它一些不太常用的专用显色法。。氨基酸 一、定义： 氨基酸（amino acids）：生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连在α-碳上。 氨基酸的结构通式：氨基酸是指一类含有羧基并在与...。试试我的配方吧： 底物显色A液：醋酸钠13.6g ,柠檬酸1.6g,30%双氧水0.3ml,蒸馏水加至500ml. 底物显色B液 :乙二胺四乙酸二钠0.2g,柠檬酸0.95g,甘油 50ml,取0.15g TMB溶于3mlDMSO中,蒸馏水加至500ml. 注意避光保存，使用的时候根据需要量取等量AB...。TMB有TMB和TMB盐酸之分，一个可以用无水乙醇溶解，一个是用水溶解的，弄清这两个，其他的就没问题。 配制方法可以见如下： 此制法绝对没问题，只要你买的试剂没问题的就行了（干粉放一年会变色，...。现在的试剂盒一般都是辣根过氧化物酶(HRP)，一般需要结合抗体或者亲和素化。它所对应的显色剂常用两种，邻苯二胺(OPD）和四甲基联苯胺(TMB），两者的区别就是酶标仪读板的吸光度不同。没有同时使用两种显色剂的说法，只是TMB显色剂可成A液和B液...